Srovnávací imunoreaktivita polymerovaného beta-laktoglobulinu (ImmuneBLG)

Alergie na kravské mléko je vysilující stav s obtížnou diagnózou a zatím bez definitivního řešení, které může pacientovi předložit ošetřující lékař. Mezi desítkami bílkovin kravského mléka je beta-laktoglobulin (Bos d 5) jedním z nejalergennějších pro skutečnost, že není produkován člověkem a pro jeho těžkou stravitelnost. Alergenicita beta-laktoglobulinu u lidí je dobře prostudovaný předmět, ale málo je známo o alergenicitě biologicky zpracovaných proteinů, jako je polymerovaný beta-laktoglobulin.

Cílem této práce je studovat imunoreaktivitu polymerovaného beta-laktoglobulinu a porovnat ji s imunoreaktivitou nativního beta-laktoglobulinu u pacientů s klinickou diagnózou přecitlivělosti/nesnášenlivosti kravského mléka i bez ní. Byla použita termicky indukovaná polymerace a polymerace indukovaná transglutaminázou v přítomnosti cysteinu.

Pět skupin pacientů (tři symptomatické a dvě kontroly) pocházející ze dvou klinik odlišných charakteristik bylo studováno podle projevů symptomů a podrobeno alergickým kožním testům a imunotestům pro výzkum specifických IgE proti beta-laktoglobulinu, jakož i hodnocení imunoreaktivita zprostředkovaná buňkami provokačními testy monitorovanými testem inhibice adherence leukocytů.

Byly provedeny vedlejší kožní testy s nativním a polymerizovaným beta-laktoglobulinem u 56 dospělých s problematickou přecitlivělostí na kravské mléko, u které byla dříve diagnostikována intolerance laktózy, a také výzkum specifického IgE proti beta-laktoglobulinu pomocí ImmunoCAP a imunoblotu. Pro kontrolu techniky imunoblotu byla vybrána kontrolní skupina 20 jedinců tolerantních na kravské mléko s absencí specifického IgE proti beta-laktoglobulinu (detekovatelné pomocí ImmunoCAP nebo alergických kožních testů). Výsledky ukázaly, že analytická detekce specifického IgE imunoblotem je výrazně smysluplnější, když se v imunoanalýze použije polymerizovaný beta-laktoglobulin místo monomeru beta-laktoglobulinu. Výsledky ukázaly, že výzkum specifických IgE pomocí imunoCAP pod detekčními limity nebo absence kožní reaktivity nevylučuje možnost IgE zprostředkované hypersenzitivity, jak bylo prokázáno imunoblotem.

Side to side kožní testy s nativním a polymerizovaným beta-laktoglobulinem byly provedeny u 22 symptomatických dětí, přičemž ImmunoCAP potvrdila diagnózu alergie na beta-laktoglobulin zprostředkovanou IgE. Pro srovnání techniky kožních testů byla vytvořena odpovídající kontrolní skupina 22 asymptomatických dětí s nedetekovatelným specifickým IgE pro beta-laktoglobulin pomocí ImmunoCAP. Výsledky ukázaly, že kožní reakce prováděné s polymerizovaným beta-laktoglobulinem byly významně menší než reakce kožních reakcí prováděné s nativním beta-laktoglobulinem.

Buňkami zprostředkovaná imunoreaktivita byla studována na 49 atopických subjektech párovými ex vivo alergenovými provokačními dávkami monitorovanými testem inhibice adherence leukocytů. Výsledky neukázaly významný rozdíl mezi imunoreaktivitou proti nativnímu a polymerovanému beta-laktoglobulinu.

Polymerizace proteinových antigenů je slibný studijní model, který bude dále zkoumán jako potenciální nástroj pro terapeutickou indukci imunotolerance k alimentárním proteinům, protože snižuje in vivo imunoreaktivitu a neničí alergenní epitopy, jak bylo prokázáno in vitro a ex. vivo testy.