Screening non invasivo della trisomia fetale 21 mediante PCR digitale (dPNI-T21)

In Francia, come in molti paesi del mondo, la trisomia 21 o sindrome di Down (DS) è oggetto di uno screening prenatale basato su un calcolo del rischio (R) comprendente il dosaggio dei marcatori biochimici nel sangue materno e la misurazione di un parametro ecografico fetale (traslucenza nucale). Nella popolazione di donne gravide dichiarate ad alto rischio (R>1/250), la conferma della diagnosi di DS viene effettuata mediante prelievo invasivo (biopsia del trofoblasto o amniocentesi), che consente di stabilire il cariotipo fetale. Oltre alla sensibilità limitata (dall'80 all'85% a seconda delle tecniche), questo screening è un fattore di ansia (8% di falsi positivi) e aborti spontanei di feti euploidi (cariotipo normale) nell'1% dei casi (procedure invasive).

Il plasma di una donna incinta contiene una miscela di DNA libero di origine materna (90%) e fetale (cffDNA per DNA fetale libero) (circa il 10%, ma questa proporzione aumenta nei casi di trisomia fetale 21. La proporzione di cffDNA è sufficiente per studiare qualitativamente e quantitativamente marcatori genetici specifici di una coppia di cromosomi. È quindi possibile valutare la quantità di marcatori cromosomici di interesse rispetto ad un marcatore cromosomico di riferimento, e calcolare un rapporto marcatore/marcatore di interesse, teoricamente identico per tutti gli autosomi (cromosomi da 1 a 22) durante la gravidanza euploide. In caso di aneuploidia fetale (ad esempio, trisomia 21), questo rapporto è sbilanciato per la coppia cromosomica coinvolta.

I progressi tecnologici, come il sequenziamento di massa ad alto rendimento (MPS) e la PCR digitale (dPCR), ora consentono di considerare la diagnosi di DS materna fetale attraverso lo studio del cffDNA. Diversi team hanno già pubblicato su questo argomento con la tecnica MPS, applicata direttamente al DNA libero dal plasma materno, o dopo una fase di isolamento del cffDNA. Ciò comporta il sequenziamento dei frammenti di DNA presenti nel campione e il loro riposizionamento sul loro cromosoma originale. In caso di trisomia 21 fetale si cerca di mettere in evidenza un eccesso di sequenze dal cromosoma 21. Queste tecniche richiedono attrezzature costose (sequencer, piattaforma bioinformatica, server) e un tempo tecnico e un'analisi importante (spesso diversi giorni per una singola corsa). Per quanto riguarda la ricerca delle aneuploidie mediante PCR digitale (dPCR), poche pubblicazioni sono oggi dovute all'assenza di strumenti sufficientemente potenti fino a tempi recenti. DPCR è meno costoso.