Detección no invasiva de trisomía fetal 21 mediante PCR digital (dPNI-T21)

En Francia, como en muchos países del mundo, la trisomía 21 o síndrome de Down (SD) es objeto de un cribado prenatal basado en un cálculo de riesgo (R) que incluye el ensayo de marcadores bioquímicos en la sangre materna y la medición de un parámetro ecográfico fetal (translucencia nucal). En la población de gestantes declaradas de alto riesgo (R > 1/250), la confirmación del diagnóstico de SD se realiza mediante muestreo invasivo (biopsia de trofoblasto o amniocentesis), que permite establecer el cariotipo fetal. Además de una sensibilidad limitada (80 a 85% según las técnicas), este cribado es un factor de ansiedad (8% falsos positivos), y abortos de fetos euploides (cariotipo normal) en un 1% de los casos (procedimientos invasivos).

El plasma de una mujer embarazada contiene una mezcla de ADN libre de origen materno (90%) y fetal (cffDNA por cell free fetal DNA) (alrededor del 10%, pero esta proporción aumenta en los casos de trisomía 21 fetal. La proporción de cffDNA es suficiente para estudiar cualitativa y cuantitativamente marcadores genéticos específicos de un par de cromosomas. Por tanto, es posible evaluar la cantidad de marcadores cromosómicos de interés en relación con un marcador cromosómico de referencia, y calcular una relación marcador/marcador de interés, teóricamente idéntica para todos los autosomas (cromosomas 1 a 22) durante el embarazo euploide. En caso de aneuploidía fetal (por ejemplo, trisomía 21), esta proporción está desequilibrada para el par cromosómico involucrado.

Los avances tecnológicos, como la secuenciación masiva de alto rendimiento (MPS) y la PCR digital (dPCR), ahora permiten considerar el diagnóstico de SD materno fetal a través del estudio de cffDNA. Varios equipos ya han publicado sobre este tema con la técnica MPS, aplicada directamente a ADN libre de plasma materno, o tras un paso de aislamiento de cffDNA. Esto implica secuenciar los fragmentos de ADN presentes en la muestra y colocarlos nuevamente en su cromosoma original. En caso de trisomía 21 fetal, se busca poner en evidencia un exceso de secuencias del cromosoma 21. Estas técnicas requieren equipos costosos (secuenciador, plataforma bioinformática, servidores) y un tiempo técnico y de análisis importante (muchas veces varios días para una sola corrida). En cuanto a la investigación de aneuploidías por PCR digital (dPCR), hoy en día son pocas las publicaciones debido a la ausencia de instrumentos suficientemente potentes hasta hace poco tiempo. DPCR es menos costoso.