Biodisponibilité des protéines des régimes à base de plantes

Cette étude est divisée en 4 phases. Première phase : Agriculture (Année 1) Description du site : L'expérience sera réalisée à la Ferme expérimentale de l'Agence de technologie agroalimentaire de São Paulo (APTA) à Ribeirao Preto, Brésil, aux coordonnées géographiques de 21°12'26" S e 47 °51'48" N et altitude moyenne de 646 m. La pluviométrie annuelle est d'environ 1427 mm, avec des températures maximales et minimales moyennes de 25°C et 19,3°C, respectivement. Le sol est classé Oxitol à texture glaise. La culture de haricot (Phaseolus vulgaris), sera cultivée à 0,50m entre les rangs avec 12 graines par mètre linéaire et à la 2 semaines après l'anthèse (floraison) l'approvisionnement en eau sera amendé avec de l'oxyde de deutérium pour le développement expérimental. Le grain produit sera récolté pour analyse expérimentale et consommation. La zone expérimentale aura 5.000 m2 avec une culture de haricot commun pour produire une quantité suffisante de grains pour l'exécution de l'expérience. Les graines seront séchées dans une échelle de 1 à 10 kg de graines sèches et sélectionnées.

Analyse de la composition des nutriments (Année 1) Six échantillons de 100 g chacun seront séparés pour des analyses de la composition des nutriments, qui seront effectuées au Laboratoire de nutrition animale de l'Institut des sciences animales de l'Université de São Paulo, Brésil. Immédiatement après la récolte, les échantillons alimentaires seront pesés et séchés dans un four à circulation d'air forcé à 65 degrés Celsius, pendant 72 heures. Après cela, des échantillons seront broyés dans un broyeur avec un tamis à trous de 2 mm, et un sous-échantillon sera prélevé pour l'analyse de la masse sèche, des protéines, de l'extrait d'éther, de la masse minérale, de l'énergie, du calcium et du phosphore, selon les méthodes officielles d'analyse ( AOAC) (1996). La fibre sera analysée en détergent neutre et acide selon la référence Silva et Queiroz, 2005, et le sélénium sera analysé selon Olson et al., 1975. L'analyse énergétique sera effectuée par une bombe calorimétrique et la graisse par extraction selon la référence Bligh et Dyer, 1959, au Laboratoire de composition des nutriments de la faculté de médecine de Ribeirão Preto.

Deuxième phase (étude pilote), Nutrition Institute (Année 2) Sujets Quinze volontaires adultes seront recrutés pour la validation de la méthode. Critère d'intégration

• Adultes en bonne santé, non enceintes, âgés de 18 à 65 ans
• Ne pas prendre de médicaments, y compris les AINS
• Ne pas prendre d'antibiotiques dans les 4 semaines suivant l'étude
• IMC dans la plage 18-35
• Poids stable Critères d'exclusion
• Enfants et personnes âgées (plus de 65 ans)
• Grossesse
• Diagnostiqué avec une maladie non transmissible ou transmissible
• Être sous régime restrictif
• Antibiotiques dans les 4 semaines suivant l'étude
• Médicaments dans les 4 semaines suivant l'étude Conception de l'étude Après approbation du projet par le comité d'éthique local et obtention d'un consentement éclairé signé, les volontaires se verront proposer un repas test contenant des protéines de lait. La protéine d'essai sera en premier lieu une protéine de lait entier, produite avec un faible enrichissement en deutérium dans le cadre de l'étude. Cela permettra de caractériser la protéine monocellulaire Carbone-13 par rapport à une protéine animale bien étudiée connue pour posséder une digestibilité élevée. L'apparition d'acides aminés traceurs (AA) dans la circulation (sang ; la salive, l'urine et l'haleine seront également échantillonnés) et l'apparence relative des protéines de test et de référence seront prises comme une mesure de la biodisponibilité relative qui peut être convertie en une mesure absolue une fois la protéine de référence a été caractérisée. La mesure de base sera celle de l'enrichissement en isotopes stables en acides aminés individuels.

Étude pilote de phase 1, Nutrition Institute. Quinze volontaires adultes seront recrutés pour valider la méthode.

La troisième phase concerne 15 enfants (1 à 3 ans, avec un statut nutritionnel différent) et la quatrième phase concerne 15 personnes âgées (plus de 65 ans, avec ou sans sarcopénie).

Repas test 1 : Haricots trempés pendant 3 h, eau jetée et haricots cuits pendant 20 min en autocuiseur.

Le repas test sera séparé par l'utilisation pendant deux semaines de haricots non étiquetés. La même approche que celle utilisée dans l'étude pilote sur les protéines du lait sera adoptée pour étudier la biodisponibilité des légumineuses à grains par comparaison simultanée avec une quantité modeste de protéines unicellulaires enrichies en carbone 13 combinées dans le même repas test.

Tous les groupes seront analysés : évaluation de la prise alimentaire, de l'azote urinaire total et de l'enrichissement du deutérium en protéines. Quatre questionnaires de rappel de 24h seront appliqués à chaque volontaire pendant les périodes de prise du repas test, afin de vérifier la consommation de protéines et de calories. Il sera demandé aux volontaires de conserver leur apport habituel, afin d'éviter les changements de consommation alimentaire. L'azote urinaire total des échantillons sera analysé par la méthode de Kjeldahl avec micro diffusion d'ammonium. L'enrichissement isotopique spécifique du composé en acides aminés sera analysé dans des échantillons de salive, d'urine, d'haleine et de sang. Le carbone 13 dans l'haleine, le dioxyde de carbone (CO2) et le deutérium dans l'enrichissement de l'urine seront analysés par spectrométrie de masse de l'école de médecine de Ribeirão Preto (FMRP-USP), Brésil, SP.