Biodisponibilidad de proteínas de dietas basadas en plantas

Este estudio se divide en 4 fases. Primera Fase: Agricultura (Año 1) Descripción del sitio: El experimento se llevará a cabo en la Granja Experimental de la Agencia de Tecnología de Agronegocios de São Paulo (APTA) en Ribeirao Preto, Brasil, en las coordenadas geográficas 21°12'26" S e 47 °51'48" N y altitud media de 646 m. La precipitación anual es de aproximadamente 1427 mm, con temperaturas máximas y mínimas promedio de 25°C y 19,3°C, respectivamente. El suelo se clasifica como Oxitol con textura glacia. El cultivo de frijol (Phaseolus vulgaris), se sembrará a los 0,50m entre hileras con 12 semillas por metro lineal ya las 2 semanas posteriores a la antesis (floración) se modificará el suministro de agua con óxido de deuterio para desarrollo experimental. El grano producido será cosechado para análisis experimental y consumo. El área experimental tendrá 5.000 m2 con cultivo de frijol común para producir la cantidad de granos suficiente para la ejecución del experimento. Las semillas se secarán en una escala de 1 a 10 kg de semillas secas y seleccionadas.

Análisis de Composición de Nutrientes (Año 1) Se separarán seis muestras de 100g cada una para análisis de composición de nutrientes, que se realizarán en el Laboratorio de Nutrición Animal del Instituto de Ciencia Animal de la Universidad de São Paulo, Brasil. Inmediatamente después de la cosecha, las muestras de alimentos serán pesadas y secadas en una estufa con circulación de aire forzado a 65 grados centígrados, durante 72 horas. Posteriormente, las muestras serán molidas en un molino con tamiz de orificio de 2 mm, y se tomará una submuestra para el análisis de masa seca, proteína, extracto etéreo, masa mineral, energía, calcio y fósforo, según Métodos Oficiales de Análisis ( AOAC) (1996). La fibra se analizará en detergente neutro y ácido según referencia Silva y Queiroz, 2005, y el selenio se analizará según Olson et al., 1975. El análisis energético será realizado por bomba calorimétrica y la grasa por extracción según referencia Bligh y Dyer, 1959, en el Laboratorio de Composición de Nutrientes de la Facultad de Medicina de Ribeirão Preto.

Segunda fase (estudio piloto), Instituto de Nutrición (Año 2) Sujetos Quince voluntarios adultos serán reclutados para la validación del método. Criterios de inclusión

• Adultos sanos, no embarazadas, de 18 a 65 años de edad
• No tomar ningún medicamento, incluidos los AINE.
• No tomar antibióticos dentro de las 4 semanas del estudio.
• IMC dentro del rango de 18-35
• Peso estable Criterios de exclusión
• Niños y ancianos (mayores de 65 años)
• El embarazo
• Diagnosticado con enfermedad no transmisible o transmisible
• Estar bajo una dieta restrictiva
• Antibióticos dentro de las 4 semanas de estudio
• Medicamentos dentro de las 4 semanas posteriores al estudio Diseño del estudio Después de la aprobación del proyecto por parte del comité de ética local y la obtención del consentimiento informado firmado, se ofrecerá a los voluntarios una comida de prueba con proteína de leche. La proteína de prueba en primer lugar será proteína de leche entera, producida con un bajo nivel de enriquecimiento de deuterio dentro del estudio. Esto permitirá que la proteína de una sola célula Carbon-13 se caracterice frente a una proteína animal bien estudiada que se sabe que posee una alta digestibilidad. La apariencia del aminoácido trazador (AA) en la circulación (también se tomarán muestras de sangre, saliva, orina y aliento) y la apariencia relativa de la proteína de prueba y de referencia se tomará como una medida de biodisponibilidad relativa que se puede convertir en una medida absoluta una vez. la proteína de referencia ha sido caracterizada. La medida básica será el enriquecimiento de isótopos estables en aminoácidos individuales.

Estudio piloto de fase 1, Instituto de Nutrición. Quince voluntarios adultos serán reclutados para la validación del método.

La Tercera Fase es en 15 niños (1-3 años, con diferente estado nutricional) y la Cuarta fase es en 15 ancianos (más de 65 años, con sarcopenia o no sarcopenia).

Comida de prueba 1: Frijoles remojados durante 3 h, se desecha el agua y se cocinan los frijoles durante 20 min en olla a presión.

La comida de prueba se separará mediante el uso durante dos semanas de frijoles sin etiquetar. Se adoptará el mismo enfoque que se usó en el estudio piloto de la proteína de la leche para estudiar la biodisponibilidad de las leguminosas de grano a través de la comparación simultánea con una cantidad modesta de proteína unicelular enriquecida con carbono 13 combinada en la misma comida de prueba.

A todos los grupos se les analizará la valoración de la ingesta alimentaria, nitrógeno urinario total y enriquecimiento de deuterio en proteínas. Se aplicarán cuatro Cuestionarios de Recuerdo de 24h a cada voluntario durante los periodos de ingesta de la comida de prueba, con el fin de verificar el consumo de proteínas y calorías. Se pedirá a los voluntarios que mantengan su ingesta habitual, para evitar cambios en el consumo de alimentos. El nitrógeno urinario total de las muestras se analizará por el método Kjeldahl con microdifusión de amonio. El enriquecimiento de isótopos específicos del compuesto en aminoácidos se analizará en muestras de saliva, orina, aliento y sangre. El Carbono-13 en el dióxido de carbono (CO2) del aliento y el Deuterio en el enriquecimiento de la orina serán analizados en Espectrometría de Masas de la Facultad de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP-USP), Brasil, SP.