Неинвазивный скрининг трисомии 21 плода с помощью цифровой ПЦР (dPNI-T21)

Во Франции, как и во многих странах мира, трисомия 21 или синдром Дауна (СД) являются предметом антенатального скрининга, основанного на расчете риска (R), включающем определение биохимических маркеров в материнской крови и измерение ультразвуковой параметр плода (шейная прозрачность). В популяции беременных, отнесенных к группе высокого риска (R > 1/250), подтверждение диагноза СД проводят путем инвазивной биопсии (биопсия трофобласта или амниоцентез), что позволяет установить кариотип плода. Помимо ограниченной чувствительности (от 80 до 85% в зависимости от методик), этот скрининг является фактором беспокойства (8% ложноположительных результатов) и выкидышей эуплоидных плодов (нормальный кариотип) в 1% случаев (процедуры инвазивные).

Плазма беременной женщины содержит смесь свободной ДНК материнского (90%) и фетального происхождения (вкДНК для внеклеточной фетальной ДНК) (около 10%, но эта пропорция увеличивается в случаях фетальной трисомии 21). Доля вкДНК достаточна для качественного и количественного изучения специфических генетических маркеров пары хромосом. Таким образом, можно оценить количество маркеров интересующей хромосомы по отношению к эталонному маркеру хромосомы и рассчитать соотношение маркер/маркер интереса, теоретически идентичное для всех аутосом (хромосомы с 1 по 22) при эуплоидной беременности. В случае анеуплоидии плода (например, трисомии 21) это соотношение не сбалансировано для вовлеченной хромосомной пары.

Достижения в области технологий, такие как высокопроизводительное массовое секвенирование (MPS) и цифровая ПЦР (dPCR), теперь позволяют рассматривать диагноз DS плода у матери посредством изучения cffDNA. Несколько групп уже опубликовали работы по этому вопросу с использованием метода MPS, применяемого непосредственно к свободной ДНК из материнской плазмы или после этапа выделения вкДНК. Это включает в себя секвенирование фрагментов ДНК, присутствующих в образце, и их размещение на исходной хромосоме. В случае трисомии 21 плода стараются доказать наличие избытка последовательностей 21-й хромосомы. Эти методы требуют дорогостоящего оборудования (секвенатора, биоинформационной платформы, серверов), технического времени и важного анализа (часто несколько дней для одного запуска). Что касается исследования анеуплоидий методом цифровой ПЦР (дПЦР), то сегодня мало публикаций из-за отсутствия до недавнего времени достаточно мощных инструментов. DPCR дешевле.