Relation entre l'hypothyroïdie subclinique et l'issue de la grossesse (GravThyr)

L'objectif est d'estimer la relation entre SH et l'avortement spontané et/ou les complications obstétricales dues à un dysfonctionnement mitochondrial.

1. Une étude prospective où les données de l'étude générale sur la population suburbaine à Naestved seront analysées pour mesurer la fréquence de l'hypothyroïdie subclinique (SH) et de la TPOab. SH est défini comme des concentrations sériques élevées de TSH > 3,4 mU/l et des niveaux normaux de T4 et T3 libres. Un seuil de 60 mU/l est utilisé pour le TPOab.
2. Estimer la relation entre SH ou TPOab et l'avortement spontané précoce et l'issue de la grossesse. Inclusion des femmes ayant subi au moins un avortement spontané précoce et âgées de 20 à 50 ans : 50 femmes ayant SU et/ou TPOab positif et 50 femmes ayant des taux normaux de TSH et TPOab négatif. La consommation basale d'oxygène sera mesurée et les fonctions mitochondriales seront déterminées par cytométrie en flux.
3. Estimer la prévalence de l'hypertension gestationnelle et de la prééclampsie chez les femmes enceintes atteintes d'hypothyroïdie subclinique et estimer la fonction mitochondriale. Un minimum de 100 femmes enceintes sans maladie thyroïdienne ni diabète seront incluses.

L'avortement spontané précoce est défini comme un avortement avant 12 semaines de gestation. Les complications obstétricales sont définies comme la pré-éclampsie (protéinurie, œdème, hypertension), l'hypertension induite par la grossesse, l'insuffisance placentaire (IUGR) et le décollement, l'accouchement prématuré et la mortinaissance. Ces complications seront analysées à partir des données des revues obstétriques.

Mesure de la consommation d'oxygène :

L'analyse des gaz respiratoires et les mesures de volume ont été réalisées avec une verrière reliée par un triple V (capteur de débit/gaz) à un appareil Oxycon (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Pays-Bas). L'équipement a été calibré avant chaque test pour compenser les conditions ambiantes telles que la pression atmosphérique, la température et l'humidité. La VO2 basale a été mesurée après au moins 6 heures de jeûne. Avant le test, le pouls au repos individuel a été établi et les participants se sont reposés pendant environ 30 minutes sur une chaise. La salle de test était calme et l'éclairage était tamisé. Les sujets ont eu suffisamment de temps pour se familiariser avec l'équipement et les procédures et le test a été lancé lorsque le pouls au repos a été atteint. La consommation d'oxygène a été mesurée lorsque l'absorption par minute est restée constante. Les mesures ont été effectuées pendant des périodes répétées de 30 secondes pendant 20 minutes. La méthode d'enregistrement de la consommation d'oxygène présentait une variation intra-journalière de 0,8 % et une variation journalière de 5,8 %.

Mesure de la masse mitochondriale (MM) et du potentiel de membrane mitochondriale (MMP) par cytométrie en flux :

Le sang veineux a été prélevé sur le patient dans des tubes EDTA Vacutainer. Pour chaque patient, 2 échantillons de 100 µl de sang ont été traités. Un tube témoin non coloré et un tube coloré ont été analysés.

Les échantillons à colorer ont été ajoutés à 1 µl d'anti-CD14 Pacific Blue Mouse Anti-Human (BD Biosciences, Danemark) et mélangés. Les tubes ont été incubés pendant 30 minutes à température ambiante à l'abri de la lumière directe puis lavés.

Les cellules colorées ont été remises en suspension dans 890 µl de PBS et additionnées de 10 µl de MTG 1 µM (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Danemark) et de 100 µl de TMRM 1 µM (ester méthylique de tétraméthylrhodamine, Invitrogen A/S, Danemark). Toutes les solutions mères ont été dissoutes dans du DMSO (diméthylsulfoxyde) et les solutions de travail ont été diluées dans du PBS. Après mélange, les échantillons ont été incubés pendant 30 minutes à température ambiante dans l'obscurité.