Niet-invasieve screening van foetale trisomie 21 door digitale PCR (dPNI-T21)

In Frankrijk, zoals in veel landen van de wereld, is trisomie 21 of het syndroom van Down (DS) het onderwerp van een prenatale screening op basis van een risicoberekening (R), inclusief de analyse van biochemische markers in het bloed van de moeder en de meting van een foetale echografieparameter (nekhalsdoorschijnendheid). Bij de populatie van zwangere vrouwen waarvan wordt gezegd dat ze een hoog risico lopen (R> 1/250), wordt de diagnose van DS bevestigd door invasieve bemonstering (trofoblastbiopsie of vruchtwaterpunctie), waardoor het foetale karyotype kan worden vastgesteld. Naast een beperkte gevoeligheid (80 tot 85% afhankelijk van de technieken), is deze screening een angstfactor (8% fout-positieven) en miskramen van euploïde foetussen (normaal karyotype) in 1% van de gevallen (invasieve procedures).

Het plasma van een zwangere vrouw bevat een mengsel van vrij DNA van maternale (90%) en foetale oorsprong (cffDNA voor celvrij foetaal DNA) (ongeveer 10%, maar dit aandeel neemt toe in gevallen van foetale trisomie 21. Het aandeel cffDNA is voldoende om specifieke genetische markers van een paar chromosomen kwalitatief en kwantitatief te bestuderen. Het is daarom mogelijk om de hoeveelheid markers van het betreffende chromosoom te evalueren ten opzichte van een referentiechromosoommarker, en om een ​​marker/marker-verhouding van belang te berekenen, theoretisch identiek voor alle autosomen (chromosomen 1 tot 22) tijdens euploïde zwangerschap. In het geval van foetale aneuploïdie (bijvoorbeeld trisomie 21) is deze verhouding onevenwichtig voor het betrokken chromosomale paar.

Vooruitgang in technologie, zoals high-throughput mass sequencing (MPS) en digitale PCR (dPCR), maken het nu mogelijk om de diagnose van foetaal maternale DS te overwegen door middel van de studie van cffDNA. Verschillende teams hebben al over dit onderwerp gepubliceerd met de MPS-techniek, rechtstreeks toegepast op vrij DNA uit maternaal plasma, of na een cffDNA-isolatiestap. Dit houdt in dat de DNA-fragmenten in het monster worden gesequenced en teruggeplaatst op hun oorspronkelijke chromosoom. In het geval van foetale trisomie 21 probeert men bewijs te leveren van een teveel aan sequenties van chromosoom 21. Deze technieken vereisen dure apparatuur (sequencer, bio-informaticaplatform, servers) en een technische tijd en belangrijke analyse (vaak meerdere dagen voor een enkele run). Wat betreft het onderzoek naar aneuploïdieën door middel van digitale PCR (dPCR), zijn er vandaag weinig publicaties vanwege het ontbreken van voldoende krachtige instrumenten tot voor kort. DPCR is goedkoper.