Neinvazivní screening fetální trizomie 21 pomocí digitální PCR (dPNI-T21)

Ve Francii, stejně jako v mnoha zemích světa, je trizomie 21 nebo Downův syndrom (DS) předmětem prenatálního screeningu založeného na výpočtu rizika (R) včetně stanovení biochemických markerů v mateřské krvi a měření fetální ultrazvukový parametr (nuchální translucence). V populaci těhotných žen označených jako vysoce rizikové (R> 1/250) se potvrzení diagnózy DS provádí invazivním odběrem vzorků (biopsie trofoblastu nebo amniocentéza), který umožňuje stanovení karyotypu plodu. Kromě omezené senzitivity (80 až 85 % v závislosti na technikách) je tento screening faktorem úzkosti (8 % falešně pozitivních) a potraty euploidních plodů (normální karyotyp) v 1 % případů (procedury invazivní).

Plazma těhotné ženy obsahuje směs volné DNA mateřského (90 %) a fetálního původu (cffDNA pro bezbuněčnou fetální DNA) (asi 10 %, ale tento podíl se zvyšuje v případech fetální trizomie 21. Podíl cffDNA je dostatečný pro kvalitativní i kvantitativní studium specifických genetických markerů páru chromozomů. Je tedy možné vyhodnotit množství sledovaných markerů v chromozomu vzhledem k referenčnímu chromozomovému markeru a vypočítat požadovaný poměr marker/marker, teoreticky identický pro všechny autozomy (chromozomy 1 až 22) během euploidního těhotenství. V případě fetální aneuploidie (například trizomie 21) je tento poměr pro příslušný chromozomální pár nevyvážený.

Pokroky v technologii, jako je vysokokapacitní hromadné sekvenování (MPS) a digitální PCR (dPCR), nyní umožňují uvažovat o diagnóze fetálního mateřského DS prostřednictvím studia cffDNA. Několik týmů již na toto téma publikovalo pomocí techniky MPS, aplikované přímo na volnou DNA z mateřské plazmy, nebo po kroku izolace cffDNA. To zahrnuje sekvenování fragmentů DNA přítomných ve vzorku a jejich umístění zpět na jejich původní chromozom. V případě fetální trizomie 21 se snažíme prokázat nadbytek sekvencí z chromozomu 21. Tyto techniky vyžadují drahé vybavení (sekvenátor, bioinformatická platforma, servery) a technický čas a důležitou analýzu (často několik dní na jeden běh). Pokud jde o výzkum aneuploidií pomocí digitální PCR (dPCR), je dnes kvůli absenci dostatečně výkonných přístrojů donedávna jen málo publikací. DPCR je levnější.