Effekt af baobabfrugt på postprandial glykæmi hos raske voksne

Denne undersøgelse blev godkendt af Egas Moniz Cooperativa de Ensino Superior Ethics Committee (protokolkode 518) og blev udført i overensstemmelse med Helsinki-erklæringen (erklæring af 1975, revideret i 2000). Et informeret samtykke blev givet til alle kvalificerede deltagere efter mundtlig og skriftlig information om undersøgelsen.

Dette randomiserede kontrollerede kliniske forsøg, blindt for forsøgspersoner, blev udført med 31 forsøgspersoner, rekrutteret på Campus Universitário Egas Moniz i Monte de Caparica, Portugal. Efter at berettigelseskriterierne og informeret samtykke var underskrevet, blev deltagerne udsat for inklusions- og eksklusionskriterierne og efterfølgende tilfældigt fordelt i kontrol- eller interventionsgrupper. Metoden til tildelingssekvens var baseret på sekventielle tal. Den første patient blev tilfældigt tildelt interventions- eller kontrolgruppe, og de følgende patienter blev sekventielt fordelt på skift til hver gruppe. En kodificering blev tildelt hver deltager for at bevare anonymiteten og sikre fortroligheden af ​​data.

Efter en periode på 8-10 timers faste fik kontrolgruppen OGTT, og interventionsgruppen fik OGTT efterfulgt af vandigt baobabekstrakt.

Baobab vandig ekstraktpræparat:

Baobabfrugten blev købt på markedet i Benfica, der ligger i byen Luanda (Angola) og bragt til Lissabon (Portugal) pakket behørigt i en plastikpose og opbevaret i et tørret miljølokalt, indtil det skulle bruges. Til den vandige ekstraktion af frugten blev 40 ± 1 g frugtkød, frø og røde filamenter vejet, og frugten blev kogt i 300 ml vand i 5 minutter. Efter langsom afkøling til stuetemperatur blev ekstrakten derefter anbragt i et køleskab i en beholder, hvor det forblev i 8 timer ved en gennemsnitstemperatur på 10°C. BAE'et blev sigtet ved hjælp af en netsigte, der adskilte det fra frøene og filamenterne, og blev efterfølgende underkastet det kliniske forsøg og antioxidantassays. Til antioxidantassays blev ekstraktet efter filtrering ført gennem blenderen (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI), filtreret igen for at opnå homogene prøver, hvilket undgår dannelse af bundfald under analysen. Den endelige koncentration af det opnåede vandige ekstrakt til både kliniske forsøg og kemisk analyse var 0,1333 g Adansonia digitata L. (AD)/ml ekstrakt friskvægt (FW).

Interventioner:

Efter faste natten over blev blodsukkerniveauet vurderet gennem en kapillær dråbeblod umiddelbart før oral glukosetolerancetest (t0). Kontrolgruppedeltagerne indtog alene glucoseopløsning (OGTT) tilberedt med 75 g vandfri oral glucose som foreskrevet af American Dietetic Association (ADA), opløst i 200 ml vand. Interventionsgruppen indtog glukoseopløsning efterfulgt af 250 ml vandig baobabekstrakt (33,33 g FW). Blodsukkerniveauet blev også målt til 30 (t30), 60 (t60), 90 (t90) og 120 (t120) minutter umiddelbart efter intervention, for hver deltager, i kontrol- og interventionsgrupper. Glukometerudstyr, strimler til glukosemålere (One Touch Select Plus) og steriliserede lancetter (Sarstedt normal 21G) blev brugt til at måle blodsukkerkoncentrationer under hensyntagen til sikkerhed og asepsis. Baseret på glykæmiværdierne blev det trinvise blodsukkerareal under kurven (AUCi) for hver deltager defineret ved hjælp af GraphPad Prism-programmet (version 5.0). Maksimale koncentrationer (Cmax) og variationer af maksimale koncentrationer (ΔCmax) blev bestemt ved at sammenligne dem med deres respektive baseline-glykæminiveauer.

Vurdering af antropometriske parametre:

De antropometriske parametre blev også indsamlet, nemlig vægt, højde og kropsmasseindeks (BMI). BMI blev beregnet som vægt (Kg) divideret med højde (m2) i kvadrat (Kg/m2). Kropsvægten blev estimeret ved bioimpedans, gennem skala Inbody®, model 230.

Vurdering af diætindtagelse:

Deltagerne i undersøgelsen udfyldte et 24-timers spørgeskema til tilbagekaldelse af fødevarer, som blev omhyggeligt instrueret af en efterforsker til at identificere al den mad, der blev indtaget. Mængden af ​​hver indtaget mad blev estimeret ved hjælp af billeder. Der blev brugt en bog med billeder af måltider i forskellige størrelser. Investigator gennemgik spørgeskemaet sammen med deltageren. Hver deltagers madindtag blev analyseret ved hjælp af softwaren The Food Processor SQL (version 11.3.285) opnåelse af total energi, kulhydrater, proteiner og lipider betyder indtag.

Vurdering af samlet indhold af phenol, proanthocyanidiner og hydrolyserbare tanniner:

Den totale phenolkoncentration blev bestemt i overensstemmelse med Folin Ciocalteu-metoden under anvendelse af gallussyre som standard. Resultaterne blev udtrykt som mg gallussyreækvivalenter/L (GAE/L). Til denne analyse blev 125 μl BAE, tidligere fortyndet (x15) i vand og 125 μl ethanol tilsat til 2,5 ml Folin-Ciocalteu reagensopløsning (1:10 fortyndet i H2O) og 2 ml vandigt natriumcarbonat (Na2CO3) 1M. Efter 15 minutter blev absorbansen målt ved 765 nm.

