Vliv ovoce baobabu na postprandiální glykémii u zdravých dospělých

Tato studie byla schválena Egas Moniz Cooperativa de Ensino Superior Ethics Committee (kód protokolu 518) a byla provedena v souladu s Helsinskou deklarací (Deklarace z roku 1975, revidovaná v roce 2000). Informovaný souhlas byl udělen všem způsobilým účastníkům po ústní a písemné informaci o studii.

Tato randomizovaná kontrolovaná klinická studie, slepá vůči subjektům, byla provedena s 31 subjekty přijatými na Campus Universitário Egas Moniz v Monte de Caparica v Portugalsku. Po podepsání kritérií způsobilosti a informovaného souhlasu byli účastníci podrobeni kritériím pro zařazení a vyloučení a následně náhodně rozděleni do kontrolních nebo intervenčních skupin. Metoda alokační sekvence byla založena na sekvenčních číslech. První pacient byl náhodně zařazen do intervenční nebo kontrolní skupiny a následující pacienti byli postupně přiděleni střídavě do každé skupiny. Každému účastníkovi byla přidělena kodifikace, aby byla zachována anonymita a zajištěna důvěrnost údajů.

Po období 8-10 hodin hladovění byl kontrolní skupině podáván OGTT a intervenční skupině byl podáván OGTT následovaný vodným extraktem baobabu.

Příprava vodného extraktu z baobabu:

Ovoce baobabu bylo zakoupeno na trhu v Benfice, který se nachází ve městě Luanda (Angola), a dovezeno do Lisabonu (Portugalsko) řádně zabalené v plastovém sáčku a uskladněné v suchém ekologickém lokálu, dokud nebude potřeba. Pro vodnou extrakci plodů bylo zváženo 40 ± 1 g dužiny, semen a červených filamentů a plody byly povařeny ve 300 ml vody po dobu 5 minut. Po pomalém ochlazení na teplotu místnosti byl extrakt poté umístěn do chladničky v nádobě, kde zůstal po dobu 8 hodin při průměrné teplotě 10 °C. BAE byl prosát pomocí síťového síta, čímž byl oddělen od semen a vláken, a následně byl podroben klinickému testu a antioxidačním testům. Pro antioxidační testy po filtraci extrakt prošel mixérem (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI), znovu zfiltroval, čímž se získaly homogenní vzorky, přičemž se během analýzy zabránilo tvorbě sraženin. Konečná koncentrace získaného vodného extraktu pro klinickou zkoušku i chemickou analýzu byla 0,1333 g Adansonia digitata L. (AD) / ml extraktu v čerstvé hmotnosti (FW).

Zásahy:

Po celonočním hladovění byla hladina glukózy v krvi hodnocena pomocí kapilární kapky krve bezprostředně před orálním testem tolerance glukózy (t0). Účastníci kontrolní skupiny požili samotný roztok glukózy (OGTT) připravený se 75 g bezvodé perorální glukózy podle předpisu American Dietetic Association (ADA), rozpuštěné ve 200 ml vody. Intervenční skupina požila roztok glukózy následovaný 250 ml vodného extraktu baobabu (33,33 g FW). Hladina glukózy v krvi byla také měřena 30 (t30), 60 (t60), 90 (t90) a 120 (t120) minut bezprostředně po intervenci, u každého účastníka, v kontrolní a intervenční skupině. Glukometrové zařízení, proužky pro glukometry (One Touch Select Plus) a sterilizované lancety (Sarstedt normal 21G) byly použity k měření koncentrací glukózy v krvi, přičemž byla věnována náležitá pozornost bezpečnosti a asepsi. Na základě hodnot glykémie byla pomocí programu GraphPad Prism (verze 5.0) definována přírůstková plocha glykémie pod křivkou (AUCi) každého účastníka. Maximální koncentrace (Cmax) a variace maximálních koncentrací (ACmax) byly stanoveny jejich porovnáním s jejich příslušnými základními hodnotami hladin glykémie.

Hodnocení antropometrických parametrů:

Byly také shromážděny antropometrické parametry, jmenovitě váha, výška a index tělesné hmotnosti (BMI). BMI byl vypočten jako hmotnost (kg) dělená výškou (m2) na druhou (kg/m2). Tělesná hmotnost byla odhadnuta pomocí bioimpedance, pomocí měřítka Inbody®, model 230.

Hodnocení příjmu potravy:

Účastníci studie vyplnili 24hodinový dotazník, který si vyžádal odvolání jídla, který byl vyšetřovatelem pečlivě instruován, aby identifikoval veškeré zkonzumované potraviny. Množství každé požité potraviny bylo odhadnuto pomocí obrázků. Byla použita kniha s obrázky jídel v různých velikostech. Výzkumník společně s účastníkem dotazník přezkoumal. Příjem potravy každého účastníka byl analyzován pomocí softwaru The Food Processor SQL (verze 11.3.285). získání celkové energie, průměrný příjem sacharidů, bílkovin a lipidů.

Hodnocení obsahu celkového fenolu, proanthokyanidinů a hydrolyzovatelných taninů:

Celková koncentrace fenolu byla stanovena metodou Folin Ciocalteu s použitím kyseliny gallové jako standardu. Výsledky byly vyjádřeny jako mg ekvivalentů kyseliny gallové/l (GAE/l). Pro tuto analýzu bylo 125 μl BAE, předem zředěného (x15) ve vodě a 125 μl ethanolu přidáno do 2,5 ml roztoku Folin-Ciocalteuova činidla (1:10 zředěného v H2O) a 2 ml vodného uhličitanu sodného (Na2CO3) 1 mil. Po 15 minutách byla změřena absorbance při 765 nm.

