Związek między subkliniczną niedoczynnością tarczycy a przebiegiem ciąży (GravThyr)

Celem jest oszacowanie związku między SH a samoistnymi poronieniami i/lub powikłaniami położniczymi z powodu dysfunkcji mitochondriów.

1. Prospektywne badanie, w którym zostaną przeanalizowane dane z ogólnego badania populacji podmiejskiej w Naestved w celu zmierzenia częstości subklinicznej niedoczynności tarczycy (SH) i TPOab. SH definiuje się jako podwyższone stężenie TSH w surowicy > 3,4 mU/l oraz prawidłowy poziom wolnej T4 i T3. Dla TPOab stosuje się wartość odcięcia 60 mU/l.
2. Ocena związku pomiędzy SH lub TPOab a wczesnym samoistnym poronieniem i przebiegiem ciąży. Włączenie kobiet, które doświadczyły co najmniej jednej wczesnej samoistnej aborcji, w wieku od 20 do 50 lat: 50 kobiet z dodatnim wynikiem SU i/lub TPOab oraz 50 kobiet z prawidłowym poziomem TSH i ujemnym TPOab. Zmierzone zostanie podstawowe zużycie tlenu, a funkcje mitochondriów zostaną określone za pomocą cytometrii przepływowej.
3. Ocena częstości występowania nadciśnienia ciążowego i stanu przedrzucawkowego wśród ciężarnych z subkliniczną niedoczynnością tarczycy oraz ocena funkcji mitochondriów. Uwzględnionych zostanie co najmniej 100 kobiet w ciąży bez jakiejkolwiek choroby tarczycy lub cukrzycy.

Wczesne samoistne poronienie definiuje się jako poronienie przed 12 tygodniem ciąży. Powikłania położnicze definiuje się jako stan przedrzucawkowy (białkomocz, obrzęk, nadciśnienie tętnicze), nadciśnienie indukowane ciążą, niewydolność i odklejenie się łożyska (IUGR), poród przedwczesny i poród martwego płodu. Powikłania te zostaną przeanalizowane na podstawie danych z czasopism położniczych.

Pomiar zużycia tlenu:

Analizę gazów oddechowych i pomiary objętości przeprowadzono z czaszą połączoną potrójnym V (czujnik przepływu/gazu) z aparatem Oxycon (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Holandia). Sprzęt był kalibrowany przed każdym testem, aby skompensować warunki otoczenia, takie jak ciśnienie powietrza, temperatura i wilgotność. Podstawowe VO2 mierzono po co najmniej 6 godzinach postu. Przed badaniem ustalono indywidualne tętno spoczynkowe i uczestnicy odpoczywali przez około 30 min na krześle. W pokoju testowym panowała cisza, a oświetlenie było przytłumione. Badanym dano wystarczająco dużo czasu na zapoznanie się ze sprzętem i procedurami, a test rozpoczynano po osiągnięciu tętna spoczynkowego. Zużycie tlenu mierzono, gdy pobór na minutę pozostawał stały. Pomiary wykonywano dla powtarzalnych okresów 30 sekund przez 20 minut. Metoda rejestrowania poboru tlenu miała zmienność w ciągu dnia na poziomie 0,8% i zmienność z dnia na dzień na poziomie 5,8%.

Pomiar masy mitochondriów (MM) i potencjału błony mitochondrialnej (MMP) metodą cytometrii przepływowej:

Od pacjenta pobierano krew żylną do probówek EDTA Vacutainer. Od każdego pacjenta pobrano 2 próbki po 100 µl krwi. Analizie poddano jedną niewybarwioną probówkę kontrolną i jedną wybarwioną.

Do próbek do wybarwienia dodano 1 ul Pacific Blue Mouse Anti-Human anty-CD14 (BD Biosciences, Dania) i zmieszano. Probówki inkubowano przez 30 minut w temperaturze pokojowej, chroniąc przed bezpośrednim światłem, a następnie przemyto.

Wybarwione komórki ponownie zawieszono w 890 µl PBS i dodano 10 µl 1 µM MTG (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Dania) i 100 µl 1 µM TMRM (ester metylowy tetrametylorodaminy, Invitrogen A/S, Dania). Wszystkie roztwory podstawowe rozpuszczono w DMSO (sulfotlenku dimetylu), a roztwory robocze rozcieńczono w PBS. Po wymieszaniu próbki inkubowano przez 30 minut w temperaturze pokojowej w ciemności.