Vergleichende Immunreaktivität von polymerisiertem Beta-Lactoglobulin (ImmuneBLG)

Die Kuhmilchallergie ist ein schwächender Zustand mit schwieriger Diagnose und bis jetzt ohne endgültige Lösung, die dem Patienten vom medizinischen Betreuer präsentiert werden kann. Unter den Dutzenden Proteinen der Kuhmilch ist das Beta-Lactoglobulin (Bos d 5) eines der allergensten, da es nicht vom Menschen produziert wird und wegen seiner Schwerverdaulichkeit. Die Allergenität von Beta-Lactoglobulin beim Menschen ist ein gut untersuchtes Thema, aber über die Allergenität von bioprozessierten Proteinen wie dem polymerisierten Beta-Lactoglobulin ist wenig bekannt.

Ziel der vorliegenden Arbeit ist es, die Immunreaktivität des polymerisierten Beta-Lactoglobulins zu untersuchen und mit der Immunreaktivität des nativen Beta-Lactoglobulins bei Patienten mit und ohne klinische Diagnose einer Überempfindlichkeit/Unverträglichkeit gegenüber Kuhmilch zu vergleichen. Es wurde eine thermisch induzierte Polymerisation und eine durch Transglutaminase induzierte Polymerisation in Anwesenheit von Cystein verwendet.

Fünf Patientengruppen (drei symptomatische und zwei Kontrollpatienten) aus zwei Kliniken mit unterschiedlichen Merkmalen wurden nach Erscheinungsbild der Symptome untersucht und allergischen Hauttests und Immunoassays zur Untersuchung von spezifischem IgE gegen Beta-Lactoglobulin sowie zur Bewertung unterzogen zellvermittelte Immunreaktivität durch Herausforderungstests, überwacht durch den Leukozytenadhärenz-Inhibitionstest.

Nebeneinander durchgeführte Hauttests mit nativem und polymerisiertem Beta-Lactoglobulin bei 56 Erwachsenen mit problematischer Überempfindlichkeit gegenüber Kuhmilch, bei denen zuvor eine Laktoseintoleranz diagnostiziert worden war, wurden durchgeführt, ebenso wie die Untersuchung von spezifischem IgE gegen Beta-Lactoglobulin durch ImmunoCAP und Immunoblot. Eine Kontrollgruppe von 20 kuhmilchtoleranten Personen ohne spezifisches IgE gegen Beta-Lactoglobulin (nachweisbar durch ImmunoCAP oder durch allergische Hauttests) wurde zur Kontrolle der Immunoblot-Technik ausgewählt. Die Ergebnisse hatten gezeigt, dass der analytische Nachweis von spezifischem IgE mittels Immunoblot deutlich sinnvoller ist, wenn anstelle des beta-Lactoglobulin-Monomers das polymerisierte beta-Lactoglobulin im Immunoassay verwendet wird. Die Ergebnisse hatten gezeigt, dass die Untersuchung von spezifischem IgE durch immunoCAP unterhalb der Nachweisgrenzen oder das Fehlen einer kutanen Reaktivität die Möglichkeit einer IgE-vermittelten Überempfindlichkeit, wie durch Immunoblot gezeigt, nicht ausschließt.

Seitliche Hauttests mit nativem und polymerisiertem Beta-Lactoglobulin wurden bei 22 symptomatischen Kindern durchgeführt, wobei die Diagnose einer IgE-vermittelten Allergie gegen Beta-Lactoglobulin durch ImmunoCAP bestätigt wurde. Zum Vergleich der Technik der Hauttests wurde eine angepasste Kontrollgruppe von 22 asymptomatischen Kindern mit nicht nachweisbarem spezifischem IgE für Beta-Lactoglobulin durch ImmunoCAP gebildet. Die Ergebnisse hatten gezeigt, dass die mit dem polymerisierten Beta-Lactoglobulin durchgeführten Hautreaktionen signifikant geringer waren als die Reaktionen der mit dem nativen Beta-Lactoglobulin durchgeführten Hautreaktionen.

Die zellvermittelte Immunreaktivität wurde an 49 atopischen Probanden durch paarweise Ex-vivo-Allergenbelastungen untersucht, die durch den Leukozyten-Adhärenz-Inhibitionstest überwacht wurden. Die Ergebnisse zeigten keinen signifikanten Unterschied zwischen der Immunreaktivität gegen natives versus polymerisiertes Beta-Lactoglobulin.

Die Polymerisation von Proteinantigenen ist ein vielversprechendes Studienmodell, das als potenzielles Werkzeug zur therapeutischen Induktion von Immuntoleranz gegenüber Nahrungsmittelproteinen weiter untersucht werden soll, da es die in vivo-Immunreaktivität verringert und die allergenen Epitope nicht zerstört, wie durch in vitro und ex gezeigt wurde vivo-Assays.