Biologische beschikbaarheid van eiwitten uit plantaardige diëten

Deze studie is opgedeeld in 4 fasen. Eerste fase: landbouw (jaar 1) Locatiebeschrijving: het experiment wordt uitgevoerd op de experimentele boerderij van São Paulo's Agency for Agribusiness Technology (APTA) in Ribeirao Preto, Brazilië, op de geografische coördinaten van 21°12'26" S e 47 ° 51'48" N en gemiddelde hoogte van 646 m. De jaarlijkse neerslag is ongeveer 1427 mm, met een gemiddelde maximum- en minimumtemperatuur van respectievelijk 25°C en 19,3°C. De grond is geclassificeerd als Oxitol met glay textuur. Het bonengewas (Phaseolus vulgaris) zal worden gekweekt op 0,50 m tussen rijen met 12 zaden per strekkende meter en 2 weken na anthese (bloei) zal de watertoevoer worden aangepast met deuteriumoxide voor experimentele ontwikkeling. Het geproduceerde graan wordt geoogst voor experimentele analyse en consumptie. Het proefgebied zal 5.000 m2 met gewone bonenoogst hebben om genoeg granen te produceren om het experiment te laten draaien. Zaden worden gedroogd in een schaal van 1 tot 10 kg droge en geselecteerde zaden.

Analyse van de samenstelling van voedingsstoffen (jaar 1) Zes monsters van elk 100 g zullen worden gescheiden voor analyse van de samenstelling van voedingsstoffen, die zal worden uitgevoerd in het Animal Nutrition Laboratory van het Animal Science Institute van de Universiteit van São Paulo, Brazilië. Direct na het oogsten worden de voedselmonsters gewogen en gedurende 72 uur gedroogd in een oven met geforceerde luchtcirculatie bij 65 graden Celsius. Hierna worden de monsters gemalen in een molen met een zeef met een gaatje van 2 mm en wordt een deelmonster genomen voor de analyse van droge massa, eiwit, etherextract, minerale massa, energie, calcium en fosfor, volgens de officiële analysemethoden ( AOAC) (1996). Vezels zullen worden geanalyseerd in neutraal en zuur wasmiddel volgens referentie Silva en Queiroz, 2005, en selenium zal worden geanalyseerd volgens Olson et al., 1975. Energieanalyse zal worden uitgevoerd door een calorimetrische bom en vet door de extractie volgens referentie Bligh en Dyer, 1959, in het Nutrients Composition Laboratory van de Ribeirão Preto Medical School.

Tweede fase (pilootstudie), Voedingsinstituut (jaar 2) Proefpersonen Vijftien volwassen vrijwilligers zullen worden aangeworven voor methodevalidatie. Inclusiecriteria

• Gezonde, niet-zwangere volwassenen van 18-65 jaar
• Geen medicijnen gebruiken, ook niet NSAID's
• Geen antibiotica gebruiken binnen 4 weken na studie
• BMI binnen het bereik van 18-35
• Stabiel gewicht Uitsluitingscriteria
• Kinderen en ouderen (65+)
• Zwangerschap
• Gediagnosticeerd met niet-overdraagbare of overdraagbare ziekte
• Een restrictief dieet volgen
• Antibiotica binnen 4 weken na studie
• Medicijnen binnen 4 weken na studie Onderzoeksopzet Na goedkeuring van het project door de lokale ethische commissie en het verkrijgen van ondertekende geïnformeerde toestemming, krijgen vrijwilligers een testmaaltijd met melkeiwit aangeboden. Het testeiwit zal in de eerste plaats volle melkeiwit zijn, geproduceerd met een lage deuteriumverrijking in het onderzoek. Hierdoor kan het eencellige koolstof-13-eiwit worden gekarakteriseerd tegen een goed bestudeerd dierlijk eiwit waarvan bekend is dat het een hoge verteerbaarheid bezit. Tracer aminozuur (AA) verschijning in de bloedsomloop (bloed; speeksel, urine en adem zullen ook worden bemonsterd) en de relatieve verschijning van test- en referentie-eiwit zal worden genomen als een maat voor de relatieve biologische beschikbaarheid die eenmaal kan worden omgezet in een absolute maat het referentie-eiwit is gekarakteriseerd. De basismeting zal zijn van stabiele isotoopverrijking in individuele aminozuren.

Fase 1 pilotstudie, Voedingsinstituut. Vijftien volwassen vrijwilligers zullen worden aangeworven voor methodevalidatie.

De derde fase is bij 15 kinderen (1-3 jaar, met verschillende voedingsstatus) en de vierde fase is bij 15 ouderen (ouder dan 65 jaar, met of zonder sarcopenie).

Testmaaltijd 1: Bonen 3 uur geweekt, water weggegooid en bonen 20 minuten gekookt in snelkookpan.

De testmaaltijd wordt gescheiden door het gebruik van twee weken ongelabelde bonen. Dezelfde aanpak als gebruikt in de pilootstudie van melkeiwitten zal worden toegepast om de biologische beschikbaarheid van graanpeulvruchten te bestuderen door gelijktijdige vergelijking met een bescheiden hoeveelheid koolstof-13 verrijkt eencellig eiwit gecombineerd in dezelfde testmaaltijd.

Alle groepen zullen de beoordeling van de voedselinname, de totale hoeveelheid stikstof in de urine en de verrijking van deuterium in eiwit analyseren. Vier 24-uurs terugroepvragenlijsten zullen worden toegepast op elke vrijwilliger tijdens de inname van de testmaaltijd, om het eiwit- en calorieverbruik te verifiëren. Vrijwilligers wordt gevraagd om hun gebruikelijke inname te behouden om veranderingen in de voedselconsumptie te voorkomen. Het totale stikstofgehalte in de urine van de monsters zal worden geanalyseerd volgens de Kjeldahl-methode met ammoniummicrodiffusie. Verbindingsspecifieke isotoopverrijking in aminozuren zal geanalyseerd worden in speeksel-, urine-, adem- en bloedstalen. Koolstof-13 in ademkooldioxide (CO2) en deuterium in urineverrijking zullen worden geanalyseerd in Mass Spectrometry of Medicine School of Ribeirão Preto (FMRP-USP), Brazilië, SP.