Effetto del frutto del baobab sulla glicemia postprandiale negli adulti sani

Questo studio è stato approvato dal Comitato Etico Superiore della Egas Moniz Cooperativa de Ensino (codice di protocollo 518) ed è stato condotto in conformità con la Dichiarazione di Helsinki (Dichiarazione del 1975, rivista nel 2000). È stato dato un consenso informato a tutti i partecipanti idonei, dopo informazioni orali e scritte sullo studio.

Questo studio clinico controllato randomizzato, in cieco per i soggetti, è stato condotto con 31 soggetti, reclutati presso il Campus Universitário Egas Moniz, a Monte de Caparica, in Portogallo. Dopo la firma dei criteri di ammissibilità e del consenso informato, i partecipanti sono stati sottoposti ai criteri di inclusione ed esclusione e successivamente assegnati in modo casuale a gruppi di controllo o di intervento. Il metodo della sequenza di allocazione era basato su numeri sequenziali. Il primo paziente è stato assegnato in modo casuale al gruppo di intervento o di controllo e i seguenti pazienti sono stati assegnati in sequenza alternativamente a ciascun gruppo. Ad ogni partecipante è stata attribuita una codifica al fine di mantenere l'anonimato e garantire la riservatezza dei dati.

Dopo un periodo di digiuno di 8-10 ore, al gruppo di controllo è stato somministrato OGTT e al gruppo di intervento è stato somministrato OGTT seguito da estratto acquoso di baobab.

Preparazione dell'estratto acquoso di baobab:

Il frutto del baobab è stato acquistato nel mercato del Benfica, situato nella città di Luanda (Angola) e portato a Lisbona (Portogallo) debitamente imballato in un sacchetto di plastica e conservato in un locale ambientale asciutto fino al momento del bisogno. Per l'estrazione acquosa del frutto sono stati pesati 40 ± 1 g di polpa, semi e filamenti rossi e il frutto è stato fatto bollire in 300 ml di acqua per 5 minuti. Dopo un lento raffreddamento fino a temperatura ambiente, l'estratto è stato quindi posto in frigorifero in un contenitore dove è rimasto per 8 ore ad una temperatura media di 10°C. Il BAE è stato setacciato con l'ausilio di un setaccio a rete, separandolo dai semi e dai filamenti, ed è stato successivamente sottoposto alla sperimentazione clinica e ai saggi antiossidanti. Per i saggi antiossidanti, dopo la filtrazione, l'estratto è stato passato attraverso il blender (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI), filtrato nuovamente ottenendo campioni omogenei, evitando la formazione di precipitati durante l'analisi. La concentrazione finale dell'estratto acquoso ottenuto, sia per la sperimentazione clinica che per l'analisi chimica, era di 0,1333 g di Adansonia digitata L. (AD)/ml di peso fresco dell'estratto (FW).

Interventi:

Dopo il digiuno notturno, il livello di glucosio nel sangue è stato valutato attraverso una goccia di sangue capillare, immediatamente prima del test di tolleranza al glucosio orale (t0). I partecipanti al gruppo di controllo hanno ingerito la sola soluzione di glucosio (OGTT) preparata con 75 g di glucosio orale anidro come prescritto dall'American Dietetic Association (ADA), sciolto in 200 ml di acqua. Il gruppo di intervento ha ingerito una soluzione di glucosio seguita da 250 ml di estratto acquoso di baobab (33,33 g FW). Il livello di glucosio nel sangue è stato misurato anche a 30 (t30), 60 (t60), 90 (t90) e 120 (t120) minuti immediatamente dopo l'intervento, per ciascun partecipante, nei gruppi di controllo e di intervento. Per misurare le concentrazioni di glucosio nel sangue sono stati utilizzati strumenti glucometrici, strisce per glucometri (One Touch Select Plus) e lancette sterilizzate (Sarstedt normal 21G), prestando la dovuta attenzione alla sicurezza e all'asepsi. Sulla base dei valori della glicemia, l'area incrementale della glicemia sotto la curva (AUCi) di ciascun partecipante è stata definita utilizzando il programma GraphPad Prism (versione 5.0). Le concentrazioni massime (Cmax) e le variazioni delle concentrazioni massime (ΔCmax) sono state determinate confrontandole con i rispettivi valori basali dei livelli glicemici.

Valutazione dei parametri antropometrici:

Sono stati raccolti anche i parametri antropometrici, ovvero peso, altezza e indice di massa corporea (BMI). Il BMI è stato calcolato come peso (Kg) diviso per altezza (m2) al quadrato (Kg/m2). Il peso corporeo è stato stimato per bioimpedenza, attraverso la bilancia Inbody®, modello 230.

Valutazione dell'ingestione dietetica:

I partecipanti allo studio hanno completato un questionario sul richiamo del cibo di 24 ore, che è stato attentamente istruito da un investigatore per identificare tutto il cibo consumato. La quantità di ogni cibo ingerito è stata stimata con l'aiuto di immagini. È stato utilizzato un libro con immagini di pasti in diverse dimensioni. L'investigatore ha esaminato il questionario insieme al partecipante. L'assunzione di cibo di ciascun partecipante è stata analizzata utilizzando il software The Food Processor SQL (versione 11.3.285) ottenere energia totale, carboidrati, proteine ​​e lipidi significa assunzione.

Valutazione del contenuto in fenoli totali, proantocianidine e tannini idrolizzabili:

La concentrazione fenolica totale è stata determinata secondo il metodo Folin Ciocalteu impiegando acido gallico come standard. I risultati sono stati espressi come mg di equivalenti di acido gallico/L (GAE/L). Per questa analisi, 125 μl di BAE, precedentemente diluito (x15) in acqua e 125 μl di etanolo, sono stati aggiunti a 2,5 ml di soluzione di reattivo Folin-Ciocalteu (diluito 1:10 in H2O) e 2 ml di carbonato di sodio acquoso (Na2CO3) 1M. Dopo 15 minuti l'assorbanza è stata misurata a 765 nm.

