A baobab gyümölcs hatása az étkezés utáni glikémiára egészséges felnőtteknél

Ezt a vizsgálatot az Egas Moniz Cooperativa de Ensino Superior Ethics Committee (518-as protokollkód) hagyta jóvá, és a Helsinki Nyilatkozat (1975-ös nyilatkozat, 2000-ben felülvizsgálva) szerint végezték. A vizsgálattal kapcsolatos szóbeli és írásbeli tájékoztatást követően minden jogosult résztvevő tájékoztatáson alapuló beleegyezést kapott.

Ezt a randomizált, kontrollált klinikai vizsgálatot az alanyok számára vakon végezték 31 alany bevonásával, akiket a Campus Universitário Egas Moniz-ban vettek fel, Monte de Caparicában, Portugáliában. A jogosultsági kritériumok és a beleegyezés aláírása után a résztvevőket alávettük a felvételi és kizárási kritériumoknak, majd véletlenszerűen beosztották a kontroll- vagy intervenciós csoportokba. Az allokációs szekvencia módszere szekvenciális számokon alapult. Az első beteget véletlenszerűen besorolták az intervenciós vagy kontrollcsoportba, a következő betegeket pedig egymás után felváltva osztották be az egyes csoportokba. Az anonimitás megőrzése és az adatok bizalmas kezelésének biztosítása érdekében minden résztvevőnek kodifikációt rendeltek.

8-10 órás éheztetés után a kontrollcsoport OGTT-t, az intervenciós csoport OGTT-t, majd baobab vizes kivonatot kapott.

Baobab vizes kivonat készítmény:

A baobab gyümölcsöt a Benfica piacán vásárolták, amely Luanda városában (Angola) található, és Lisszabonba (Portugália) hozták megfelelően műanyag zacskóba csomagolva, és szárított, környezetbarát helyen tárolták, amíg szükség volt rá. A gyümölcs vizes extrakciójához 40 ± 1 g pépet, magvakat és vörös szálakat mértünk le, majd a gyümölcsöt 300 ml vízben 5 percig főztük. Lassan szobahőmérsékletre hűtjük, majd az extraktumot hűtőszekrénybe helyezzük egy edényben, ahol 8 órán át átlagosan 10 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. A BAE-t hálószita segítségével szitálták, elválasztva a magoktól és filamentumoktól, majd klinikai vizsgálatnak és antioxidáns vizsgálatnak vetették alá. Az antioxidáns vizsgálatokhoz szűrést követően az extraktumot a keverőn (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI) engedtük át, majd ismét szűrtük, így homogén mintákat kaptunk, elkerülve a csapadékképződést az analízis során. A kapott vizes kivonat végső koncentrációja mind a klinikai vizsgálat, mind a kémiai elemzés során 0,1333 g Adansonia digitata L. (AD)/ml kivonat friss tömege (FW) volt.

Beavatkozások:

Éjszakai koplalás után a vércukorszintet kapilláris csepp vérrel határoztuk meg, közvetlenül az orális glükóz tolerancia teszt (t0) előtt. A kontrollcsoport résztvevői önmagában glükózoldatot (OGTT) fogyasztottak, amelyet 75 g vízmentes orális glükózból készítettek az American Dietetic Association (ADA) előírásai szerint, 200 ml vízben oldva. Az intervenciós csoport glükózoldatot, majd 250 ml baobab vizes kivonatot (33,33 g FW) fogyasztott. Közvetlenül a beavatkozás után 30 (t30), 60 (t60), 90 (t90) és 120 (t120) perccel vércukorszintet is mértek minden résztvevőnél, a kontroll és az intervenciós csoportokban. A vércukorszint mérésére glükométer berendezést, cukormérő csíkokat (One Touch Select Plus) és sterilizált lándzsákat (Sarstedt normal 21G) használtak, a biztonságra és az aszepszisre kellő figyelemmel. A glikémiás értékek alapján a GraphPad Prism program (5.0 verzió) segítségével meghatároztuk az egyes résztvevők vércukorszint-növekmény görbe alatti területét (AUCi). A maximális koncentrációkat (Cmax) és a maximális koncentrációk változásait (ΔCmax) úgy határoztuk meg, hogy összehasonlították őket a megfelelő kiindulási glikémia szintértékekkel.

