Влияние плодов баобаба на постпрандиальную гликемию у здоровых взрослых

Это исследование было одобрено Высшим комитетом по этике Egas Moniz Cooperativa de Ensino (код протокола 518) и проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией (декларация 1975 г., пересмотренная в 2000 г.). Информированное согласие было дано всем подходящим участникам после устной и письменной информации об исследовании.

Это рандомизированное контролируемое клиническое исследование, в котором не учитывались субъекты, было проведено с участием 31 субъекта, набранных в кампусе Университета Эгас Мониш в Монте-де-Капарика, Португалия. После подписания критериев приемлемости и информированного согласия участников подвергали критериям включения и исключения, а затем случайным образом распределяли в контрольную группу или группу вмешательства. Метод распределения последовательности был основан на последовательных номерах. Первый пациент был случайным образом распределен в группу вмешательства или контрольную группу, а следующие пациенты были последовательно распределены поочередно в каждую группу. Каждому участнику была присвоена кодификация в целях сохранения анонимности и обеспечения конфиденциальности данных.

После периода голодания в течение 8-10 часов контрольной группе давали OGTT, а группе вмешательства давали OGTT с последующим водным экстрактом баобаба.

Приготовление водного экстракта баобаба:

Плоды баобаба были куплены на рынке Бенфики, расположенном в городе Луанда (Ангола), и доставлены в Лиссабон (Португалия), должным образом упакованные в полиэтиленовый пакет и хранящиеся в высушенном помещении до тех пор, пока они не понадобятся. Для водной экстракции плодов взвешивали 40 ± 1 г мякоти, семян и красных волокон и кипятили плоды в 300 мл воды в течение 5 минут. После медленного охлаждения до комнатной температуры экстракт помещали в холодильник в контейнере, где он оставался в течение 8 часов при средней температуре 10°С. BAE просеивали с помощью сетчатого сита, отделяя его от семян и нитей, а затем подвергали клиническим испытаниям и анализам антиоксидантов. Для анализа антиоксидантов после фильтрации экстракт пропускали через блендер (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI), снова фильтровали, получая однородные образцы, избегая образования осадка во время анализа. Конечная концентрация полученного водного экстракта, как для клинических испытаний, так и для химического анализа, составляла 0,1333 г Adansonia digitata L. (AD)/мл сырой массы экстракта (FW).

Вмешательства:

После ночного голодания уровень глюкозы в крови оценивали с помощью капиллярной капли крови непосредственно перед пероральным тестом на толерантность к глюкозе (t0). Участники контрольной группы принимали только раствор глюкозы (ОГТТ), приготовленный из 75 г безводной пероральной глюкозы, как предписано Американской диетической ассоциацией (АДА), растворенной в 200 мл воды. Группа вмешательства принимала раствор глюкозы, а затем 250 мл водного экстракта баобаба (33,33 г сырой массы). Уровень глюкозы в крови также измеряли через 30 (t30), 60 (t60), 90 (t90) и 120 (t120) минут сразу после вмешательства у каждого участника в контрольной группе и группе вмешательства. Глюкометр, полоски для глюкометров (One Touch Select Plus) и стерилизованные ланцеты (Sarstedt normal 21G) использовались для измерения концентрации глюкозы в крови с должным вниманием к безопасности и асептике. На основании значений гликемии была определена площадь приращения уровня глюкозы в крови под кривой (AUCi) каждого участника с использованием программы GraphPad Prism (версия 5.0). Максимальные концентрации (Cmax) и вариации максимальных концентраций (ΔCmax) определяли путем сравнения их с соответствующими исходными значениями уровней гликемии.

Оценка антропометрических параметров:

Также были собраны антропометрические параметры, а именно вес, рост и индекс массы тела (ИМТ). ИМТ рассчитывали как вес (кг), деленный на рост (м2) в квадрате (кг/м2). Массу тела оценивали по биоимпедансу на весах Inbody®, модель 230.

Оценка приема пищи:

Участники исследования заполнили 24-часовую анкету отзывов о еде, которая была тщательно проинструктирована исследователем, чтобы определить всю потребляемую пищу. Количество съеденной пищи оценивалось с помощью фотографий. Использовалась книга с фотографиями блюд разных размеров. Исследователь просматривал анкету вместе с участником. Потребление пищи каждым участником анализировалось с помощью программного обеспечения The Food Processor SQL (версия 11.3.285). получение общей энергии, углеводов, белков и липидов означает потребление.

Оценка содержания общего фенола, проантоцианидинов и гидролизуемых дубильных веществ:

Концентрацию общих фенолов определяли по методу Folin Ciocalteu, используя галловую кислоту в качестве стандарта. Результаты выражали в мг эквивалентов галловой кислоты/л (GAE/л). Для этого анализа 125 мкл БАЭ, предварительно разведенного (х15) в воде и 125 мкл этанола, добавляли к 2,5 мл раствора реагента Фолина-Чиокальтеу (1:10, разведенный в H2O) и 2 мл водного карбоната натрия (Na2CO3). 1М. Через 15 минут измеряли оптическую плотность при 765 нм.

