健康な成人の食後血糖に対するバオバブ果実の効果

この研究は、Egas Moniz Cooperativa de Ensino 上級倫理委員会 (プロトコル コード 518) によって承認され、ヘルシンキ宣言 (1975 年の宣言、2000 年に改訂) に従って実施されました。 研究に関する口頭および書面による情報の後、適格な参加者全員にインフォームドコンセントが与えられました。

この無作為化比較臨床試験は、被験者を対象とせず、ポルトガルのモンテ デ カパリカにある Campus Universitário Egas Moniz で募集された 31 人の被験者を対象に実施されました。 適格基準とインフォームドコンセントに署名した後、参加者は包含および除外基準を受け、その後、対照群または介入群にランダムに割り当てられました。 割り当て順序の方法は、連番に基づいていました。 最初の患者は無作為に介入群または対照群に割り当てられ、次の患者は各群に交互に割り当てられました。 匿名性を維持し、データの機密性を確保するために、成文化は各参加者に帰属しました。

8～10時間の絶食期間の後、対照群にはOGTTが与えられ、介入群にはOGTTに続いてバオバブ水性抽出物が与えられました。

バオバブ水性抽出物の調製：

バオバブの果実は、ルアンダ市 (アンゴラ) にあるベンフィカの市場で購入され、リスボン (ポルトガル) に持ち込まれ、ビニール袋に適切に梱包され、必要になるまで地元の乾燥した環境に保管されました。 果実の水性抽出のために、40 ± 1 g の果肉、種子、赤いフィラメントを秤量し、果実を 300 ml の水で 5 分間煮沸しました。 室温までゆっくりと冷却した後、抽出物を容器に入れた冷蔵庫に入れ、平均温度10℃で8時間静置した。 BAE はネットふるいでふるいにかけられ、シードとフィラメントから分離され、続いて臨床試験と抗酸化アッセイにかけられました。 抗酸化アッセイでは、ろ過後、抽出物をブレンダー (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI) に通し、再度ろ過して均質なサンプルを取得し、分析中の沈殿物の形成を回避しました。 得られた水性抽出物の最終濃度は、臨床試験と化学分析の両方で、0.1333 g Adansonia digitata L. (AD) / ml 抽出新鮮重量 (FW) でした。

介入:

一晩絶食させた後、経口ブドウ糖負荷試験 (t0) の直前に、毛細血管滴血によって血糖値を評価しました。 対照群の参加者は、米国栄養士会 (ADA) によって処方された 75 g の無水経口ブドウ糖を 200 ml の水に溶解して調製したブドウ糖溶液のみ (OGTT) を摂取しました。 介入群は、ブドウ糖溶液を摂取した後、250 ml のバオバブ水性抽出物 (33.33 g FW) を摂取しました。 対照群と介入群の各参加者について、介入直後の 30 分 (t30)、60 分 (t60)、90 分 (t90)、120 分 (t120) の血糖値も測定しました。 血糖値測定には、血糖測定器、血糖測定器用ストリップ（ワンタッチセレクトプラス）、滅菌ランセット（ザルシュテット ノーマル 21G）を使用し、安全と無菌に十分注意して測定した。 血糖値に基づいて、GraphPad Prism プログラム (バージョン 5.0) を使用して、各参加者の血糖増加曲線下面積 (AUCi) を定義しました。 最大濃度 (Cmax) および最大濃度の変動 (ΔCmax) は、それらをそれぞれのベースライン血糖値と比較することによって決定されました。

人体計測パラメータの評価:

体重、身長、体格指数 (BMI) などの人体測定パラメータも収集されました。 BMI は、体重 (Kg) を身長 (m2) で割った値の 2 乗 (Kg/m2) として計算されました。 体重は、Inbody® モデル 230 のスケールを介して、生体インピーダンスによって推定されました。

食事摂取評価：

研究の参加者は、消費されたすべての食品を特定するように研究者から慎重に指示された24時間の食品リコールアンケートに回答しました. 摂取された各食品の量は、写真を参考にして推定されました。 大小さまざまな食事の写真が掲載された本が使われました。 研究者は、参加者と一緒にアンケートを見直しました。 各参加者の食物摂取量は、ソフトウェア The Food Processor SQL (バージョン 11.3.285) を使用して分析されました。 総エネルギーを得ることは、炭水化物、タンパク質、脂質を摂取することを意味します。

総フェノール、プロアントシアニジン、加水分解性タンニンの含有量の評価:

総フェノール濃度は、標準として没食子酸を使用する Folin Ciocalteu 法に従って決定されました。 結果は、没食子酸当量のｍｇ／Ｌ（ＧＡＥ／Ｌ）として表した。 この分析では、事前に水で希釈 (x15) した 125 μl の BAE と 125 μl のエタノールを 2.5 ml の Folin-Ciocalteu 試薬溶液 (H2O で 1:10 希釈) と 2 ml の炭酸ナトリウム (Na2CO3) 水溶液に加えました。 1M。 １５分後、吸光度を７６５ｎｍで測定した。