Obsah proanthokyanidinů byl stanoven podle metody Gu et al (2002) s modifikacemi, která je založena na kyselé hydrolýze polymerů proanthokyanidinů za vzniku načervenalých pigmentů v horkém roztoku 1-butanolu/kyseliny chlorovodíkové. Bylo přidáno 200 μl BAE zředěného (2x) do 200 μl methanolu a 2600 μl 10% (v/v) roztoku HCl/1-butanol. Zkumavky byly protřepány a inkubovány při 100 °C po dobu 50 minut. Absorbance byla měřena při 550 nm. Výsledky jsou vyjádřeny jako mg ekvivalenty proanthokyanidinů A2/L (EPA2/L).

Metoda Willise a Allena byla upravena pro stanovení hydrolyzovatelných taninů BAE. Objem 1 ml extraktu byl přidán k 5 ml 2,5% jodičnanu draselného (KI03). Směs byla poté míchána a vrácena do vodní lázně při 25 °C na 20 minut. Odečítání absorbance bylo provedeno spektrofotometrem při 550 nm a výsledky byly vyjádřeny jako mg ekvivalentů kyseliny tříslové/l (TAE/L).

Antioxidační testy:

Metoda Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP): antioxidační účinek (redukční schopnost) byl hodnocen sledováním tvorby intenzivní modré barvy z komplexu Fe2+ TPTZ, podle testu Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP). Objem 2850 ul (25 ml 300 mM acetátového pufru pH=3,6 roztoku plus 2,5 ml 10 mM roztoku TPTZ v HC1 40 mM + 2,5 ml 20 mM FeCl3.6H20 roztok) byl přidán do 150 ul zředěného BAE.. Zkumavky byly udržovány ve tmě po dobu 30 minut (7 testů při různých koncentracích). Absorbance byla stanovena při 593 nm a výsledky byly vyjádřeny v mg ekvivalentů Troloxu/l (TE/L).

Metoda ABTS: tato metoda byla založena na schopnosti vzorku inhibovat radikál ABTS (ABTS+) ve srovnání s referenčním antioxidačním standardem (Trolox). Radikál ABTS+ vznikl chemickou reakcí s persíranem draselným (K2S2O8). Tak bylo 25 ml ABTS (7 mM) přidáno ke 440 ul K2S208 (140 mM) a ponecháno stát ve tmě při teplotě místnosti po dobu 12-16 hodin. Roztok byl připraven odebráním objemu předchozího roztoku a jeho zředěním v ethanolu, dokud jeho absorbance při λ = 734 nm nebyla 0,70. Zkumavky byly udržovány ve tmě po dobu 30 minut. Výsledky jsou vyjádřeny v mg ekvivalentů Troloxu/l (TE/L).

Metoda DPPH: tato metoda byla stanovena pomocí 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazylového radikálového scavengeru. Objem 150 ul BAE byl přidán do 2850 ul roztoku DPPH předem připraveného v methanolu s λ=515 nm 1,1. Roztoky byly udržovány po dobu 24 hodin v nepřítomnosti světla. Absorbance byla stanovena při 515 nm a výsledky vyjádřeny v mg Trolox ekvivalentů/l (TE/L).

Inhibiční kapacita O2•- aniontu a NO radikálu:

Superoxidový anion je generován oxidací NADH reakcí s PMS a kyslíkem, což způsobuje redukci NBT. Objem 500 μl BAE s různou koncentrací byl přidán do 2 ml NADH (189 μM) a NBT (120 μM) ve 40 mM Tris-HCl pufru pH 8. Reakce byla zahájena po přidání 0,5 ml PMS (60 uM) a po 5 minutách inkubace při teplotě místnosti byla měřena absorbance při 560 nm.

Test inhibice NO radikálů byl založen na metodě Nikkhaha a spolupracovníků (2008). Objem 250 μl BAE s různými koncentracemi byl přidán k 1 ml nitroprusidu sodného a 250 μl fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS). Směs byla udržována po dobu 150 minut při 25 °C. Poté bylo 0,5 ml této směsi přidáno k 1 ml sulfanilové kyseliny (0,33% v 20% ledové kyselině octové) a udržováno po dobu 5 minut při teplotě místnosti. Poté byl přidán 1 ml NED (0,1 % hmotn./obj.) a tato směs byla udržována po dobu 30 minut při 25 °C. Na konci reakce se vytvořil růžový chromofor. Absorbance byla měřena při 540 nm. Procento inhibice radikálů O2•- a NO bylo stanoveno pomocí rovnice 1 a výsledky byly vyjádřeny jako mg ekvivalentů kyseliny gallové (GAE)/l.

Statistická analýza:

Statistická analýza byla provedena pomocí softwaru Excel® a SPSS® (Statistical Package for Social Sciences) verze 27.0 pro Mac. Data jsou prezentována jako průměr ± SD (standardní odchylka) a SEM (standardní chyba průměru). Opakované měření ANOVA smíšeného typu bylo použito k posouzení rozdílu mezi 2 skupinami pro postprandiální glykémii v různých časech. Nezávislý t-test vzorků byl použit k posouzení rozdílu mezi 2 skupinami pro antropometrické parametry, celkový energetický příjem, sacharidy, bílkoviny a lipidy, hodnoty Cmax, ΔCmax a AUCi. Všechny statistické testy byly provedeny na 5% hladině významnosti.