Effect van baobabfruit op postprandiale glykemie bij gezonde volwassenen

Deze studie werd goedgekeurd door Egas Moniz Cooperativa de Ensino Superior Ethics Committee (protocolcode 518) en werd uitgevoerd in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki (Verklaring van 1975, herzien in 2000). Een geïnformeerde toestemming werd gegeven aan alle in aanmerking komende deelnemers, na mondelinge en schriftelijke informatie over het onderzoek.

Deze gerandomiseerde gecontroleerde klinische studie, blind voor proefpersonen, werd uitgevoerd met 31 proefpersonen, aangeworven op de Campus Universitário Egas Moniz, in Monte de Caparica, Portugal. Nadat de geschiktheidscriteria en de geïnformeerde toestemming waren ondertekend, werden de deelnemers onderworpen aan de in- en uitsluitingscriteria en vervolgens willekeurig toegewezen aan controle- of interventiegroepen. De methode van toewijzingsvolgorde was gebaseerd op opeenvolgende nummers. De eerste patiënt werd willekeurig toegewezen aan de interventie- of controlegroep en de volgende patiënten werden achtereenvolgens afwisselend toegewezen aan elke groep. Aan elke deelnemer werd een codificatie toegekend om de anonimiteit te behouden en de vertrouwelijkheid van de gegevens te waarborgen.

Na een periode van 8-10 uur vasten kreeg de controlegroep OGTT en de interventiegroep kreeg OGTT gevolgd door baobab waterig extract.

Bereiding van baobab-extract in water:

Het baobabfruit werd gekocht op de markt van Benfica, gelegen in de stad Luanda (Angola) en naar Lissabon (Portugal) gebracht, naar behoren verpakt in een plastic zak en opgeslagen in een gedroogde lokale omgeving totdat het nodig was. Voor de waterige extractie van de vrucht werd 40 ± 1 g pulp, zaden en rode filamenten gewogen en de vrucht werd gekookt in 300 ml water gedurende 5 minuten. Na langzaam afkoelen tot kamertemperatuur werd het extract vervolgens in een koelkast in een container geplaatst waar het gedurende 8 uur bij een gemiddelde temperatuur van 10°C bleef staan. Het BAE werd gezeefd met behulp van een netzeef, waarbij het werd gescheiden van de zaden en filamenten, en werd vervolgens onderworpen aan de klinische proef en de antioxidanttesten. Voor de antioxidanttesten werd het extract na filtratie door de blender geleid (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI), opnieuw gefilterd om homogene monsters te verkrijgen, waarbij de vorming van precipitaten tijdens de analyse werd vermeden. De eindconcentratie van het verkregen waterige extract, voor zowel klinische proef als chemische analyse, was 0,1333 g Adansonia digitata L. (AD) / ml extract vers gewicht (FW).

Interventies:

Na een nacht vasten werd de bloedglucosespiegel bepaald door middel van een capillaire bloeddruppel, onmiddellijk voor de orale glucosetolerantietest (t0). De deelnemers aan de controlegroep namen alleen glucose-oplossing (OGTT) in, bereid met 75 g watervrije orale glucose zoals voorgeschreven door de American Dietetic Association (ADA), opgelost in 200 ml water. De interventiegroep nam glucose-oplossing in, gevolgd door 250 ml baobab extract in water (33,33 g FW). De bloedglucosespiegel werd ook gemeten op 30 (t30), 60 (t60), 90 (t90) en 120 (t120) minuten onmiddellijk na interventie, voor elke deelnemer, in controle- en interventiegroepen. Glucometerapparatuur, strips voor glucosemeters (One Touch Select Plus) en gesteriliseerde lancetten (Sarstedt normaal 21G) werden gebruikt om de bloedglucoseconcentraties te meten, met inachtneming van de veiligheid en asepsis. Op basis van de glykemiewaarden werd de bloedglucose-incrementele oppervlakte onder de curve (AUCi) van elke deelnemer bepaald met behulp van het programma GraphPad Prism (versie 5.0). Maximale concentraties (Cmax) en variaties van maximale concentraties (ACmax) werden bepaald door ze te vergelijken met hun respectievelijke basiswaarden voor glykemieniveaus.