プロアントシアニジンの含有量は、高温の 1-ブタノール/塩酸溶液中で赤みを帯びた色素を生成するプロアントシアニジン ポリマーの酸性加水分解に基づいた修正を加えた Gu et al (2002) の方法に従って決定されました。 ２００μｌのＢＡＥ希釈（ｘ２）を２００μｌのメタノールおよび２６００μｌのＨＣｌ／１－ブタノール１０％（ｖ／ｖ）溶液に加えた。 試験管を振とうし、100℃で50分間インキュベートした。 吸光度は 550 nm で測定されました。 結果は、プロアントシアニジン A2/L (EPA2/L) の mg 当量として表されます。

Willis と Allen の方法は、BAE の加水分解性タンニンの測定に適用されました。 1 ml の抽出液を 5 ml の 2.5% ヨウ素酸カリウム (KIO3) に加えました。 次いで混合物を撹拌し、２５℃の水浴に２０分間戻した。 分光光度計により５５０ｎｍで吸光度の読み取りを行い、結果をタンニン酸当量のｍｇ／Ｌ（ＴＡＥ／Ｌ）として表した。

抗酸化アッセイ:

鉄還元抗酸化力 (FRAP) 法: 抗酸化効果 (還元能力) は、鉄還元抗酸化力 (FRAP) アッセイに従って、Fe2+ TPTZ 複合体からの強い青色の形成を監視することによって評価されました。 2850µl の容量 (25ml 300mM 酢酸緩衝液 pH=3.6 溶液 + 2.5ml 10mM TPTZ HCl 40mM 溶液 + 2.5ml 20mM FeCl3.6H2O) 溶液) を 150µl の希釈 BAE に加えた。 チューブを暗所に 30 分間置いた (異なる濃度での 7 つのアッセイ)。 吸光度を 593 nm で測定し、結果を mg Trolox 当量/L (TE/L) で表した。

ABTS メソッド: このメソッドは、参照抗酸化標準 (Trolox) と比較した ABTS ラジカル (ABTS+) を阻害するサンプルの能力に基づいていました。 ABTS+ ラジカルは、過硫酸カリウム (K2S2O8) との化学反応によって生成されました。 したがって、25 ml の ABTS (7 mM) を 440 μl の K2S2O8 (140 mM) に添加し、暗所で室温で 12 ～ 16 時間放置しました。 溶液は、前の溶液の量を取り、λ = 734 nm での吸光度が 0.70 になるまでエタノールで希釈することによって調製しました。 チューブを暗所に 30 分間置いた。 結果は mg の Trolox 当量/L (TE/L) で表されます。

DPPH メソッド: このメソッドは、2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル ラジカル スカベンジャーによって決定されました。 １５０μｌの体積のＢＡＥを、１．１のλ＝５１５ｎｍを有するメタノール中で予め調製された２８５０μｌのＤＰＰＨ溶液に添加した。 溶液を光の非存在下で２４時間保持した。 吸光度を 515 nm で測定し、結果を mg Trolox 当量/L (TE/L) で表した。

O2•- アニオンと NO ラジカルの抑制能力:

スーパーオキシドアニオンは、PMS および酸素と反応して NADH が酸化されることによって生成され、NBT の還元を引き起こします。 濃度の異なる 500 μl の BAE を、40 mM Tris-HCl 緩衝液 pH 8 中の 2 ml の NADH (189 μM) および NBT (120 μM) に加えました。 ０．５ｍｌのＰＭＳ（６０μＭ）の添加後に反応を開始し、室温で５分間インキュベートした後、吸光度を５６０ｎｍで測定した。

阻害 NO ラジカル テストは、Nikkhah と共同研究者 (2008) の方法に基づいていました。 異なる濃度の BAE 250 μl を、1 ml のニトロプルシド ナトリウムと 250 μl のリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) に加えました。 混合物を２５℃で１５０分間保持した。 次に、この混合物０．５ｍｌをスルファニル酸（２０％氷酢酸中０．３３％）１ｍｌに加え、室温で５分間保持した。 次いで、１ｍｌのＮＥＤ（０．１％ｗ／ｖ）を添加し、この混合物を２５℃で３０分間保持した。 反応の最後に、ピンク色の発色団が形成されました。 吸光度は 540 nm で測定されました。 O2・- および NO ラジカルの阻害率は式 1 を使用して決定され、結果は没食子酸当量 (GAE)/L の mg として表されました。

統計分析：

統計分析は、Mac 用の Excel® および SPSS® (Statistical Package for Social Sciences) バージョン 27.0 ソフトウェアを使用して実行されました。 データは、平均 ± SD (標準偏差) および SEM (平均の標準誤差) として表示されます。 混合型の反復測定 ANOVA を使用して、異なる時間での食後血糖の 2 つのグループ間の差異を評価しました。 独立したサンプルの t 検定を使用して、人体測定パラメーター、総エネルギー摂取量、炭水化物、タンパク質と脂質、Cmax、ΔCmax、および AUCi 値の 2 つのグループ間の差を評価しました。 すべての統計検定は、有意水準 5% で実行されました。