Beziehung zwischen subklinischer Hypothyreose und Schwangerschaftsausgang (GravThyr)

Ziel ist es, die Beziehung zwischen SH und Spontanabort und/oder geburtshilflichen Komplikationen aufgrund einer mitochondrialen Dysfunktion abzuschätzen.

1. Eine prospektive Studie, in der Daten aus der allgemeinen Vorstadtbevölkerungsstudie in Naestved analysiert werden, um die Häufigkeit von subklinischer Hypothyreose (SH) und TPOab zu messen. SH ist definiert als erhöhte Serumkonzentrationen von TSH > 3,4 mU/l und normale Spiegel von freiem T4 und T3. Für TPOab wird ein Cut-off von 60 mU/l verwendet.
2. Um die Beziehung zwischen SH oder TPOab und frühem Spontanabort und Schwangerschaftsausgang abzuschätzen. Einschluss von Frauen, die mindestens einen frühen spontanen Abort erlitten haben und zwischen 20 und 50 Jahre alt sind: 50 Frauen, die SU- und/oder TPOab-positiv sind, und 50 Frauen, die normale TSH- und TPOab-negative Werte haben. Der basale Sauerstoffverbrauch wird gemessen und die Mitochondrienfunktionen werden mittels Durchflusszytometrie bestimmt.
3. Abschätzung der Prävalenz von Schwangerschaftshypertonie und Präeklampsie bei Schwangeren mit subklinischer Hypothyreose und Abschätzung der Mitochondrienfunktion. Mindestens 100 schwangere Frauen ohne Schilddrüsenerkrankung oder Diabetes werden eingeschlossen.

Früher spontaner Schwangerschaftsabbruch ist definiert als Schwangerschaftsabbruch vor der 12. Schwangerschaftswoche. Komplikationen in der Geburtshilfe sind definiert als Präeklampsie (Proteinurie, Ödem, Hypertonie), schwangerschaftsinduzierte Hypertonie, Plazentainsuffizienz (IUGR) und Abbruch, Frühgeburt und Totgeburt. Diese Komplikationen werden aus den Daten der geburtshilflichen Zeitschriften analysiert.

Messung des Sauerstoffverbrauchs:

Atemgasanalyse und Volumenmessungen wurden mit einem Baldachin durchgeführt, der durch einen Dreifach-V (Flow/Gas-Sensor) mit einem Oxycon-Gerät (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Niederlande) verbunden war. Die Ausrüstung wurde vor jedem Test kalibriert, um Umgebungsbedingungen wie Luftdruck, Temperatur und Feuchtigkeit zu kompensieren. Die basale VO2 wurde nach mindestens 6 Stunden Fasten gemessen. Vor dem Test wurde der individuelle Ruhepuls ermittelt und die Teilnehmer ca. 30 min auf einem Stuhl geruht. Der Testraum war ruhig und die Beleuchtung war gedämpft. Den Probanden wurde ausreichend Zeit gegeben, sich mit dem Gerät und den Verfahren vertraut zu machen, und der Test wurde gestartet, wenn der Ruhepuls erreicht war. Der Sauerstoffverbrauch wurde gemessen, wenn die Aufnahme pro Minute konstant blieb. Die Messungen wurden für wiederholte Perioden von 30 Sekunden für 20 Minuten durchgeführt. Die Methode zur Aufzeichnung der Sauerstoffaufnahme hatte eine Schwankung von 0,8 % innerhalb eines Tages und eine Schwankung von 5,8 % von Tag zu Tag.

Messung der mitochondrialen Masse (MM) und des mitochondrialen Membranpotentials (MMP) durch Durchflusszytometrie:

Dem Patienten wurde venöses Blut in EDTA-Vacutainer-Röhrchen entnommen. Von jedem Patienten wurden 2 Proben von 100 &mgr;l Blut verarbeitet. Ein ungefärbtes Kontrollröhrchen und ein gefärbtes wurden analysiert.

Den zu färbenden Proben wurde 1 &mgr;l Pacific Blue Mouse Anti-Human Anti-CD14 (BD Biosciences, Dänemark) zugesetzt und gemischt. Die Röhrchen wurden für 30 Minuten bei Raumtemperatur geschützt vor direktem Licht inkubiert und anschließend gewaschen.

Die gefärbten Zellen wurden in 890 &mgr;l PBS resuspendiert und mit 10 &mgr;l 1 &mgr;M MTG (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Dänemark) und 100 &mgr;l 1 &mgr;M TMRM (Tetramethylrhodaminmethylester, Invitrogen A/S, Dänemark) versetzt. Alle Stammlösungen wurden in DMSO (Dimethylsulfoxid) gelöst und Arbeitslösungen wurden in PBS verdünnt. Nach dem Mischen wurden die Proben 30 Minuten bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubiert.