Biologická dostupnost bílkovin z rostlinné stravy

Tato studie je rozdělena do 4 fází. První fáze: Zemědělství (1. rok) Popis lokality: Experiment bude proveden na experimentální farmě Agentury pro zemědělskou technologii v São Paulu (APTA) v Ribeirao Preto, Brazílie, na zeměpisných souřadnicích 21°12'26" S e 47 °51'48" N a průměrná nadmořská výška 646 m. Roční úhrn srážek je asi 1427 mm, s průměrnou maximální a minimální teplotou 25 °C a 19,3 °C. Půda je klasifikována jako Oxitol s hlinitou texturou. Plodina fazolí (Phaseolus vulgaris) bude pěstována ve vzdálenosti 0,50 m mezi řádky s 12 semeny na metr a 2 týdny po odkvětu (odkvětu) bude zásoba vody doplněna oxidem deuteria pro experimentální vývoj. Vyrobené obilí bude sklizeno k experimentální analýze a spotřebě. Pokusná plocha bude mít 5 000 m2 s úrodou fazolí běžných pro produkci dostatečného množství zrn pro běh experimentu. Semena budou sušena v měřítku 1 až 10 kg suchých a vybraných semen.

Analýza složení živin (1. rok) Šest vzorků po 100 g bude odděleno pro analýzy složení živin, které budou provedeny v Laboratoři výživy zvířat Ústavu vědy o zvířatech Univerzity v São Paulu v Brazílii. Hned po sklizni budou vzorky potravin zváženy a sušeny v kamnech s nucenou cirkulací vzduchu při 65 stupních Celsia po dobu 72 hodin. Poté budou vzorky rozemlety v mlýně se sítem s otvory 2 mm a bude odebrán dílčí vzorek pro analýzu sušiny, bílkovin, éterového extraktu, minerální hmoty, energie, vápníku a fosforu podle oficiálních metod analýzy ( AOAC) (1996). Vláknina bude analyzována v neutrálním a kyselém detergentu podle odkazu Silva a Queiroz, 2005 a selen bude analyzován podle Olson et al., 1975. Energetická analýza bude provedena kalorimetrickou bombou a tuk extrakcí podle reference Bligh and Dyer, 1959, v Nutrient Composition Laboratory lékařské fakulty Ribeirão Preto.

Druhá fáze (pilotní studie), Institut výživy (2. rok) Subjekty Pro validaci metody bude přijato patnáct dospělých dobrovolníků. Kritéria pro zařazení

• Zdraví, netěhotní dospělí ve věku 18-65 let
• Neužívejte žádné léky, včetně NSAID
• Neužívat antibiotika do 4 týdnů od studie
• BMI v rozmezí 18-35
• Stabilní hmotnost Kritéria vyloučení
• Děti a starší osoby (nad 65 let)
• Těhotenství
• Diagnostikována nepřenosná nebo přenosná nemoc
• Být pod restriktivní dietou
• Antibiotika do 4 týdnů od studie
• Léky do 4 týdnů od studie Návrh studie Po schválení projektu místní etickou komisí a získání podepsaného informovaného souhlasu bude dobrovolníkům nabídnuto testovací jídlo s mléčnou bílkovinou. Testovaným proteinem bude především plnotučný mléčný protein, vyrobený s nízkým obsahem deuteria v rámci studie. To umožní, aby byl jednobuněčný protein Carbon-13 charakterizován proti dobře prozkoumanému živočišnému proteinu, o kterém je známo, že má vysokou stravitelnost. Vzhled stopovací aminokyseliny (AA) v oběhu (v krvi, slinách, moči a dechu budou také odebrány vzorky) a relativní vzhled testovaného a referenčního proteinu bude brán jako míra relativní biologické dostupnosti, kterou lze jednou převést na absolutní míru. referenční protein byl charakterizován. Základním měřením bude stabilní izotopové obohacení v jednotlivých aminokyselinách.

Pilotní studie fáze 1, Institut výživy. Pro ověření metody bude přijato 15 dospělých dobrovolníků.

Třetí fáze je u 15 dětí (1-3 roky, s různým nutričním stavem) a čtvrtá fáze je u 15 starších osob (více než 65 let, se sarkopenií nebo bez sarkopenie).

Testovací jídlo 1: Fazole namočené po dobu 3 hodin, voda vylitá a fazole vařené 20 minut v tlakovém vařeni.

Testovací jídlo bude odděleno používáním neoznačených fazolí po dobu dvou týdnů. Stejný přístup, jaký byl použit v pilotní studii mléčné bílkoviny, bude přijat pro studium biologické dostupnosti luštěnin na zrno prostřednictvím současného srovnání s malým množstvím jednobuněčného proteinu obohaceného uhlíkem-13 kombinovaným ve stejném testovacím jídle.

U všech skupin bude analyzováno stanovení příjmu potravy, celkového dusíku v moči a obohacení deuteria v bílkovinách. Během období příjmu testovacího jídla budou každému dobrovolníkovi aplikovány čtyři 24hodinové dotazníky, aby se ověřila spotřeba bílkovin a kalorií. Dobrovolníci budou požádáni, aby dodržovali obvyklý příjem, aby se vyhnuli změnám ve spotřebě potravin. Celkový močový dusík vzorků bude analyzován Kjeldahlovou metodou s amonnou mikrodifuzí. Obohacení specifických izotopů o aminokyseliny bude analyzováno ve vzorcích slin, moči, dechu a krve. Uhlík-13 v dechu oxid uhličitý (CO2) a deuterium v ​​obohacené moči budou analyzovány v Mass Spectrometry of Medicine School of Ribeirão Preto (FMRP-USP), Brazílie, SP.