Indholdet af proanthocyanidiner blev bestemt efter Gu et al (2002) metode med modifikationer, som er baseret på sur hydrolyse af proanthocyanidiner polymerer, der producerer rødlige pigmenter i varm 1-butanol/saltsyreopløsning. Det blev tilsat 200 µl BAE fortyndet (x2) til 200 µl methanol og 2600 µl HCl/1-butanol 10% (v/v) opløsning. Reagensglassene blev rystet og inkuberet ved 100°C i 50 minutter. Absorbansen blev målt ved 550 nm. Resultater er udtrykt som mg-ækvivalenter af proanthocyanidiner A2/L (EPA2/L).

Metoden ifølge Willis og Allen blev tilpasset til bestemmelse af hydrolyserbare tanniner af BAE. Et volumen på 1 ml ekstrakt blev tilsat til 5 ml 2,5% kaliumiodat (KIO3). Blandingen blev derefter omrørt og returneret til vandbadet ved 25°C i 20 minutter. Absorbansaflæsning blev udført med et spektrofotometer ved 550 nm, og resultaterne blev udtrykt som mg garvesyreækvivalenter/L (TAE/L).

Antioxidant assays:

Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) metode: antioxidanteffekten (reducerende evne) blev evalueret ved at overvåge dannelsen af ​​en intens blå farve fra Fe2+ TPTZ-komplekset ifølge Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) assayet. Et volumen på 2850 µl (25 ml 300 mM acetatbuffer pH=3,6 opløsning plus 2,5 ml 10 mM TPTZ opløsning i HCl 40 mM + 2,5 ml 20 mM FeCl3.6H2O opløsning) blev tilsat til 150 µl fortyndet BAE.. Rørene blev holdt i mørke i 30 minutter (7 analyser ved forskellige koncentrationer). Absorbansen blev bestemt ved 593 nm, og resultaterne blev udtrykt i mg Trolox-ækvivalenter/L (TE/L).

ABTS-metode: denne metode var baseret på en prøves evne til at hæmme ABTS-radikalet (ABTS+) sammenlignet med en referenceantioxidantstandard (Trolox). ABTS+ radikalet blev genereret ved kemisk reaktion med kaliumpersulfat (K2S2O8). Således blev 25 ml ABTS (7 mM) tilsat til 440 µl K2S2O8 (140 mM) og fik lov at stå i mørke ved stuetemperatur i 12-16 timer. Opløsningen blev fremstillet ved at tage et volumen af ​​den foregående opløsning og fortynde den i ethanol, indtil dens absorbans ved λ = 734 nm var 0,70. Rørene blev holdt i mørke i 30 minutter. Resultaterne udtrykt i mg Trolox-ækvivalenter/L (TE/L).

DPPH-metoden: denne metode blev bestemt ved hjælp af 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl-radikalopfangeren. Et volumen på 150 μl BAE blev tilsat til 2850 μl DPPH-opløsning, der tidligere var fremstillet i methanol med en λ=515 nm på 1,1. Opløsningerne blev holdt i 24 timer i fravær af lys. Absorbansen blev bestemt ved 515 nm, og resultaterne udtrykt i mg Trolox-ækvivalenter/L (TE/L).

Hæmningskapacitet af O2•- anion og NO radikal:

Superoxidanionen dannes ved oxidation af NADH ved at reagere med PMS og oxygen, hvilket forårsager reduktion af NBT. Et volumen på 500 μl BAE med forskellig koncentration blev tilsat til 2 ml NADH (189 μM) og NBT (120 μM) i 40 mM Tris-HCl-buffer pH 8. Reaktionen blev startet efter tilsætning af 0,5 ml PMS (60 μM) og efter 5 minutters inkubation ved stuetemperatur blev absorbansen målt ved 560 nm.

Inhibering NO radikal-testen var baseret på metoden af ​​Nikkhah og kolleger (2008). Et volumen på 250 μl BAE med forskellige koncentrationer blev tilsat til 1 ml natriumnitroprussid og 250 μl phosphatbufret saltvand (PBS). Blandingen blev holdt i 150 minutter ved 25°C. Derefter blev 0,5 ml af denne blanding tilsat til 1 ml sulfanilsyre (0,33% i 20% iseddikesyre) og holdt i 5 minutter ved stuetemperatur. Derefter blev det tilsat 1 ml NED (0,1% vægt/volumen) og denne blanding blev holdt i 30 minutter ved 25°C. Ved slutningen af ​​reaktionen blev der dannet en lyserød kromofor. Absorbansen blev målt ved 540 nm. Procentdelen af ​​inhibering af O2•- og NO-radikaler blev bestemt ved anvendelse af ligning 1, og resultaterne blev udtrykt som mg gallussyreækvivalenter (GAE)/L.

Statistisk analyse:

Statistisk analyse blev udført ved hjælp af Excel® og SPSS® (Statistical Package for Social Sciences) version 27.0 software til Mac. Data præsenteres som middel ± SD (standardafvigelse) og SEM (standardfejl for middelværdien). Gentagen måling ANOVA af blandet type blev brugt til at vurdere forskellen mellem de 2 grupper for postprandial blodsukker på forskellige tidspunkter. Den uafhængige prøvers t-test blev brugt til at vurdere forskellen mellem de 2 grupper for antropometriske parametre, totalt energiindtag, kulhydrater, protein og lipid, Cmax, ΔCmax og AUCi værdier. Alle statistiske test blev udført på 5 % signifikansniveau.