Tojásalapú diagnosztika és molekuláris markerek validálása az anthelmintikus rezisztencia terjedésére (StarwormsWP1)

Háttér A talajon átvitt helminták (STH-k) a parazita férgek egy csoportja, amelyek gyermekek millióit fertőzik meg a szubtrópusi és trópusi országokban, alultápláltságot, növekedési visszamaradást, intellektuális retardációt és kognitív hiányosságokat okozva. Az e férgek okozta megbetegedések visszaszorítására iskolai féreghajtó programokat valósítanak meg, amelyek során féreghajtó szereket adnak be a gyerekeknek előzetes diagnózis nélkül. A férgek elleni folyamatos harcot segíti az elhanyagolt trópusi betegségekről szóló londoni nyilatkozat, amely segít fenntartani és kiterjeszteni a globális gyógyszeradományozási programot, ami a féregtelenítő programok példátlan növekedését eredményezi. szemléltetésképpen, az elmúlt négy évben a tömeges kábítószer-adminisztráció (MDA) lefedettsége megduplázódott, 30-ról 60%-ra nőtt, és folyamatos globális erőfeszítéseket tesznek annak érdekében, hogy 2020-ra elérjék a 75%-os mérföldkövet.

Veszélyek Míg a dicséretes hosszú távú cél az STH-k mint közegészségügyi probléma 2020-ra történő megszüntetése, és a megcélzott földrajzi területek fertőzésmentessé nyilvánítása, ez a nagyfokú gyógyszernyomás a féregtelenítő programokat sebezhetővé teszi a féregellenes rezisztencia kialakulásával szemben, mivel a programok csak egy gyógyszerre hagyatkoznak, amelynek hatékonysága néha szuboptimális, és nem állnak rendelkezésre alternatív gyógyszerek.

Kihívások

Jelenleg nincs olyan felügyeleti rendszer, amely nyomon követné az anthelmintikus rezisztencia kialakulását és terjedését. Továbbra sem világos, hogy a gyógyszerek hatékonysága milyen mértékben csökkent, és hogy van-e már antihelmintikus rezisztencia. Egy ilyen rendszer kialakítása azonban nem egyszerű. A féregtelenítő programok jellemzően korlátozott erőforrásokban működnek, és a programvezetőknek némi rugalmasságra van szükségük a pénzügyi és technikai erőforrások minimalizálása érdekében, miközben biztosítják a gyógyszer hatékonyságának megbízható értékelését. A gyógyszerhatékonyság változásának és az anthelmintikus rezisztencia terjedésének globális nyomon követésének legfontosabb akadályai a következők:

• a felmérések elvégzésére, a kapott adatok elemzésére és jelentésére gyakorlott személyzettel rendelkező diagnosztikai laboratóriumok hiánya
• az auditálható eredményeket garantáló minőségbiztosítási rendszer hiánya
• az útmutatás hiánya a felmérések tervezésében a programok előrehaladtával
• a humán STH-k anthelmintikus rezisztenciájának kimutatására szolgáló molekuláris markerek érvényességét alátámasztó adatok hiánya
• az alacsony gyakoriságú anthelmintikus rezisztencia kimutatását lehetővé tévő érzékeny és gondozási eszközök hiánya Fő cél A projekt célja a gyógyszerhatékonyság és az anthelmintikus rezisztencia monitorozásának és felügyeletének erősítése az STH programokban. Mint ilyen, támogatni fogja a féregtelenítő programokat annak érdekében, hogy 2020-ra felszámolják az STH-kat mint közegészségügyi problémát.

A projekt első részének specifikus céljai a gyógyszerek hatékonyságának és az anthelmintikus rezisztencia terjedésének monitorozására szolgáló diagnosztikai eszközök validálása, valamint a benzimidazol rezisztencia molekuláris markereinek validálása.

Vizsgálati protokoll Ezt a vizsgálatot négy különböző helyszínen, Afrikában (Etiópia és Tanzánia), Ázsiában (Lao PDR) és Latin-Amerikában (Brazília) végzik. Ezeknek a helyszíneknek a kiválasztása a gyógyszerhatékonyság és a diagnosztikai eszközök teljesítményének értékelése terén szerzett tapasztalataikon, a jól felszerelt diagnosztikai létesítmények és a szakképzett személyzet rendelkezésre állásán, valamint nemzeti MDA-történetükön alapul.

A tanulmány az iskolás korú (5 és 14 év közötti) gyermekekre összpontosít. Kiinduláskor az alanyokat felkérik, hogy adjanak be friss (4 órán belüli) legalább 9 grammos székletmintát. Minden székletmintát a FECPAKG2-vel, a Kato-Katz vastag kenet megkettőzésével (a leggyakrabban alkalmazott fekáliás tojásszámláló (FEC) technika) és a Mini-Flotac (egy új technika, amelynek érzékenysége legalább a Kato-val azonos érzékenységű) segítségével dolgozunk fel. Katz). Minden székletmintát szolgáltató gyermek 400 mg ALB egyszeri orális adagot kap felügyelet mellett. Tizennégy-21 nappal a kezelés után egy második székletmintát vesznek az összes olyan gyermektől, akik a kiinduláskor bármely STH-fajra pozitívnak bizonyultak, hogy meghatározzák a FEC-eket.

Minden mintavételkor 2x1 gramm székletet tárolunk tartósítószerben a molekuláris elemzéshez. A tárolt székletet Belgiumba szállítják DNS-kivonás és qPCR-elemzés céljából. A minták egy részhalmazát Pyrosequencing módszerrel elemezzük, hogy kiértékeljük a b-tubulin gén egyetlen nukleotid polimorfizmusát.

A tárolt minták összevonását is elvégzik az egyes minták elemzéséből kapott értékekkel való összehasonlításhoz.

Adatkezelés Az adatok először meghatározott vizsgálati adatlapokon kerülnek rögzítésre. Ezeket az eredményeket ezután két különböző adatbeviteli ügyintéző beviszi az egyedi tervezésű Excel-fájlokba, hogy minimalizálja a helytelen adatbevitelből adódó hibákat.

Tanulmánykezelés A különböző helyszíneken folytatott tanulmányokat a Genti Egyetem szervezi és támogatja. A projektcsapat tagjai minden egyes vizsgálati helyszínre utaznak, hogy a helyi személyzetet kiképezze a különböző koprológiai technikákra, és megismertesse őket a vizsgálati protokollal és dokumentumokkal.