Il contenuto di proantocianidine è stato determinato secondo il metodo Gu et al (2002) con modifiche, che si basa sull'idrolisi acida dei polimeri delle proantocianidine che producono pigmenti rossastri in una soluzione calda di 1-butanolo/acido cloridrico. Sono stati aggiunti 200 μl di BAE diluito (x2) a 200 μl di metanolo e 2600 μl di soluzione di HCl /1-butanolo 10% (v/v). Le provette sono state agitate e incubate, a 100°C per 50 minuti. L'assorbanza è stata misurata a 550 nm. I risultati sono espressi come mg equivalenti di proantocianidine A2/L (EPA2/L).

Il metodo di Willis e Allen è stato adattato per la determinazione dei tannini idrolizzabili del BAE. Un volume di 1 ml di estratto è stato aggiunto a 5 ml di iodato di potassio al 2,5% (KIO3). La miscela è stata poi agitata e riportata a bagnomaria a 25°C per 20 minuti. La lettura dell'assorbanza è stata eseguita mediante uno spettrofotometro a 550 nm ei risultati sono stati espressi come mg di equivalenti di acido tannico/L (TAE/L).

Saggi antiossidanti:

Metodo Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP): l'effetto antiossidante (capacità riducente) è stato valutato monitorando la formazione di un colore blu intenso dal complesso Fe2+ TPTZ, secondo il test Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP). Un volume di 2850µl (25ml 300mM tampone acetato pH=3,6 soluzione più 2,5 ml 10mM TPTZ soluzione in HCl 40mM + 2,5 ml 20mM FeCl3.6H2O soluzione) è stato aggiunto a 150 µl di BAE.. Le provette sono state tenute al buio per 30 minuti (7 dosaggi a diverse concentrazioni). L'assorbanza è stata determinata a 593 nm ei risultati sono stati espressi in mg di Trolox equivalenti/L (TE/L).

Metodo ABTS: questo metodo si basava sulla capacità di un campione di inibire il radicale ABTS (ABTS+) confrontato con uno standard antiossidante di riferimento (Trolox). Il radicale ABTS+ è stato generato dalla reazione chimica con persolfato di potassio (K2S2O8). Pertanto, 25 ml di ABTS (7 mM) sono stati aggiunti a 440 pi di K2S2O8 (140 mM) e lasciati riposare al buio a temperatura ambiente per 12-16 ore. La soluzione è stata preparata prelevando un volume della soluzione precedente e diluendola in etanolo fino a che la sua assorbanza a λ = 734 nm fosse 0,70. Le provette sono state tenute al buio per 30 minuti. I risultati espressi in mg di Trolox equivalenti/L (TE/L).

Il metodo DPPH: questo metodo è stato determinato dal radical scavenger 2,2-difenil-1-picrylhydrazyl. Un volume di 150 μl di BAE è stato aggiunto a 2850 μl di soluzione DPPH precedentemente preparata in metanolo con un λ=515 nm di 1,1. Le soluzioni sono state mantenute per 24 ore in assenza di luce. L'assorbanza è stata determinata a 515 nm ei risultati espressi in mg di Trolox equivalenti/L (TE/L).

Capacità di inibizione dell'anione O2•- e del radicale NO:

L'anione superossido viene generato dall'ossidazione del NADH reagendo con PMS e ossigeno, provocando la riduzione di NBT. Un volume di 500 μl di BAE con diversa concentrazione è stato aggiunto a 2 ml di NADH (189μM) e NBT (120 μM) in tampone Tris-HCl 40 mM pH 8. La reazione è stata avviata dopo l'aggiunta di 0,5 ml di PMS (60 μM) e dopo 5 minuti di incubazione a temperatura ambiente, l'assorbanza è stata misurata a 560 nm.

Il test dei radicali NO di inibizione era basato sul metodo di Nikkhah e collaboratori (2008). Un volume di 250 μl di BAE con diverse concentrazioni è stato aggiunto a 1 ml di nitroprussiato di sodio e 250 μl di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS). La miscela è stata mantenuta per 150 minuti a 25°C. Quindi, 0,5 ml di questa miscela sono stati aggiunti a 1 ml di acido solfanilico (0,33% in acido acetico glaciale al 20%) e mantenuto per 5 minuti a temperatura ambiente. Poi è stato aggiunto 1 ml di NED (0,1% p/v) e questa miscela è stata mantenuta per 30 minuti a 25°C. Al termine della reazione si è formato un cromoforo rosa. L'assorbanza è stata misurata a 540 nm. La percentuale di inibizione dei radicali O2•- e NO è stata determinata usando l'equazione 1 ei risultati sono stati espressi come mg di equivalenti di acido gallico (GAE)/L.

Analisi statistica:

L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando il software Excel® e SPSS® (Statistical Package for Social Sciences) versione 27.0 per Mac. I dati sono presentati come media ± SD (deviazione standard) e SEM (errore standard della media). Misurazione ripetuta ANOVA di tipo misto è stata utilizzata per valutare la differenza tra i 2 gruppi per la glicemia postprandiale in momenti diversi. Il t-test per campioni indipendenti è stato utilizzato per valutare la differenza tra i 2 gruppi per i parametri antropometrici, l'apporto energetico totale, i carboidrati, le proteine ​​e i lipidi, i valori di Cmax, ΔCmax e AUCi. Tutti i test statistici sono stati eseguiti al livello di significatività del 5%.