Biodisponibilidade de proteínas de dietas à base de plantas

Este estudo está dividido em 4 fases. Primeira Fase: Agricultura (Ano 1) Descrição do local: O experimento será realizado na Fazenda Experimental da Agência Paulista de Tecnologia do Agronegócio (APTA) em Ribeirão Preto, Brasil, nas coordenadas geográficas de 21°12'26" S e 47 °51'48" N e altitude média de 646 m. A precipitação anual é de cerca de 1.427 mm, com temperatura média máxima e mínima de 25°C e 19,3°C, respectivamente. O solo é classificado como Oxitol com textura glaciada. A cultura do feijoeiro (Phaseolus vulgaris), será cultivada a 0,50m entrelinhas com 12 sementes por metro linear e 2 semanas após a antese (floração) a irrigação será complementada com óxido de deutério para o desenvolvimento experimental. Os grãos produzidos serão colhidos para análise experimental e consumo. A área experimental terá 5.000 m2 com cultura de feijão para produzir quantidade de grãos suficiente para a execução do experimento. As sementes serão secas em escala de 1 a 10 kg de sementes secas e selecionadas.

Análise da Composição de Nutrientes (Ano 1) Seis amostras de 100g cada serão separadas para análises de composição de nutrientes, que serão realizadas no Laboratório de Nutrição Animal do Instituto de Zootecnia da Universidade de São Paulo, Brasil. Logo após a colheita, as amostras de alimentos serão pesadas e secas em estufa com circulação forçada de ar a 65 graus Celsius, durante 72 horas. Após isso, as amostras serão moídas em moinho com peneira de furo de 2 mm, e uma subamostra será retirada para análise de massa seca, proteína, extrato etéreo, massa mineral, energia, cálcio e fósforo, conforme Métodos Oficiais de Análise ( AOAC) (1996). A fibra será analisada em detergente neutro e ácido conforme referência Silva e Queiroz, 2005, e o selênio será analisado conforme Olson et al., 1975. A análise energética será realizada por bomba calorimétrica e a gordura pela extração conforme referência Bligh e Dyer, 1959, no Laboratório de Composição de Nutrientes da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto.

Segunda fase (estudo piloto), Instituto de Nutrição (Ano 2) Sujeitos Quinze voluntários adultos serão recrutados para validação do método. Critério de inclusão

• Adultos saudáveis, não grávidas, de 18 a 65 anos de idade
• Não tomar nenhum medicamento, incluindo AINEs
• Não tomar antibióticos dentro de 4 semanas de estudo
• IMC dentro da faixa de 18-35
• Critérios de exclusão de peso estável
• Crianças e idosos (acima de 65 anos)
• Gravidez
• Diagnosticado com doença não transmissível ou transmissível
• Estar sob dieta restritiva
• Antibióticos dentro de 4 semanas de estudo
• Medicamentos dentro de 4 semanas após o estudo Desenho do estudo Após a aprovação do projeto pelo comitê de ética local e obtenção do consentimento informado assinado, os voluntários receberão uma refeição de teste com proteína do leite. A proteína de teste em primeiro lugar será a proteína do leite integral, produzida com um baixo nível de enriquecimento de deutério dentro do estudo. Isso permitirá que a proteína de célula única do Carbono-13 seja caracterizada contra uma proteína animal bem estudada e conhecida por possuir alta digestibilidade. A aparência do aminoácido traçador (AA) na circulação (sangue; saliva, urina e respiração também serão amostrados) e a aparência relativa das proteínas de teste e referência serão tomadas como uma medida de biodisponibilidade relativa que pode ser convertida em uma medida absoluta uma vez a proteína de referência foi caracterizada. A medição básica será de enriquecimento de isótopos estáveis ​​em aminoácidos individuais.

Estudo piloto de fase 1, Instituto de Nutrição. Quinze voluntários adultos serão recrutados para validação do método.

A Terceira Fase é em 15 crianças (1-3 anos, com diferentes estados nutricionais) e a Quarta fase é em 15 idosos (mais de 65 anos, com ou sem sarcopenia).

Refeição teste 1: Feijão demolhado por 3 h, descartado a água e feijão cozido por 20 min na panela de pressão.

A refeição de teste será separada pelo uso por duas semanas de feijões não rotulados. A mesma abordagem usada no estudo piloto de proteína do leite será adotada para estudar a biodisponibilidade de leguminosas de grão através da comparação simultânea com uma quantidade modesta de proteína de célula única enriquecida com carbono-13 combinada na mesma refeição de teste.

Todos os grupos serão analisados ​​avaliação da ingestão alimentar, nitrogênio urinário total e enriquecimento de deutério em proteína. Quatro Questionários Recordatório 24h serão aplicados a cada voluntário durante os períodos de ingestão da refeição teste, a fim de verificar o consumo de proteínas e calorias. Será pedido aos voluntários que mantenham a sua alimentação habitual, para evitar alterações no consumo alimentar. O nitrogênio urinário total das amostras será analisado pelo método de Kjeldahl com microdifusão de amônio. O enriquecimento isotópico específico do composto em aminoácidos será analisado em amostras de saliva, urina, respiração e sangue. O carbono-13 no dióxido de carbono (CO2) expirado e o deutério no enriquecimento da urina serão analisados ​​em Espectrometria de Massas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP-USP), Brasil, SP.