Antropometriai paraméterek értékelése:

Az antropometriai paramétereket is gyűjtöttük, nevezetesen a súlyt, magasságot és testtömeg-indexet (BMI). A BMI-t úgy számítottuk ki, hogy a súly (kg) osztva a magasság (m2) négyzetével (kg/m2). A testtömeget bioimpedanciával becsülték meg, az Inbody® skálán, a 230-as modellen.

Diétás lenyelés értékelése:

A vizsgálat résztvevői egy 24 órás élelmiszer-felidéző ​​kérdőívet töltöttek ki, amelyet egy kutató gondosan utasított az elfogyasztott élelmiszerek azonosítására. Az egyes élelmiszerek mennyiségét képek segítségével becsültük meg. Különböző méretű ételek képeit tartalmazó könyvet használtak. A vizsgáló a kérdőívet a résztvevővel együtt nézte át. Az egyes résztvevők táplálékfelvételét a The Food Processor SQL (11.3.285-ös verzió) szoftverrel elemeztük. az összenergia megszerzése, a szénhidrátok, fehérjék és lipidek bevitelét jelenti.

Összes fenol-, proantocianidinek és hidrolizálható tannintartalom értékelése:

A teljes fenolkoncentrációt Folin Ciocalteu módszerrel határoztuk meg, standard gallussavat alkalmazva. Az eredményeket mg galluszsav ekvivalens/L (GAE/L) mértékegységben fejeztük ki. Ehhez az elemzéshez 125 μl, előzetesen vízzel (15x) hígított BAE-t és 125 μl etanolt adtunk 2,5 ml Folin-Ciocalteu reagens oldathoz (1:10 H2O hígítás) és 2 ml vizes nátrium-karbonáthoz (Na2CO3). 1M. 15 perc elteltével az abszorbanciát 765 nm-en mértük.

A proantocianidin-tartalmat Gu és mtsai (2002) módosításokkal módosított módszere szerint határoztuk meg, amely a proantocianidin polimerek vöröses pigmenteket termelő savas hidrolízisén alapul forró 1-butanol/sósav oldatban. Hozzáadtunk 200 μl BAE-t hígítva (x2) 200 μl metanolhoz és 2600 μl HCl/1-butanol 10%-os (v/v) oldatot. A kémcsöveket összeráztuk és 100 °C-on 50 percig inkubáltuk. Az abszorbanciát 550 nm-en mértük. Az eredményeket a proantocianidinek A2/L (EPA2/L) mg-egyenértékében fejezzük ki.

Willis és Allen módszerét a BAE hidrolizálható tanninjainak meghatározására adaptálták. 1 ml kivonatot adunk 5 ml 2,5%-os kálium-jodáthoz (KIO3). Az elegyet ezután keverjük, és 20 percre visszatesszük a 25 °C-os vízfürdőbe. Az abszorbancialeolvasást spektrofotométerrel végeztük 550 nm-en, és az eredményeket mg csersav-ekvivalens/l-ben (TAE/L) fejeztük ki.

Antioxidáns vizsgálatok:

Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) módszer: az antioxidáns hatást (redukáló képességet) a Fe2+ TPTZ komplexből származó intenzív kék szín képződésének monitorozásával értékelték a Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) vizsgálat szerint. 2850 µl térfogat (25 ml 300 mM acetát puffer pH=3,6 oldat plusz 2,5 ml 10 mM TPTZ oldat 40 mM HCl-ben + 2,5 ml 20 mM FeCl3.6H2O oldat) 150 µl hígított BAE-hez adtuk. A csöveket 30 percig sötétben tartottuk (7 vizsgálat különböző koncentrációkban). Az abszorbanciát 593 nm-en határoztuk meg, és az eredményeket mg Trolox-ekvivalens/L-ben (TE/L) fejeztük ki.

