Relación entre el hipotiroidismo subclínico y el resultado del embarazo (GravThyr)

El objetivo es estimar la relación entre HS y aborto espontáneo y/o complicaciones obstétricas por disfunción mitocondrial.

1. Un estudio prospectivo donde se analizarán los datos del Estudio de Población Suburbana General en Naestved para medir la frecuencia de hipotiroidismo subclínico (SH) y TPOab. La SH se define como concentraciones séricas elevadas de TSH > 3,4 mU/l y niveles normales de T4 y T3 libres. Se utiliza un punto de corte de 60 mU/l para TPOab.
2. Estimar la relación entre SH o TPOab y el aborto espontáneo temprano y el resultado del embarazo. Inclusión de mujeres que hayan sufrido al menos un aborto espontáneo temprano y entre 20 y 50 años: 50 mujeres que tengan SU y/o TPOab-positivo y 50 mujeres que tengan niveles normales de TSH y TPOab-negativos. Se medirá el consumo de oxígeno basal y se determinarán las funciones mitocondriales mediante citometría de flujo.
3. Estimar la prevalencia de hipertensión gestacional y preeclampsia en gestantes con hipotiroidismo subclínico y estimar la función mitocondrial. Se incluirán un mínimo de 100 gestantes sin ninguna enfermedad tiroidea ni diabetes.

El aborto espontáneo temprano se define como el aborto antes de las 12 semanas de gestación. Las complicaciones obstétricas se definen como preeclampsia (proteinuria, edema, hipertensión), hipertensión inducida por el embarazo, insuficiencia placentaria (IUGR) y desprendimiento, parto prematuro y muerte fetal. Esas complicaciones serán analizadas a partir de los datos de las revistas obstétricas.

Medición del consumo de oxígeno:

El análisis de gases respiratorios y las mediciones de volumen se realizaron con un dosel conectado mediante una triple V (sensor de flujo/gas) a un aparato Oxycon (Jaeger Oxycon Champion, Breda, Países Bajos). El equipo se calibró antes de cada prueba para compensar las condiciones ambientales como la presión del aire, la temperatura y la humedad. El VO2 basal se midió después de al menos 6 horas de ayuno. Antes de la prueba se estableció el pulso de reposo individual y los participantes descansaron unos 30 min en una silla. La sala de pruebas estaba en silencio y la iluminación era tenue. A los sujetos se les dio suficiente tiempo para familiarizarse con el equipo y los procedimientos y la prueba se inició cuando se alcanzó el pulso en reposo. El consumo de oxígeno se midió cuando el consumo por minuto se mantuvo constante. Las mediciones se realizaron durante períodos repetidos de 30 segundos durante 20 minutos. El método de registro del consumo de oxígeno tuvo una variación intradía de 0,8 % y una variación día a día de 5,8 %.

Medición de masa mitocondrial (MM) y potencial de membrana mitocondrial (MMP) por citometría de flujo:

Se extrajo sangre venosa del paciente en tubos Vacutainer con EDTA. De cada paciente se procesaron 2 muestras de 100 µl de sangre. Se analizaron un tubo de control no teñido y uno teñido.

A las muestras a teñir se les añadió 1 µl de anti-CD14 anti-humano de ratón azul del Pacífico (BD Biosciences, Dinamarca) y se mezclaron. Los tubos se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente protegidos de la luz directa y posteriormente se lavaron.

Las células teñidas se resuspendieron en 890 µl de PBS y se añadieron 10 µl de MTG 1 µM (MitoTracker Green FM, Invitrogen A/S, Dinamarca) y 100 µl de TMRM 1 µM (éster metílico de tetrametilrodamina, Invitrogen A/S, Dinamarca). Todas las soluciones madre se disolvieron en DMSO (sulfóxido de dimetilo) y las soluciones de trabajo se diluyeron en PBS. Después de mezclar, las muestras se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad.