無症候性甲状腺機能低下症と妊娠転帰との関係 (GravThyr)

目的は、ミトコンドリア機能障害による SH と自然流産および/または産科合併症との関係を推定することです。

1. Naestved の General Suburban Population Study からのデータを分析して、無症候性甲状腺機能低下症 (SH) および TPOab の頻度を測定する前向き研究。 SH は、血清 TSH 濃度が 3.4 mU/l を超えて上昇し、遊離 T4 および T3 が正常レベルであると定義されます。 TPOab には 60 mU/l のカットオフ値が使用されます。
2. SH または TPOab と早期自然流産および妊娠転帰との関係を推定すること。 最低 1 回の早期自然流産を経験した 20 歳から 50 歳までの女性の包含: SU および/または TPOab 陽性の 50 人の女性と、正常レベルの TSH および TPOab 陰性の 50 人の女性。 基礎酸素消費量が測定され、ミトコンドリア機能がフローサイトメトリーによって決定されます。
3. 潜在性甲状腺機能低下症の妊婦における妊娠高血圧症および子癇前症の有病率を推定し、ミトコンドリア機能を推定すること。 甲状腺疾患や糖尿病のない最低100人の妊婦が含まれます。

早期自然流産は、妊娠 12 週未満の流産と定義されています。 産科合併症は、子癇前症（タンパク尿、浮腫、高血圧）、妊娠誘発性高血圧、胎盤機能不全（IUGR）、早期産、早産、死産と定義されています。 これらの合併症は、産科ジャーナルのデータから分析されます。

酸素消費量の測定:

呼吸ガス分析と容積測定は、キャノピーをトリプル V (フロー/ガスセンサー) で Oxycon 装置 (Jaeger Oxycon Champion、ブレダ、オランダ) に接続して実行しました。 空気圧、温度、湿度などの周囲条件を補正するために、各テストの前に機器を校正しました。 最低 6 時間の絶食後に基礎 VO2 を測定しました。 テストの前に、個々の安静時の脈拍が確立され、参加者は椅子で約 30 分間休息しました。 試験室は静かで、照明は控えめでした。 被験者には、機器と手順に慣れるのに十分な時間が与えられ、安静時の脈拍が達成されたときにテストが開始されました。 酸素消費量は、1 分あたりの摂取量が一定のままのときに測定されました。 測定は、20 分間 30 秒間繰り返し実行されました。 酸素摂取量を記録する方法は、0.8% の日内変動と 5.8% の日変動を持っていた。

フローサイトメトリーによるミトコンドリア質量 (MM) およびミトコンドリア膜電位 (MMP) の測定:

EDTA Vacutainer チューブで患者から静脈血を採取した。 各患者から、100 μl の血液の 2 つのサンプルを処理しました。 染色されていない対照チューブ1本と染色されたチューブ1本を分析した。

染色するサンプルに 1 μl のパシフィック ブルー マウス抗ヒト抗 CD14 (BD Biosciences、デンマーク) を加え、混合しました。 チューブを、直射光から保護して室温で30分間インキュベートし、続いて洗浄した。

染色した細胞を 890 µl の PBS に再懸濁し、10 µl の 1 µM MTG (MitoTracker Green FM、Invitrogen A/S、デンマーク) と 100 µl の 1 µM TMRM (テトラメチルローダミン メチル エステル、Invitrogen A/S、デンマーク) を加えました。 すべての原液は DMSO (ジメチルスルホキシド) に溶解し、使用液は PBS で希釈しました。 混合後、サンプルを暗所で室温で 30 分間インキュベートしました。