Relatie tussen subklinische hypothyreoïdie en uitkomst van de zwangerschap (GravThyr)

Het doel is om de relatie tussen SH en spontane abortus en/of obstetrische complicaties als gevolg van mitochondriale disfunctie te schatten.

1. Een prospectieve studie waarbij gegevens van de General Suburban Population Study in Naestved zullen worden geanalyseerd om de frequentie van subklinische hypothyreoïdie (SH) en TPOab te meten. SH wordt gedefinieerd als verhoogde serumconcentraties van TSH > 3,4 mU/l en normale niveaus van vrij T4 en T3. Voor TPOab wordt een grenswaarde van 60 mU/l gehanteerd.
2. Om de relatie tussen SH of TPOab en vroege spontane abortus en zwangerschapsuitkomst te schatten. Inclusie van vrouwen die minimaal één vroege spontane abortus hebben ondergaan en tussen de 20 en 50 jaar oud zijn: 50 vrouwen met SU- en/of TPOab-positieve en 50 vrouwen met normale niveaus van TSH en TPOab-negatief. Het basale zuurstofverbruik zal worden gemeten en de mitochondriale functies zullen worden bepaald door middel van flowcytometrie.
3. Schatting van de prevalentie van zwangerschapshypertensie en pre-eclampsie bij zwangere vrouwen met subklinische hypothyreoïdie en de mitochondriale functie. Er zullen minimaal 100 zwangere vrouwen zonder schildklierziekte of diabetes worden opgenomen.

Vroege spontane abortus wordt gedefinieerd als abortus vóór 12 weken zwangerschap. Obstetrische complicaties worden gedefinieerd als pre-eclampsie (proteïnurie, oedeem, hypertensie), door zwangerschap veroorzaakte hypertensie, placenta-insufficiëntie (IUGR) en -abruptie, vroeggeboorte en doodgeboorte. Die complicaties zullen worden geanalyseerd op basis van de gegevens van de verloskundige tijdschriften.

Meting van zuurstofverbruik:

Ademhalingsgasanalyse en volumemetingen werden uitgevoerd met een omkasting die door een triple V (flow/gassensor) was verbonden met een Oxycon-apparaat (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Nederland). De apparatuur werd vóór elke test gekalibreerd om te compenseren voor omgevingsomstandigheden zoals luchtdruk, temperatuur en vochtigheid. Basale VO2 werd gemeten na ten minste 6 uur vasten. Voor de test werd de individuele rustpols bepaald en rustten de deelnemers ongeveer 30 minuten in een stoel. De testruimte was stil en de verlichting was gedempt. De proefpersonen kregen voldoende tijd om vertrouwd te raken met de apparatuur en de procedures en de test werd gestart toen de rustpols was bereikt. Het zuurstofverbruik werd gemeten wanneer de opname per minuut constant bleef. Metingen werden uitgevoerd gedurende herhaalde perioden van 30 seconden gedurende 20 minuten. De methode voor het meten van de zuurstofopname had een variatie binnen de dag van 0,8 % en een variatie van dag tot dag van 5,8 %.

Meting van mitochondriale massa (MM) en mitochondriale membraanpotentiaal (MMP) door flowcytometrie:

Veneus bloed werd bij de patiënt afgenomen in EDTA Vacutainer-buisjes. Van elke patiënt werden 2 monsters van 100 µl bloed verwerkt. Eén ongekleurd controlebuisje en één gekleurd controlebuisje werden geanalyseerd.

Aan de te kleuren monsters werd 1 µl Pacific Blue Mouse Anti-Human anti-CD14 (BD Biosciences, Denemarken) toegevoegd en gemengd. De buizen werden gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur, beschermd tegen direct licht, geïncubeerd en vervolgens gewassen.

De gekleurde cellen werden opnieuw gesuspendeerd in 890 µl PBS en er werd 10 µl 1 µM MTG (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Denemarken) en 100 µl 1 µM TMRM (Tetramethylrhodamine-methylester, Invitrogen A/S, Denemarken) aan toegevoegd. Alle voorraadoplossingen werden opgelost in DMSO (dimethylsulfoxide) en werkoplossingen werden verdund in PBS. Na het mengen werden de monsters gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur in het donker geïncubeerd.