Triagem Não Invasiva de Trissomia 21 Fetal por PCR Digital (dPNI-T21)

Na França, como em muitos países do mundo, a trissomia 21 ou síndrome de Down (SD) é objeto de uma triagem pré-natal baseada em um cálculo de risco (R) que inclui a análise de marcadores bioquímicos no sangue materno e a medição de um parâmetro ultrassonográfico fetal (translucência nucal). Na população de gestantes ditas de alto risco (R > 1/250), a confirmação do diagnóstico de SD é feita por amostragem invasiva (biópsia de trofoblasto ou amniocentese), que permite o estabelecimento do cariótipo fetal. Além da sensibilidade limitada (80 a 85% dependendo das técnicas), essa triagem é um fator de ansiedade (8% falsos positivos) e abortos espontâneos de fetos euploides (cariótipo normal) em 1% dos casos (procedimentos invasivos).

O plasma de uma gestante contém uma mistura de DNA livre de origem materna (90%) e fetal (cffDNA para DNA fetal livre de células) (cerca de 10%, mas essa proporção aumenta nos casos de trissomia 21 fetal. A proporção de cffDNA é suficiente para estudar qualitativa e quantitativamente marcadores genéticos específicos de um par de cromossomos. Assim, é possível avaliar a quantidade de cromossomos marcadores de interesse em relação a um marcador de cromossomo de referência, e calcular uma relação marcador/marcador de interesse, teoricamente idêntica para todos os autossomos (cromossomos 1 a 22) durante a gravidez euplóide. No caso de aneuploidia fetal (por exemplo, trissomia 21), esta relação é desequilibrada para o par cromossômico envolvido.

Avanços na tecnologia, como sequenciamento de massa de alto rendimento (MPS) e PCR digital (dPCR), agora permitem considerar o diagnóstico de SD materno fetal por meio do estudo do cffDNA. Várias equipes já publicaram sobre o assunto com a técnica de MPS, aplicada diretamente no DNA livre do plasma materno, ou após uma etapa de isolamento do cffDNA. Isso envolve sequenciar os fragmentos de DNA presentes na amostra e colocá-los de volta em seu cromossomo original. No caso da trissomia 21 fetal, busca-se evidenciar um excesso de sequências do cromossomo 21. Essas técnicas requerem equipamentos caros (sequenciador, plataforma bioinformática, servidores) e um tempo técnico e análises importantes (muitas vezes vários dias para uma única execução). No que diz respeito à pesquisa de aneuploidias por PCR digital (dPCR), poucas publicações são feitas hoje devido à ausência de instrumentos suficientemente potentes até recentemente. DPCR é menos dispendioso.