Biodisponibilità delle proteine ​​da diete a base vegetale

Questo studio è diviso in 4 fasi. Prima Fase: Agricoltura (Anno 1) Descrizione del sito: L'esperimento si svolgerà presso la Fattoria Sperimentale dell'Agenzia per la Tecnologia Agroalimentare di San Paolo (APTA) a Ribeirao Preto, Brasile, alle coordinate geografiche 21°12'26" S e 47 °51'48" N e altitudine media di 646 m. Le precipitazioni annue sono di circa 1427 mm, con temperature medie massime e minime rispettivamente di 25°C e 19,3°C. Il terreno è classificato come Oxitol con tessitura grigia. La coltura del fagiolo (Phaseolus vulgaris), verrà coltivata a 0,50 m tra le file con 12 semi per metro lineare ea 2 settimane dall'antesi (fioritura) l'approvvigionamento idrico verrà modificato con ossido di deuterio a sviluppo sperimentale. Il grano prodotto sarà raccolto per l'analisi sperimentale e il consumo. L'area sperimentale avrà 5.000 m2 con coltura di fagioli comuni per produrre una quantità sufficiente di cereali per l'esperimento in corso. I semi saranno essiccati in una scala da 1 a 10 kg di semi secchi e selezionati.

Analisi della composizione dei nutrienti (Anno 1) Sei campioni da 100 g ciascuno saranno separati per l'analisi della composizione dei nutrienti, che sarà eseguita presso il Laboratorio di Nutrizione Animale dell'Istituto di Scienze Animali dell'Università di São Paulo, Brasile. Subito dopo la raccolta, i campioni di cibo saranno pesati ed essiccati in stufa a circolazione d'aria forzata a 65 gradi Celsius, per 72 ore. Successivamente, i campioni verranno macinati in un mulino con setaccio a fori da 2 mm e verrà prelevato un sottocampione per l'analisi di massa secca, proteine, estratto etereo, massa minerale, energia, calcio e fosforo, secondo i metodi ufficiali di analisi ( AOAC) (1996). La fibra sarà analizzata in detersivo neutro e acido secondo il riferimento Silva e Queiroz, 2005, e il selenio sarà analizzato secondo Olson et al., 1975. L'analisi energetica sarà eseguita da una bomba calorimetrica e grasso dall'estrazione secondo riferimento Bligh e Dyer, 1959, presso il Laboratorio di composizione dei nutrienti della Ribeirão Preto Medical School.

Seconda fase (studio pilota), Nutrition Institute (Anno 2) Soggetti Saranno reclutati quindici volontari adulti per la convalida del metodo. Criterio di inclusione

• Adulti sani, non gravidi di età compresa tra 18 e 65 anni
• Non assumere farmaci, compresi i FANS
• Non assumere antibiotici entro 4 settimane dallo studio
• BMI compreso tra 18 e 35
• Peso stabile Criteri di esclusione
• Bambini e anziani (over 65)
• Gravidanza
• Diagnosi di malattia non trasmissibile o trasmissibile
• Essere sotto dieta restrittiva
• Antibiotici entro 4 settimane dallo studio
• Farmaci entro 4 settimane dallo studio Disegno dello studio Dopo l'approvazione del progetto da parte del comitato etico locale e l'ottenimento del consenso informato firmato, ai volontari verrà offerto un pasto di prova con proteine ​​del latte. La proteina del test in primo luogo sarà la proteina del latte intero, prodotta con un arricchimento di deuterio a basso livello all'interno dello studio. Ciò consentirà di caratterizzare la proteina unicellulare Carbon-13 rispetto a una proteina animale ben studiata nota per possedere un'elevata digeribilità. L'aspetto dell'amminoacido tracciante (AA) nella circolazione (sangue; saliva, urina e respiro saranno anche campionati) e l'aspetto relativo del test e della proteina di riferimento saranno presi come misura della biodisponibilità relativa che può essere convertita in una misura assoluta una volta la proteina di riferimento è stata caratterizzata. La misura di base sarà l'arricchimento isotopico stabile in singoli amminoacidi.

Studio pilota di fase 1, Nutrition Institute. Saranno reclutati quindici volontari adulti per la validazione del metodo.

La Terza Fase è in 15 bambini (1-3 anni, con diverso stato nutrizionale) e la Quarta fase è in 15 anziani (più di 65 anni, con sarcopenia o non sarcopenia).

Pasto di prova 1: fagioli ammollati per 3 ore, acqua scartata e fagioli cotti per 20 minuti in pentola a pressione.

Il pasto di prova sarà separato dall'uso per due settimane di fagioli non etichettati. Lo stesso approccio utilizzato nello studio pilota sulle proteine ​​del latte sarà adottato per studiare la biodisponibilità dei legumi da granella attraverso il confronto simultaneo con una modesta quantità di proteina unicellulare arricchita di carbonio-13 combinata nello stesso pasto di prova.

In tutti i gruppi verrà analizzata la valutazione dell'assunzione di cibo, l'azoto urinario totale e l'arricchimento di deuterio in proteine. Durante i periodi di assunzione del pasto di prova, ad ogni volontario verranno applicati quattro questionari di richiamo di 24 ore, al fine di verificare il consumo proteico e calorico. Ai volontari verrà chiesto di mantenere la loro assunzione abituale, per evitare cambiamenti nel consumo di cibo. L'azoto urinario totale dei campioni sarà analizzato con il metodo Kjeldahl con microdiffusione di ammonio. L'arricchimento isotopico composto specifico in amminoacidi sarà analizzato in campioni di saliva, urina, respiro e sangue. Il carbonio-13 nell'anidride carbonica espirata (CO2) e il deuterio nell'arricchimento delle urine saranno analizzati nella Spettrometria di Massa della Scuola di Medicina di Ribeirão Preto (FMRP-USP), Brasile, SP.