Konfokální laserová endomikroskopie k určení vlivu potravinových antigenů na integritu sliznice (RDS_CLE)

Pacienti s IBS nejasné etiologie, tj. non-IgE zprostředkovaná potravinová intolerance (FI), mají často dlouhý průběh utrpení. Není neobvyklé, že pacienti dodržují přísné diety, které si sami nařídili, aby zmírnili střevní a extraintestinální symptomy závislé na jídle. Tyto diety však s sebou nesou vysoké riziko podvýživy. V praxi se eliminační dieta s následnou provokací jednotlivých potravin snaží identifikovat spouštěče intolerancí. Protože však reakce na potravinové antigeny může nastat se zpožděním a nezřídka je přítomna kombinace několika intolerancí, je správná diagnóza často obtížná. To často vede k masivnímu snížení kvality života pacientů a opakovaným vyšetřením, jako jsou endoskopie trávicího traktu, které vedou k opětovné hospitalizaci pacienta.

Kromě lékařských přístupů ke zmírnění příznaků (léky na průjem, projímadla na zácpu) je zlepšení často dosaženo změnou stravy. V poslední době přibývá zpráv, že pacienti s IBS reagují na dietu se sníženým obsahem FODMAP (fermentovatelné oligo-, di- a monosacharidy a také polyoly) s výrazným zlepšením symptomů. Kromě toho pacienti s IBS často uvádějí významnou úlevu od symptomů při dodržování bezlepkové diety (GFD), takže současné odhady naznačují, že téměř polovina pacientů s IBS má prospěch z GFD.

Zavedení CLE poskytuje novou objektivní metodu pro detekci změn na buněčné úrovni. CLE umožňuje mikroskopické posouzení sliznice již při endoskopickém vyšetření a umožňuje tak vivo histologii s exaktním rozborem střevní sliznice.

Jiní již prokázali, že stimulace střevní sliznice potravinovými antigeny způsobuje zvýšenou permeabilitu a odlučování buněk u pacientů s FI (Fritscher-Ravens et al. Gastroenterologie 2014). Odpověď na potravinové antigeny může být vizualizována po podání intravenózního fluoresceinu a měření uvolňování fluroesceinu v lumen střeva. Velkou výhodou CLE je přímé lokální stanovení potravinových antigenů na střevní sliznici a identifikace pacientů, kteří mají klinicky relevantní FI.

Hypotéza: Navrhujeme, že pacienti s IBS a/nebo FI reagují silněji na slizniční aplikované potravinové antigeny než zdravé kontroly kvůli existujícímu střevnímu zánětu nízkého stupně. Plánujeme aplikovat pšenici, sóju, mléko, droždí a slepičí vaječný bílek během CLE a zaznamenat vylučování buněk a eflux fluoresceinu v lumen střeva. Protože je známo, že mnoho pacientů s IBS reaguje pozitivně na bezpšeničnou dietu, očekáváme nejsilnější slizniční odpověď zejména po aplikaci pšenice.

Cílem je prokázat naši hypotézu zvýšeným odlučováním buněk a zvýšeným efluxem fluoresceinu do střevního lumen.

Po CLE se odebírají vzorky tkáně pro rutinní histopatologickou analýzu. Kromě toho se odebírají slizniční biopsie a používají se k izolaci kmenových buněk a generování organoidů in vitro. Tyto organoidy jsou kultivovány a doplněny potravinovými antigeny a jsou stanoveny změny v proliferaci, genové, cytokinové a chemokinové expresi.

Primárním cílem je

• hodnocení CLE histopatologickými daty, to znamená určení pacientů, kteří mají dobrou shodu histopatologicky potvrzeného zánětu s hodnocením slizničních změn zjištěných u CLE
• zjistit počet pacientů s IBS, kteří mají odpověď nebo změnu permeability po aplikaci potravinových antigenů (pšenice, sója, mléko, kvasnice, slepičí vaječný bílek) u CLE

Sekundární cíle jsou

• identifikace molekulárních parametrů po stimulaci organoidů in vitro potravinovými antigeny
• korelace dat odvozených z in vitro organoidů s hodnocením in vivo během CLE

Studium je plánováno na období 2 let. 40 pacientů ve věku 18 let a starších s IBS, kteří mají klinickou potřebu ezofago-gastroduodenoskopie, např. do studie bude zahrnuta diagnóza IBS nebo vyloučení zánětlivého onemocnění střev, gastritidy, eozinofilní ezofagitidy nebo celiakie. Dále bude zahrnuto 20 zdravých kontrolních subjektů, které přijdou na preventivní lékařskou prohlídku.

Potravinové antigeny se aplikují během ezofago-gastroduodenoskopie, počínaje v distálním duodenu a postupující sekvenčně do proximálního duodena. Aplikace potravinových antigenů je náhodná. Biopsie se odebírají po aplikaci potravinových antigenů z duodenální sliznice a používají se pro histopatologickou analýzu nebo in vitro tvorbu organoidů.