Immunoreaktywność porównawcza spolimeryzowanej beta-laktoglobuliny (ImmuneBLG)

Alergia na mleko krowie jest stanem wyniszczającym, wymagającym trudnej diagnozy i do tej pory bez ostatecznego rozwiązania, które może przedstawić pacjentowi personel medyczny. Spośród dziesiątek białek mleka krowiego, beta-laktoglobulina (Bos d 5) jest jednym z najbardziej alergizujących, ponieważ nie jest wytwarzana przez człowieka oraz ze względu na swoją trudnostrawność. Alergiczność beta-laktoglobuliny u ludzi jest tematem dobrze zbadanym, ale niewiele wiadomo na temat alergenności bioprzetworzonych białek, takich jak spolimeryzowana beta-laktoglobulina.

Celem pracy jest zbadanie immunoreaktywności spolimeryzowanej beta-laktoglobuliny i porównanie jej z immunoreaktywnością natywnej beta-laktoglobuliny u pacjentów z i bez klinicznego rozpoznania nadwrażliwości/nietolerancji na mleko krowie. Zastosowano polimeryzację indukowaną termicznie oraz polimeryzację indukowaną transglutaminazą w obecności cysteiny.

Pięć grup pacjentów (trzy z objawami i dwie kontrolne) pochodzących z dwóch klinik o odmiennej charakterystyce zostało przebadanych pod kątem objawów i poddanych skórnym testom alergicznym oraz testom immunologicznym w celu zbadania swoistych IgE przeciwko beta-laktoglobulinie, a także ocenie immunoreaktywność komórkową w testach prowokacyjnych monitorowanych za pomocą testu hamowania przylegania leukocytów.

Przeprowadzono testy skórne side to side z natywną i spolimeryzowaną beta-laktoglobuliną u 56 osób dorosłych z problematyczną nadwrażliwością na mleko krowie, wcześniej zdiagnozowaną jako nietolerancja laktozy, a także badania swoistych IgE przeciwko beta-laktoglobulinie metodą ImmunoCAP i immunoblot. Do kontroli techniki immunoblot wybrano grupę kontrolną 20 osób tolerujących mleko krowie, z brakiem swoistej IgE przeciwko beta-laktoglobulinie (wykrywalnej za pomocą ImmunoCAP lub alergicznych testów skórnych). Wyniki pokazały, że analityczne wykrywanie specyficznych IgE za pomocą immunoblotu jest znacznie bardziej sensowne, gdy w teście immunologicznym zamiast monomeru beta-laktoglobuliny stosuje się spolimeryzowaną beta-laktoglobulinę. Wyniki pokazały, że badanie swoistych IgE metodą immunoCAP poniżej granic wykrywalności lub brak reaktywności skórnej nie wyklucza możliwości nadwrażliwości zależnej od IgE, co wykazano metodą immunoblot.

Wykonano boczne testy skórne z natywną i spolimeryzowaną beta-laktoglobuliną u 22 dzieci z objawami, z potwierdzonym przez ImmunoCAP rozpoznaniem IgE-zależnej alergii na beta-laktoglobulinę. Dopasowana grupa kontrolna 22 bezobjawowych dzieci z niewykrywalną swoistą IgE dla beta-laktoglobuliny metodą ImmunoCAP została utworzona w celu porównania techniki testów skórnych. Wyniki pokazały, że reakcje skórne wywołane spolimeryzowaną beta-laktoglobuliną były znacznie słabsze niż reakcje skórne wywołane naturalną beta-laktoglobuliną.

Immunoreaktywność komórkową badano na 49 pacjentach z atopią, stosując sparowane prowokacje alergenowe ex vivo, monitorowane za pomocą testu hamowania przylegania leukocytów. Wyniki nie wykazały znaczącej różnicy między immunoreaktywnością wobec natywnej i spolimeryzowanej beta-laktoglobuliny.

Polimeryzacja antygenów białkowych jest obiecującym modelem badawczym, który należy dalej badać jako potencjalne narzędzie do terapeutycznej indukcji immunotolerancji na białka pokarmowe, ponieważ zmniejsza immunoreaktywność in vivo i nie niszczy epitopów alergennych, jak wykazano w badaniach in vitro i ex testy vivo.