Beoordeling van antropometrische parameters:

De antropometrische parameters werden ook verzameld, namelijk gewicht, lengte en body mass index (BMI). De BMI werd berekend als gewicht (Kg) gedeeld door lengte (m2) in het kwadraat (Kg/m2). Het lichaamsgewicht werd geschat door middel van bio-impedantie, door middel van de Inbody®, model 230 weegschaal.

Beoordeling van inname via de voeding:

Deelnemers aan het onderzoek vulden een 24-uurs voedselherinneringsvragenlijst in, die zorgvuldig werden geïnstrueerd door een onderzoeker om al het geconsumeerde voedsel te identificeren. De hoeveelheid van elk ingenomen voedsel werd geschat met behulp van foto's. Er is gebruik gemaakt van een boek met afbeeldingen van maaltijden in verschillende formaten. De onderzoeker nam samen met de deelnemer de vragenlijst door. De voedselinname van elke deelnemer werd geanalyseerd met behulp van de software The Food Processor SQL (versie 11.3.285) het verkrijgen van totale energie, koolhydraten, eiwitten en lipiden betekent inname.

Totaal gehalte aan fenol, proanthocyanidinen en hydrolyseerbare tannines:

De totale fenolconcentratie werd bepaald volgens de Folin Ciocalteu-methode waarbij standaard galluszuur werd gebruikt. Resultaten werden uitgedrukt als mg galluszuurequivalenten/L (GAE/L). Voor deze analyse werd 125 μl BAE, eerder verdund (x15) in water en 125 μl ethanol toegevoegd aan 2,5 ml Folin-Ciocalteu-reagensoplossing (1:10 verdund in H2O) en 2 ml waterig natriumcarbonaat (Na2CO3). 1M. Na 15 minuten werd de absorptie gemeten bij 765 nm.

Het gehalte aan proanthocyanidinen werd bepaald volgens de methode van Gu et al (2002) met aanpassingen, die is gebaseerd op zure hydrolyse van proanthocyanidinenpolymeren die roodachtige pigmenten produceren in hete 1-butanol/zoutzuuroplossing. Er werd 200 μl BAE verdund (x2) toegevoegd aan 200 μl methanol en 2600 μl HCl /1-butanol 10% (v/v) oplossing. De reageerbuizen werden geschud en gedurende 50 minuten bij 100°C geïncubeerd. De absorptie werd gemeten bij 550 nm. Resultaten worden uitgedrukt als mg-equivalenten van proanthocyanidinen A2/L (EPA2/L).

De methode van Willis en Allen werd aangepast voor de bepaling van hydrolyseerbare tannines van de BAE. Een volume van 1 ml extract werd toegevoegd aan 5 ml 2,5% kaliumjodaat (KIO3). Het mengsel werd vervolgens geroerd en gedurende 20 minuten in het waterbad van 25°C geplaatst. Absorptiemeting werd uitgevoerd door een spectrofotometer bij 550 nm en de resultaten werden uitgedrukt als mg looizuurequivalenten/L (TAE/L).

Antioxidant-testen:

Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP)-methode: het antioxiderende effect (reducerend vermogen) werd geëvalueerd door de vorming van een intens blauwe kleur uit het Fe2+ TPTZ-complex te volgen, volgens de Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP)-assay. Een volume van 2850µl (25ml 300mM acetaatbuffer pH=3,6 oplossing plus 2,5 ml 10mM TPTZ oplossing in HCl 40mM + 2,5 ml 20mM FeCl3.6H2O oplossing) werd toegevoegd aan 150 µl verdunde BAE.. De buisjes werden 30 minuten in het donker bewaard (7 assays bij verschillende concentraties). De absorptie werd bepaald bij 593 nm en de resultaten werden uitgedrukt in mg Trolox-equivalenten/L (TE/L).

