Alergie na různé druhy ryb u dětí a dospívajících alergických na ryby (TRO-FAST)

Úvod:

Ryby hrají důležitou roli v lidské potravě poskytující cenný zdroj vysoce asimilovaných bílkovin a spotřeba ryb na celém světě roste. Alergie na ryby je jednou z nejčastějších potravinových alergií spolu s mlékem, vejci, ořechy, arašídy, ovocem, pšenicí, sójou a mořskými plody. Je častější v přímořských zemích a zemích s tradicemi v odvětví rybolovu a kde ryby hrají důležitou roli v tradicích potravin. Taková je situace v severním Norsku, kde byl rybolov a rybí průmysl nejdůležitějším způsobem obživy a rybaření důležitou součástí potravy. Alergie na ryby je zvláště častá u dětí a mladých dospělých. Příznaky související s alergií na ryby se liší od mírných příznaků až po anafylaxi. Většina pacientů s alergií na ryby se vyhýbá všem druhům ryb a zdravotníci jim to často radí. Hlavním alergenem ryb je svalový parvalbumin odolný vůči teplu, chemické denaturaci a proteolytickým enzymům. V důsledku homologie v aminokyselinové sekvenci v parvalbuminech u různých druhů ryb existuje zkřížená reaktivita.

Klinické zkušenosti, studie senzibilizace a některé otevřené studie provokační expozice však naznačují, že někteří pacienti s alergií na ryby mohou některé druhy ryb tolerovat. Hlavním účelem této studie je zjistit, do jaké míry mohou děti a dospívající s alergií na ryby tolerovat některé druhy ryb pomocí DBPCFC jako zlatého standardu v diagnostice potravinové alergie, a vyhnout se tak zbytečným potravinovým omezením v jejich stravě.

Potravinářský průmysl často označuje své produkty slovem „hlavní obsah alergenu“, protože postrádá informace o prahových dávkách pro alergické reakce. Zbytečné označování potravin má za následek menší variace ve stravě u pacientů s potravinovou alergií. Dalším účelem této studie je najít minimální vyvolávající dávku, na kterou 10 % účastníků dostane alergickou reakci, a přispět tak k přesnějšímu označování potravin.

Metoda:

DBPCFC je zlatým standardem v diagnostice potravinové alergie. Zamaskovat chuť a vůni ryb ve standardizovaném testovacím krmivu s dobrou chutí a texturou je obtížné. Obzvláště obtížné je to u dětí, u kterých je méně pravděpodobné, že jedí jídlo se špatnou chutí a kde je objem testovacího jídla, který zvládnou, omezený.

Ve spolupráci s National Institute of Food Research v Norsku jsme vyrobili sušené rybí prášky z tresky, lososa a makrely. Zmrazené filety byly uvařeny, vysušeny a vyrobeny na prášek. Prášky byly zkontrolovány na mikrobiologický obsah a obsah bílkovin. Postup zahrnuje odstranění co největšího množství tuku. Prášky jsou skladovány v mrazáku s teplotou -20°C. Objem je snížen asi o 80 % ve srovnání s vařenými rybami.

Ve spolupráci s profesorkou Clare Mills ze skupiny Molecular Allergology, Manchester Institute of Biotechnology, The University of Manchester, se rybí prášek přidává do čokoládového dezertu podle receptury použité ve studii EuroPrevall o potravinové alergii. Výroba čokoládových dezertů probíhá na University of Manchester spolu s kontrolou kvality z hlediska obsahu alergenů, obsahu parvalbuminu, mikrobiologie a speciace ryb. Maskování chuti a vůně je testováno v senzorickém testovacím panelu.

Nábor účastníků:

K účasti jsou zváni pacienti ve věku 5-20 let s alergií na ryby a senzibilizací na ryby v anamnéze, kteří navštívili jednu z ambulancí pro děti a dospívající ve fakultní nemocnici v Severním Norsku. Zváni jsou i pacienti se senzibilizací na ryby, které ryby nikdy nejedly. Kromě toho jsou k účasti zváni pacienti registrovaní senzibilizací proti tresce v alergologické laboratoři Univerzitní nemocnice Severního Norska od roku 2008, kteří ještě nebyli vyzvednuti z ambulance. Laboratoř je jedinou alergologickou laboratoří v regionu, ze které se rekrutují účastníci.

Vyšetření před zařazením:

Všichni pacienti, kteří dají souhlas k účasti, se před zařazením podrobují klinickému vyšetření, včetně spirometrie, aby byla zajištěna způsobilost. Klinické vyšetření obsahuje měření hmotnosti a výšky, poslech srdce a plic, vyšetření kůže, spojivek, nosu a dutiny ústní.