Содержание проантоцианидинов определяли по методу Gu et al (2002) с модификациями, который основан на кислотном гидролизе полимеров проантоцианидинов с образованием красноватых пигментов в горячем растворе 1-бутанола/соляной кислоты. Добавляли 200 мкл ВАЕ, разбавленного (х2) до 200 мкл метанола и 2600 мкл 10% (об./об.) раствора HCl/1-бутанол. Пробирки встряхивали и инкубировали при 100°С в течение 50 минут. Поглощение измеряли при 550 нм. Результаты выражены в мг-эквивалентах проантоцианидинов A2/л (ЕРА2/л).

Метод Уиллиса и Аллена был адаптирован для определения гидролизуемых дубильных веществ БАЭ. К 5 мл 2,5% йодата калия (KIO3) добавляли 1 мл экстракта. Затем смесь перемешивали и возвращали на водяную баню при 25°С на 20 минут. Поглощение измеряли с помощью спектрофотометра при 550 нм, и результаты выражали в мг эквивалентов дубильной кислоты/л (ТАЕ/л).

Антиоксидантные анализы:

Метод восстанавливающей антиоксидантной способности железа (FRAP): антиоксидантный эффект (восстанавливающую способность) оценивали путем наблюдения за образованием интенсивного синего цвета комплекса Fe2+ TPTZ в соответствии с анализом восстанавливающей антиоксидантной способности железа (FRAP). Объем 2850 мкл (25 мл 300 мМ раствора ацетатного буфера pH=3,6 плюс 2,5 мл 10 мМ раствора ТПТЗ в 40 мМ HCl + 2,5 мл 20 мМ FeCl3.6H2O раствор) добавляли к 150 мкл разбавленного БАЭ.. Пробирки выдерживали в темноте в течение 30 минут (7 проб при разных концентрациях). Поглощение определяли при 593 нм, и результаты выражали в мг эквивалентов тролокса/л (TE/л).

Метод ABTS: этот метод основан на способности образца ингибировать радикал ABTS (ABTS+) по сравнению с эталонным антиоксидантным стандартом (Trolox). Радикал ABTS+ был получен в результате химической реакции с персульфатом калия (K2S2O8). Так, к 440 мкл K2S2O8 (140 мМ) добавляли 25 мл АБТС (7 мМ) и выдерживали в темноте при комнатной температуре в течение 12–16 ч. Раствор готовили, беря объем предыдущего раствора и разбавляя его этанолом до тех пор, пока его поглощение при λ = 734 нм не станет равным 0,70. Пробирки выдерживали в темноте в течение 30 минут. Результаты выражены в мг эквивалентов Trolox/л (TE/л).

Метод DPPH: этот метод определяли с помощью поглотителя радикалов 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил. К 2850 мкл предварительно приготовленного раствора DPPH в метаноле с λ=515 нм 1,1 добавляли 150 мкл БАЭ. Растворы выдерживали 24 часа в отсутствие света. Поглощение определяли при 515 нм, а результаты выражали в мг эквивалентов тролокса/л (TE/л).

Ингибирующая способность аниона O2•- и радикала NO:

Анион супероксида образуется при окислении НАДН в результате реакции с ПМС и кислородом, что приводит к восстановлению НСТ. К 2 мл НАДН (189 мкМ) и НСТ (120 мкМ) в 40 мМ Трис-HCl-буфере, рН 8, добавляли 500 мкл БАЭ различной концентрации. Реакцию начинали после добавления 0,5 мл PMS (60 мкМ) и после 5-минутной инкубации при комнатной температуре измеряли оптическую плотность при 560 нм.

Тест ингибирования радикалов NO был основан на методе Nikkhah и соавт. (2008). К 1 мл нитропруссида натрия и 250 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS) добавляли 250 мкл БАЭ с различной концентрацией. Смесь выдерживали 150 минут при 25°С. Затем 0,5 мл этой смеси добавляли к 1 мл сульфаниловой кислоты (0,33% в 20%-ной ледяной уксусной кислоте) и выдерживали 5 мин при комнатной температуре. Затем добавляли 1 мл НЭД (0,1% вес/объем) и выдерживали эту смесь в течение 30 минут при 25°С. В конце реакции образуется розовый хромофор. Поглощение измеряли при 540 нм. Процент ингибирования радикалов O2•- и NO определяли, используя уравнение 1, и результаты выражали в мг эквивалентов галловой кислоты (ЭАК)/л.

Статистический анализ:

Статистический анализ был выполнен с использованием программного обеспечения Excel® и SPSS® (Статистический пакет для социальных наук) версии 27.0 для Mac. Данные представлены в виде среднего ± SD (стандартное отклонение) и SEM (стандартная ошибка среднего). Повторное измерение ANOVA смешанного типа использовалось для оценки различий между двумя группами постпрандиальной глюкозы в крови в разное время. Для оценки различий между двумя группами по антропометрическим параметрам, общему потреблению энергии, углеводам, белкам и липидам, значениям Cmax, ΔCmax и AUCi использовали t-критерий независимых выборок. Все статистические тесты проводились при 5% уровне значимости.