Ověřování diagnostiky na bázi vajec a molekulárních markerů pro šíření anthelmintické rezistence (StarwormsWP1)

Pozadí Helminti přenášení půdou (STH) jsou skupinou parazitických červů, kteří infikují miliony dětí v subtropických a tropických zemích, což má za následek podvýživu, zpomalení růstu, intelektuální retardaci a kognitivní deficity. Pro kontrolu nemocnosti v důsledku těchto červů se zavádějí školní odčervovací programy, ve kterých jsou dětem podávána anthelmintika bez předchozí diagnózy. Pokračujícímu boji proti těmto červům napomáhá Londýnská deklarace o opomíjených tropických nemocech, která pomáhá udržovat a rozšiřovat globální program dárcovství léků, což má za následek nebývalý nárůst odčervovacích programů. pro ilustraci, za poslední čtyři roky se pokrytí hromadného podávání léků (MDA) zdvojnásobilo z 30 na 60 % a je vyvíjeno pokračující celosvětové úsilí o dosažení milníku 75 % do roku 2020.

Hrozby Zatímco chvályhodným dlouhodobým cílem je eliminovat STH jako problém veřejného zdraví do roku 2020 a případně prohlásit cílové geografické oblasti za prosté infekcí, tento vysoký stupeň drogového tlaku činí odčervovací programy náchylnými k rozvoji rezistence na anthelmintika, protože programy spoléhat pouze na jeden lék s někdy suboptimální účinností a alternativní léky nejsou dostupné.

Výzvy

V současné době neexistuje žádný monitorovací systém, který by monitoroval vznik a šíření rezistence na anthelmintika. Zůstává nejasné, do jaké míry mohla klesnout účinnost léků a zda je již přítomna rezistence na anthelmintika. Vyvinout takový systém však není jednoduché. Odčervovací programy obvykle fungují v prostředí s omezenými zdroji a manažeři programů vyžadují určitou flexibilitu, aby minimalizovali finanční i technické zdroje a zároveň zajistili spolehlivé posouzení účinnosti léku. Nejdůležitější překážky globálního sledování vzorců měnící se účinnosti léků a šíření rezistence na anthelmintika jsou následující:

• nedostatek diagnostických laboratoří se zkušeným personálem pro provádění průzkumů a analýzu a reportování získaných dat
• absence systému zajišťování kvality, který zaručuje auditovatelné výsledky
• nedostatek pokynů při navrhování průzkumů v průběhu programů
• nedostatek dat podporujících validitu molekulárních markerů pro detekci antihelmintické rezistence u lidských STH
• nedostatek citlivých a point-of-care nástrojů, které umožňují detekci nízkých frekvencí rezistence na anthelmintika Hlavní cíl Tento projekt si klade za cíl posílit monitorování a dohled nad účinností léků a rezistencí na anthelmintika v programech STH. Jako takový bude podporovat odčervovací programy v jejich snaze eliminovat STH jako problém veřejného zdraví do roku 2020.

Specifickými cíli první části projektu je validace diagnostických nástrojů pro sledování účinnosti léků a šíření rezistence na anthelmintika a validace molekulárních markerů rezistence na benzimidazol.

Protokol studie Tato studie bude provedena na čtyřech různých místech v Africe (Etiopie a Tanzanie), Asii (Laoská lidově demokratická republika) a Latinské Americe (Brazílie). Výběr těchto pracovišť je založen na jejich zkušenostech s hodnocením účinnosti léků a hodnocením výkonu diagnostických nástrojů, na dostupnosti dobře vybavených diagnostických zařízení a kvalifikovaného personálu a na jejich národní historii MDA.

Studium bude zaměřeno na děti školního věku (ve věku 5 až 14 let). Na začátku budou subjekty požádány, aby poskytly aktuální (do 4 hodin) vzorek stolice o hmotnosti alespoň 9 gramů. Všechny vzorky stolice budou zpracovány pomocí FECPAKG2, duplicitního Kato-Katzova tlustého nátěru (nejběžněji používaná technika počítání fekálních vajíček (FEC)) a Mini-Flotac (nová technika, která má alespoň stejnou citlivost jako Kato- Katz). Všem dětem poskytujícím vzorek stolice bude pod dohledem poskytnuta jednorázová perorální dávka ALB 400 mg. Čtrnáct až 21 dní po léčbě se odebere druhý vzorek stolice od všech dětí, které se na začátku ukázaly jako pozitivní na jakýkoli druh STH, aby se stanovily FEC.

Při každém odběru se 2x 1 gram stolice uloží do konzervačního prostředku pro následnou molekulární analýzu. Uskladněná stolice bude odeslána do Belgie k extrakci DNA a analýze qPCR. Podskupina vzorků bude analyzována pyrosekvenováním, aby se vyhodnotily jednonukleotidové polymorfismy v genu pro b-tubulin.

Bude také provedeno sdružování uložených vzorků pro porovnání s hodnotami získanými z analýzy jednotlivých vzorků.

Manipulace s daty Data budou nejprve zaznamenána na konkrétní formuláře studijních záznamů. Tyto výsledky budou poté vloženy do vlastních navržených souborů Excel dvěma různými úředníky pro zadávání dat, aby se minimalizovaly chyby v datech způsobené nesprávným zadáním dat.

Studium management Studium na různých místech bude organizováno a podporováno mimo Gent University. Členové projektového týmu pojedou do každého jednotlivého zkušebního místa, aby vyškolili místní personál v různých koprologických technikách a seznámili je s protokolem a dokumenty pokusu.