ABTS-methode: deze methode was gebaseerd op het vermogen van een monster om het ABTS-radicaal (ABTS+) te remmen in vergelijking met een referentie-antioxidantstandaard (Trolox). Het ABTS+-radicaal werd gegenereerd door een chemische reactie met kaliumpersulfaat (K2S2O8). Aldus werd 25 ml ABTS (7 mM) toegevoegd aan 440 µl K2S208 (140 mM) en men liet het gedurende 12-16 uur bij kamertemperatuur in het donker staan. De oplossing werd bereid door een volume van de voorgaande oplossing te nemen en deze te verdunnen in ethanol totdat de absorptie bij A = 734 nm 0,70 was. De buizen werden 30 minuten in het donker bewaard. De resultaten uitgedrukt in mg Trolox-equivalenten/L (TE/L).

De DPPH-methode: deze methode werd bepaald door de 2,2-difenyl-1-picrylhydrazylradicaalvanger. Een volume van 150 μl BAE werd toegevoegd aan 2850 μl DPPH-oplossing die eerder was bereid in methanol met een λ=515 nm van 1,1. De oplossingen werden 24 uur in afwezigheid van licht bewaard. De absorptie werd bepaald bij 515 nm en de resultaten werden uitgedrukt in mg Trolox-equivalenten/L (TE/L).

Remmingscapaciteit van O2•- anion en NO radicaal:

Het superoxide-anion wordt gegenereerd door oxidatie van NADH door te reageren met PMS en zuurstof, waardoor NBT wordt gereduceerd. Een volume van 500 μl BAE met verschillende concentraties werd toegevoegd aan 2 ml NADH (189 μM) en NBT (120 μM) in 40 mM Tris-HCl-buffer pH 8. De reactie werd gestart na toevoeging van 0,5 ml PMS (60 uM) en na 5 minuten incubatie bij kamertemperatuur werd de absorptie gemeten bij 560 nm.

De inhibitie NO radicale test was gebaseerd op de methode van Nikkhah en collega's (2008). Een volume van 250 μl BAE met verschillende concentraties werd toegevoegd aan 1 ml natriumnitroprusside en 250 μl fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Het mengsel werd 150 minuten op 25°C gehouden. Vervolgens werd 0,5 ml van dit mengsel toegevoegd aan 1 ml sulfanilzuur (0,33% in 20% ijsazijn) en gedurende 5 minuten op kamertemperatuur gehouden. Daarna werd 1 ml NED (0,1% w/v) toegevoegd en werd dit mengsel gedurende 30 minuten op 25°C gehouden. Aan het einde van de reactie werd een roze chromofoor gevormd. De absorptie werd gemeten bij 540 nm. Het percentage remming van O2•- en NO-radicalen werd bepaald met vergelijking 1 en de resultaten werden uitgedrukt in mg galluszuurequivalenten (GAE)/L.

Statistische analyse:

Statistische analyse werd uitgevoerd met behulp van Excel® en SPSS® (Statistical Package for Social Sciences) versie 27.0 software voor Mac. Gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± SD (standaarddeviatie) en SEM (standaardfout van het gemiddelde). Herhaalde meting ANOVA van gemengd type werd gebruikt om het verschil tussen de 2 groepen voor postprandiale bloedglucose op verschillende tijdstippen te beoordelen. De Independent Samples t-test werd gebruikt om het verschil tussen de 2 groepen te beoordelen voor antropometrische parameters, totale energie-inname, koolhydraten, eiwitten en lipiden, Cmax, ΔCmax en AUCi-waarden. Alle statistische tests werden uitgevoerd op het significantieniveau van 5%.