Konfokalna endomikroskopia laserowa w celu określenia wpływu antygenów pokarmowych na integralność błony śluzowej (RDS_CLE)

Pacjenci z IBS o niejasnej etiologii, tj. nie-IgE-zależną nietolerancją pokarmową (FI), często cierpią przez długi czas. Nierzadko zdarza się, że pacjenci przestrzegają narzuconych przez siebie ścisłych diet w celu złagodzenia zależnych od pokarmu objawów jelitowych i pozajelitowych. Jednak diety te niosą ze sobą wysokie ryzyko niedożywienia. W praktyce dieta eliminacyjna, po której następuje prowokacja poszczególnych pokarmów, ma na celu zidentyfikowanie przyczyn nietolerancji. Jednakże, ponieważ reakcja na antygeny pokarmowe może wystąpić z opóźnieniem i nierzadko występuje kombinacja kilku nietolerancji, prawidłowa diagnoza jest często trudna. Często prowadzi to do znacznego pogorszenia jakości życia pacjentów i powtarzających się badań, takich jak endoskopia przewodu pokarmowego, co prowadzi do ponownej hospitalizacji pacjenta.

Poza medycznymi sposobami łagodzenia objawów (leki na biegunkę, środki przeczyszczające na zaparcia) poprawę często uzyskuje się poprzez zmianę diety. Ostatnio pojawia się coraz więcej doniesień, że pacjenci z IBS reagują na dietę o obniżonej zawartości FODMAP (fermentujące oligo-, di- i monosacharydy, a także poliole) ze znaczną poprawą objawów. Ponadto pacjenci z IBS często zgłaszają znaczną ulgę w objawach dzięki przestrzeganiu diety bezglutenowej (GFD), tak więc obecne szacunki sugerują, że prawie połowa pacjentów z IBS odnosi korzyści z GFD.

Wprowadzenie CLE zapewnia nową obiektywną metodę wykrywania zmian na poziomie komórkowym. CLE pozwala na mikroskopową ocenę błony śluzowej już podczas badania endoskopowego, a tym samym umożliwia histologię vivo z dokładną analizą błony śluzowej jelit.

Inni już wykazali, że stymulacja błony śluzowej jelit antygenami pokarmowymi powoduje zwiększoną przepuszczalność i złuszczanie komórek u pacjentów z FI (Fritscher-Ravens i wsp. Gastroenterologia 2014). Odpowiedź na antygeny pokarmowe można uwidocznić po dożylnym podaniu fluoresceiny i pomiarze uwalniania fluoresceiny w świetle jelita. Główną zaletą CLE jest bezpośrednia lokalna ocena antygenów pokarmowych na błonie śluzowej jelita oraz identyfikacja pacjentów z klinicznie istotnym FI.

Hipoteza: Sugerujemy, że pacjenci z IBS i/lub FI reagują silniej na antygeny pokarmowe podawane na błonę śluzową niż osoby zdrowe z grupy kontrolnej z powodu istniejącego stanu zapalnego jelit o niskim stopniu złośliwości. Planujemy zastosować pszenicę, soję, mleko, drożdże i białko jaja kurzego podczas CLE i rejestrować złuszczanie komórek i wypływ fluoresceiny w świetle jelita. Ponieważ wiadomo, że wielu pacjentów z IBS pozytywnie reaguje na dietę bez pszenicy, spodziewamy się najsilniejszej odpowiedzi śluzówkowej, zwłaszcza po zastosowaniu pszenicy.

Celem jest udowodnienie naszej hipotezy przez zwiększone wydalanie komórek i zwiększony wypływ fluoresceiny do światła jelita.

Po CLE pobiera się wycinki tkanek do rutynowej analizy histopatologicznej. Ponadto pobierane są biopsje błony śluzowej i wykorzystywane do izolacji komórek macierzystych i generowania organoidów in vitro. Organoidy te są hodowane i uzupełniane antygenami pokarmowymi oraz określane są zmiany w proliferacji, ekspresji genów, cytokin i chemokin.

Podstawowym celem jest

• ocena CLE z danymi histopatologicznymi, oznacza to określenie pacjentów, którzy mają dobre dopasowanie histopatologicznie potwierdzonego stanu zapalnego z oceną zmian błony śluzowej wykrytych w CLE
• określenie liczby pacjentów z IBS, u których wystąpiła odpowiedź lub zmiana przepuszczalności po zastosowaniu antygenów pokarmowych (pszenica, soja, mleko, drożdże, białko jaja kurzego) w CLE

Cele drugorzędne to

• identyfikacja parametrów molekularnych po stymulacji organoidów in vitro antygenami pokarmowymi
• korelacja danych pochodzących z organoidów in vitro z oceną in vivo podczas CLE

Studia zaplanowano na okres 2 lat. 40 pacjentów w wieku 18 lat i starszych z IBS, którzy mają kliniczną potrzebę wykonania gastroduodenoskopii przełyku, np. w celu zdiagnozowania IBS lub wykluczenia nieswoistego zapalenia jelit, zapalenia błony śluzowej żołądka, eozynofilowego zapalenia przełyku lub celiakii zostaną uwzględnione w badaniu. Ponadto uwzględnionych zostanie 20 zdrowych osób kontrolnych, które przyjdą na profilaktyczne badania lekarskie.

Antygeny pokarmowe są podawane podczas gastroduodenoskopii przełykowej, zaczynając od dystalnej części dwunastnicy i przechodząc kolejno do bliższej części dwunastnicy. Stosowanie antygenów pokarmowych jest losowe. Biopsje pobiera się po aplikacji antygenów pokarmowych z błony śluzowej dwunastnicy i wykorzystuje do analizy histopatologicznej lub wytwarzania organoidów in vitro.