ABTS-módszer: ez a módszer a minta ABTS-gyök-gátló képességén (ABTS+) alapult, összehasonlítva egy referencia antioxidáns standarddal (Trolox). Az ABTS+ gyököt kálium-perszulfáttal (K2S2O8) végzett kémiai reakcióval hoztuk létre. Így 25 ml ABTS-t (7 mM) adtunk 440 µl K2S2O8-hoz (140 mM), és hagytuk sötétben szobahőmérsékleten 12-16 órán át állni. Az oldatot úgy állítottuk elő, hogy az előző oldatból vettünk egy térfogatot, és etanollal hígítottuk, amíg abszorbanciája λ = 734 nm-en 0,70 nem lesz. A csöveket 30 percig sötétben tartottuk. Az eredmények mg Trolox-ekvivalens/L-ben (TE/L) kifejezve.

A DPPH módszer: ezt a módszert a 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil gyökfogó határozta meg. 150 μl BAE térfogatot adtunk 2850 μl DPPH oldathoz, amelyet előzőleg metanolban készítettek el, λ=515 nm 1,1-es értékkel. Az oldatokat 24 órán át fény nélkül tartottuk. Az abszorbanciát 515 nm-en határoztuk meg, és az eredményeket mg Trolox-ekvivalens/L-ben (TE/L) fejeztük ki.

O2•-anion és NO gyök gátló képessége:

A szuperoxid anion a NADH oxidációja során keletkezik, PMS-sel és oxigénnel reagálva, ami az NBT redukcióját okozza. 500 μl különböző koncentrációjú BAE-t adtunk 2 ml NADH-hoz (189 μM) és NBT-hez (120 μM) 40 mM Tris-HCl pufferben, pH 8. A reakciót 0,5 ml PMS (60 μM) hozzáadása után kezdtük meg, majd 5 perces szobahőmérsékleten végzett inkubálás után az abszorbanciát 560 nm-en mértük.

A gátlási NO-gyök teszt Nikkhah és munkatársai (2008) módszerén alapult. 250 μl térfogatú különböző koncentrációjú BAE-t adtunk 1 ml nátrium-nitroprusszidhoz és 250 μl foszfáttal pufferolt sóoldathoz (PBS). Az elegyet 150 percig 25 °C-on tartjuk. Ezután ebből a keverékből 0,5 ml-t adunk 1 ml szulfanilsavhoz (0,33%-os 20%-os jégecetben), és 5 percig szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután hozzáadunk 1 ml NED-et (0,1 tömeg/térfogat%), és az elegyet 30 percig 25 °C-on tartjuk. A reakció végén rózsaszín kromofor képződik. Az abszorbanciát 540 nm-en mértük. Az O2•- és NO gyökök gátlásának százalékos arányát az 1. egyenlettel határoztuk meg, és az eredményeket mg galluszsav-ekvivalens (GAE)/l-ben fejeztük ki.

Statisztikai analízis:

A statisztikai elemzést az Excel® és az SPSS® (Statistical Package for Social Sciences) 27.0-s verziójú Macintosh szoftverrel végeztük. Az adatokat átlag ± SD (szórás) és SEM (az átlag standard hibája) formában mutatjuk be. Vegyes típusú ismételt mérési ANOVA-t használtunk a két csoport közötti különbség értékelésére a posztprandiális vércukorszint tekintetében különböző időpontokban. A független minták t-próbáját használtuk a két csoport közötti különbség felmérésére az antropometriai paraméterek, a teljes energiabevitel, a szénhidrátok, a fehérje és a lipid, a Cmax, ΔCmax és AUCi értékek tekintetében. Minden statisztikai tesztet 5%-os szignifikanciaszinten végeztünk.