Relação entre hipotireoidismo subclínico e resultado da gravidez (GravThyr)

O objetivo é estimar a relação entre HS e aborto espontâneo e/ou complicações obstétricas por disfunção mitocondrial.

1. Um estudo prospectivo onde os dados do General Suburban Population Study em Naestved serão analisados ​​para medir a frequência de hipotireoidismo subclínico (SH) e TPOab. A HAS é definida como concentrações séricas elevadas de TSH > 3,4 mU/l e níveis normais de T4 e T3 livre. Um corte de 60 mU/l é usado para TPOab.
2. Estimar a relação entre SH ou TPOab e aborto espontâneo precoce e resultado da gravidez. Inclusão de mulheres que tiveram no mínimo um aborto espontâneo precoce e com idade entre 20 e 50 anos: 50 mulheres com SU e/ou TPOab-positivo e 50 mulheres com níveis normais de TSH e TPOab-negativo. O consumo basal de oxigênio será medido e as funções mitocondriais serão determinadas por citometria de fluxo.
3. Estimar a prevalência de hipertensão gestacional e pré-eclâmpsia entre gestantes com hipotireoidismo subclínico e estimar a função mitocondrial. Serão incluídas no mínimo 100 gestantes sem nenhuma doença da tireoide ou diabetes.

O aborto espontâneo precoce é definido como aborto antes de 12 semanas de gestação. As complicações obstétricas são definidas como pré-eclâmpsia (proteinúria, edema, hipertensão), hipertensão induzida pela gravidez, insuficiência placentária (IUGR) e descolamento, parto prematuro e natimorto. Essas complicações serão analisadas a partir dos dados das revistas obstétricas.

Medição do consumo de oxigênio:

A análise dos gases respiratórios e as medições de volume foram realizadas com um dossel conectado por um triplo V (sensor de fluxo⁄gás) a um aparelho Oxycon (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Holanda). O equipamento foi calibrado antes de cada teste para compensar as condições ambientais, como pressão do ar, temperatura e umidade. O VO2 basal foi medido após pelo menos 6 horas de jejum. Antes do teste, o pulso de repouso individual foi estabelecido e os participantes descansaram por cerca de 30 minutos em uma cadeira. A sala de teste estava silenciosa e a iluminação era moderada. Os sujeitos tiveram tempo suficiente para se familiarizar com o equipamento e os procedimentos e o teste foi iniciado quando o pulso de repouso foi alcançado. O consumo de oxigênio foi medido quando a captação por minuto permaneceu constante. As medições foram realizadas por períodos repetidos de 30 segundos por 20 minutos. O método para registrar o consumo de oxigênio teve uma variação diária de 0,8% e uma variação diária de 5,8%.

Medição da massa mitocondrial (MM) e potencial de membrana mitocondrial (MMP) por citometria de fluxo:

Sangue venoso foi coletado do paciente em tubos EDTA Vacutainer. De cada paciente foram processadas 2 amostras de 100 µl de sangue. Um tubo de controle não corado e um corado foram analisados.

As amostras a serem coradas foram adicionadas de 1 µl de Anti-CD14 Pacific Blue Mouse Anti-Human (BD Biosciences, Dinamarca) e misturadas. Os tubos foram incubados por 30 minutos em temperatura ambiente protegidos da luz direta e posteriormente lavados.

As células coradas foram ressuspensas em 890 µl de PBS e adicionados 10 µl 1 µM MTG (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Dinamarca) e 100 µl 1 µM TMRM (tetrametilrodamina metil éster, Invitrogen A/S, Dinamarca). Todas as soluções estoque foram dissolvidas em DMSO (dimetil sulfóxido) e as soluções de trabalho foram diluídas em PBS. Após a mistura, as amostras foram incubadas por 30 minutos em temperatura ambiente no escuro.