Zvláštní pozornost je věnována nekontrolovanému astmatu a ekzému a zajištění optimální léčby před zařazením. Pacienti alergičtí na pyl nebudou během pylové sezóny podstupovat potravinové výzvy.

Měření specifického imunoglobulinu E (IgE) v séru:

U všech účastníků se měří specifické IgE v séru proti následujícím alergenům:

1. Fx5 (vejce, mléko, treska, pšenice, sója, arašídy)
2. Inhalační panel 6 (bříza, timotej, pelyněk, alternaria, cladosporium)
3. Inhalační panel 7 (kočka, kůň, pes, roztoč, králík)
4. Gad c1, f426 (parvalbumin z tresky)
5. Cyp c1, f355 (parvalbumin z kapra)
6. Losos, f41
7. Makrela, f206
8. Halibut, f303
9. Pollock, f413
10. Treska jednoskvrná, f42
11. Sleď, f205
12. Platýs velký, 4254
13. Tuňák, f40
14. Krevety, f24
15. f351 (rekombinantní krevetový tropomyosin)

Dotazník:

Rodiče odpovídají na dotazník pro výzkum alergie. Dotazník je přeložen do norštiny a využívá se elektronický průzkum. Rodiče odpovídají na dotazník během prvního dne výzvy. Dotazník je rozšířen o otázky týkající se alergie na ryby.

Dvojitě zaslepená placeba kontrolovaná potravinová výzva s treskou, lososem, makrelou a placebem:

Všichni účastníci podstoupili DBPCFC s treskou, lososem, makrelou a placebem v náhodném pořadí, maskovaní v čokoládovém dezertu ve 4 samostatných dnech provokace s minimálně 6 týdny mezi každým dnem provokace. Účastníci, kteří zažili anafylaxi, ověřeni a léčeni v nemocnici, nejsou vystaveni druhu, který anafylaxi vyvolal. Symptomy se zaznamenávají na záznamový list klinických projevů na základě protokolu z University Hospital of South Manchester s klasifikací symptomů a definovanými kritérii zastavení. Dávky bílkovin jsou založeny na zkušenostech ze studie EuroPrevall s DBPCFC s treskou:

3 µg, 600 µg, 12 mg, 120 mg a 1 g pro DBPCFC

Otevřené výzvy s treskou a/nebo lososem a makrelou:

Účastníci, kteří nemají žádné alergické reakce po DBPCFC s treskou, lososem a makrelou, podstoupili otevřenou výzvu(y) s 2 g, 6 g a 12 g proteinu, podávaného jako vařená ryba, s druhy, které dávaly negativní DBPCFC. Otevřené výzvy se provádějí v samostatných dnech po prolomení randomizačního kódu.

Ukončení léčby před DBPCFC a otevřenými výzvami:

Léčba systémovými kortikosteroidy je ukončena nejméně jeden týden před provokačními dávkami. Léčba antihistaminiky se ukončí alespoň 72 hodin před provokačními dávkami. Krátkodobě působící β-2 agonisté jsou vysazeni alespoň 6 hodin před stimulací a dlouhodobě působící β-2 agonisté alespoň 24 hodin před stimulací. Účastníci mohou pokračovat v inhalačních kortikosteroidech a antagonistech leukotrienových receptorů.

Odložení DBPCFC a otevřené výzvy:

Výzvy jsou odloženy, pokud mají účastníci probíhající infekce, probíhající alergické reakce, nekontrolovaný ekzém nebo nekontrolované astma. Účastníci s pylovou alergií nejsou vystaveni během pylové sezóny.

Pozorování a léčba alergických reakcí:

Všechny rybí testy se provádějí na výzkumné jednotce ve Fakultní nemocnici Severního Norska v období září 2014 - únor 2015. Dva účastníci jsou každý den provokace a všichni účastníci jsou pozorováni jednou zaslepenou výzkumnou sestrou. Nezaslepený personál každé ráno připravuje testovací jídla. Jeden zaslepený lékař vyšetří účastníky před, během a po výzvách a rozhodne, zda jsou výzvy pozitivní nebo negativní. Výzvy jsou zastaveny, pokud se u účastníků objeví objektivní známky alergických reakcí. Kritéria zastavení jsou předdefinována. Účastníci jsou pozorováni v nemocnici nejméně dvě hodiny po ukončení výzev. Alergické a anafylaktické reakce se léčí podle stanoviska Evropské akademie alergologie a klinické imunologie Anaphylaxis. Účastníci jsou druhý den telefonicky kontaktováni zaslepenou výzkumnou sestrou, aby zaznamenali pozdní reakce po propuštění.