Biodostępność białek z diet roślinnych

To badanie jest podzielone na 4 fazy. Pierwsza faza: Rolnictwo (rok 1) Opis miejsca: Eksperyment zostanie przeprowadzony na Farmie Doświadczalnej Agencji Technologii Agrobiznesu (APTA) w São Paulo w Ribeirao Preto w Brazylii, pod współrzędnymi geograficznymi 21°12'26" S e 47 °51'48" N i średniej wysokości 646 m. Roczna suma opadów wynosi około 1427 mm, a średnia maksymalna i minimalna temperatura wynoszą odpowiednio 25°C i 19,3°C. Gleba jest sklasyfikowana jako Oxitol o gliniastej konsystencji. Uprawa fasoli (Phaseolus vulgaris) będzie uprawiana w odległości 0,50 m między rzędami z 12 nasionami na metr bieżący, a po 2 tygodniach od zakwitnięcia (kwitnienia) zaopatrzenie w wodę zostanie uzupełnione tlenkiem deuteru w celu rozwoju eksperymentalnego. Wyprodukowane ziarno zostanie zebrane do analizy eksperymentalnej i konsumpcji. Obszar doświadczalny będzie miał 5.000 m2 z uprawą fasoli zwyczajnej, aby wyprodukować wystarczającą ilość ziarna do przeprowadzenia eksperymentu. Nasiona będą suszone w skali od 1 do 10 kg suchych i wyselekcjonowanych nasion.

Analiza składu składników odżywczych (rok 1) Sześć próbek po 100 g każda zostanie oddzielonych do analizy składu składników odżywczych, która zostanie przeprowadzona w Laboratorium Żywienia Zwierząt Instytutu Nauk o Zwierzętach Uniwersytetu w São Paulo w Brazylii. Bezpośrednio po zbiorach próbki żywności będą ważone i suszone w piecu z wymuszonym obiegiem powietrza w temperaturze 65 stopni Celsjusza przez 72 godziny. Następnie próbki zostaną zmielone w młynku o sicie o oczkach 2 mm i pobrana zostanie podpróbka do analizy suchej masy, białka, ekstraktu eterowego, masy mineralnej, energii, wapnia i fosforu, zgodnie z Oficjalnymi Metodami Analiz ( AOAC) (1996). Włókno będzie analizowane w obojętnym i kwaśnym detergencie zgodnie z odniesieniem Silva i Queiroz, 2005, a selen będzie analizowane zgodnie z Olson i in., 1975. Analiza energetyczna zostanie przeprowadzona za pomocą bomby kalorymetrycznej i tłuszczu przez ekstrakcję zgodnie z odnośnikiem Bligh i Dyer, 1959, w Laboratorium Składu Składników Odżywczych Szkoły Medycznej Ribeirão Preto.

Druga faza (badanie pilotażowe), Instytut Żywienia (rok 2) Przedmioty Piętnastu dorosłych ochotników zostanie zrekrutowanych do walidacji metody. Kryteria przyjęcia

• Zdrowe, nieciężarne osoby dorosłe w wieku 18-65 lat
• Nie przyjmuje żadnych leków, w tym NLPZ
• Nie przyjmowanie antybiotyków w ciągu 4 tygodni badania
• BMI w przedziale 18-35
• Stabilna waga Kryteria wykluczenia
• Dzieci i osoby starsze (powyżej 65 lat)
• Ciąża
• Zdiagnozowano chorobę niezakaźną lub zakaźną
• Bycie na restrykcyjnej diecie
• Antybiotyki w ciągu 4 tygodni badania
• Leki w ciągu 4 tygodni od badania Projekt badania Po zatwierdzeniu projektu przez lokalną komisję etyczną i uzyskaniu podpisanej świadomej zgody, ochotnikom zostanie zaproponowany próbny posiłek z białkiem mleka. Białkiem testowym będzie w pierwszej kolejności białko mleka pełnego, produkowane w ramach badania z niewielkim wzbogaceniem deuterem. Umożliwi to scharakteryzowanie białka pojedynczej komórki węgla-13 w porównaniu z dobrze zbadanym białkiem zwierzęcym, o którym wiadomo, że ma wysoką strawność. Wygląd aminokwasu śladowego (AA) w krwioobiegu (pobierane będą również próbki krwi, śliny, moczu i oddechu) oraz względny wygląd białka badanego i referencyjnego będą traktowane jako miara względnej biodostępności, którą można przekształcić w miarę bezwzględną po scharakteryzowano białko referencyjne. Podstawowym pomiarem będzie wzbogacenie w izotopy stabilne w poszczególne aminokwasy.

Badanie pilotażowe fazy 1, Instytut Żywienia. Do walidacji metody zostanie zatrudnionych piętnastu dorosłych ochotników.

Trzecia faza dotyczy 15 dzieci (1-3 lata, o różnym stanie odżywienia), a czwarta faza dotyczy 15 osób w podeszłym wieku (powyżej 65 lat, z sarkopenią lub bez sarkopenii).

Posiłek testowy 1: Fasola moczona przez 3 godziny, odlana woda i fasola gotowana przez 20 minut w szybkowarze.

Posiłek testowy zostanie oddzielony przez spożywanie przez dwa tygodnie nieoznakowanej fasoli. To samo podejście, które zastosowano w badaniu pilotażowym białka mleka, zostanie przyjęte do zbadania biodostępności roślin strączkowych poprzez jednoczesne porównanie z niewielką ilością białka jednokomórkowego wzbogaconego w węgiel-13, połączonego w tym samym posiłku testowym.

We wszystkich grupach przeanalizowana zostanie ocena spożycia pokarmu, azot całkowity w moczu oraz wzbogacenie deuteru w białko. Cztery 24-godzinne kwestionariusze przypominające zostaną zastosowane u każdego ochotnika w okresach przyjmowania posiłku testowego, w celu zweryfikowania spożycia białka i kalorii. Ochotnicy zostaną poproszeni o zachowanie zwykłego spożycia, aby uniknąć zmian w spożyciu żywności. Całkowity azot w moczu z próbek będzie analizowany metodą Kjeldahla z mikrodyfuzją amonową. Specyficzne dla związku wzbogacenie izotopowe w aminokwasy będzie analizowane w próbkach śliny, moczu, oddechu i krwi. Węgiel-13 w wydychanym dwutlenku węgla (CO2) i deuter we wzbogaceniu moczu będą analizowane w szkole medycznej spektrometrii masowej w Ribeirão Preto (FMRP-USP), Brazylia, SP.