Effekt av baobabfrukt på postprandial glykemi hos friske voksne

Denne studien ble godkjent av Egas Moniz Cooperativa de Ensino Superior Ethics Committee (protokollkode 518) og ble utført i samsvar med Helsinki-erklæringen (erklæring av 1975, revidert i 2000). Et informert samtykke ble gitt til alle kvalifiserte deltakere, etter muntlig og skriftlig informasjon om studien.

Denne randomiserte kontrollerte kliniske studien, blind for forsøkspersoner, ble utført med 31 forsøkspersoner, rekruttert ved Campus Universitário Egas Moniz, i Monte de Caparica, Portugal. Etter kvalifikasjonskriterier og informert samtykke signert, ble deltakerne utsatt for inkluderings- og eksklusjonskriteriene og deretter tilfeldig fordelt i kontroll- eller intervensjonsgrupper. Metoden for tildelingssekvens var basert på sekvensielle tall. Den første pasienten ble tilfeldig tildelt intervensjons- eller kontrollgruppe, og følgende pasienter ble sekvensielt fordelt vekselvis til hver gruppe. En kodifisering ble tilskrevet hver deltaker for å opprettholde anonymiteten og sikre konfidensialitet av data.

Etter en periode på 8-10 timers faste fikk kontrollgruppen OGTT og intervensjonsgruppen OGTT etterfulgt av baobab vandig ekstrakt.

Vandig baobab-ekstraktpreparat:

Baobabfrukten ble kjøpt på markedet i Benfica, som ligger i byen Luanda (Angola) og brakt til Lisboa (Portugal) behørig pakket i en plastpose og lagret i et tørket miljølokalt til det trengs. For den vandige ekstraksjonen av frukten ble 40 ± 1 g fruktkjøtt, frø og røde filamenter veid og frukten ble kokt i 300 ml vann i 5 minutter. Etter sakte avkjøling til romtemperatur ble ekstraktet deretter plassert i et kjøleskap i en beholder hvor det ble liggende i 8 timer ved en gjennomsnittstemperatur på 10°C. BAE ble siktet ved hjelp av en nettsikt, separerte den fra frøene og filamentene, og ble deretter utsatt for den kliniske utprøvingen og antioksidantanalysene. For antioksidantanalysene, etter filtrering, ble ekstraktet ført gjennom blenderen (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI), filtrert igjen for å oppnå homogene prøver, og unngikk dannelse av utfellinger under analysen. Den endelige konsentrasjonen av det oppnådde vandige ekstraktet, for både kliniske forsøk og kjemiske analyser, var 0,1333 g Adansonia digitata L. (AD) / ml ekstrakt ferskvekt (FW).

Intervensjoner:

Etter faste over natten ble blodsukkernivået målt gjennom en kapillærdråpeblod, rett før oral glukosetoleransetest (t0). Kontrollgruppedeltakerne inntok glukoseløsning alene (OGTT) tilberedt med 75 g vannfri oral glukose som foreskrevet av American Dietetic Association (ADA), oppløst i 200 ml vann. Intervensjonsgruppen inntok glukoseløsning etterfulgt av 250 ml baobab vandig ekstrakt (33,33 g FW). Blodsukkernivået ble også målt ved 30 (t30), 60 (t60), 90 (t90) og 120 (t120) minutter umiddelbart etter intervensjon, for hver deltaker, i kontroll- og intervensjonsgrupper. Glukometerutstyr, strips for glukosemålere (One Touch Select Plus) og steriliserte lansetter (Sarstedt normal 21G) ble brukt til å måle blodsukkerkonsentrasjoner, med behørig hensyn til sikkerhet og asepsis. Basert på glykemiverdiene ble det inkrementelle blodsukkerområdet under kurven (AUCi) for hver deltaker definert ved hjelp av GraphPad Prism-programmet (versjon 5.0). Maksimale konsentrasjoner (Cmax) og variasjoner av maksimale konsentrasjoner (ΔCmax) ble bestemt ved å sammenligne dem med deres respektive baseline glykeminivåer.

Vurdering av antropometriske parametere:

De antropometriske parametrene ble også samlet, nemlig vekt, høyde og kroppsmasseindeks (BMI). BMI ble beregnet som vekt (Kg) delt på høyde (m2) i annen (Kg/m2). Kroppsvekten ble estimert ved bioimpedans, gjennom skala Inbody®, modell 230.

Vurdering av kosthold:

Deltakerne i studien fullførte et 24-timers spørreskjema for tilbakekalling av mat, som ble nøye instruert av en etterforsker for å identifisere all mat som ble konsumert. Mengden av hver mat som ble inntatt ble estimert ved hjelp av bilder. Det ble brukt en bok med bilder av måltider i forskjellige størrelser. Utforskeren gjennomgikk spørreskjemaet sammen med deltakeren. Matinntaket til hver deltaker ble analysert ved hjelp av programvaren The Food Processor SQL (versjon 11.3.285) oppnå total energi, karbohydrater, proteiner og lipider betyr inntak.

Vurdering av totalt innhold av fenol, proantocyanidiner og hydrolyserbare tanniner:

Total fenolkonsentrasjon ble bestemt i henhold til Folin Ciocalteu-metoden ved bruk av gallussyre som standard. Resultatene ble uttrykt som mg gallussyreekvivalenter/L (GAE/L). For denne analysen ble 125 μl BAE, tidligere fortynnet (x15) i vann og 125 μl etanol, tilsatt 2,5 ml Folin-Ciocalteu reagensløsning (1:10 fortynnet i H2O) og 2 ml vandig natriumkarbonat (Na2CO3) 1M. Etter 15 minutter ble absorbansen målt ved 765 nm.

Innholdet av proantocyanidiner ble bestemt etter Gu et al (2002) metode med modifikasjoner, som er basert på sur hydrolyse av proantocyanidinpolymerer som produserer rødlige pigmenter i varm 1-butanol/saltsyreløsning. Det ble tilsatt 200 μl BAE fortynnet (x2) til 200 μl metanol og 2600 μl HCl /1-butanol 10 % (v/v) løsning. Reagensrørene ble ristet og inkubert ved 100°C i 50 minutter. Absorbansen ble målt ved 550 nm. Resultatene er uttrykt som mg-ekvivalenter av proantocyanidiner A2/L (EPA2/L).

Metoden til Willis og Allen ble tilpasset for bestemmelse av hydrolyserbare tanniner av BAE. Et volum på 1 ml ekstrakt ble tilsatt til 5 ml 2,5 % kaliumjodat (KIO3). Blandingen ble deretter omrørt og returnert til vannbadet ved 25°C i 20 minutter. Absorbansavlesning ble utført med et spektrofotometer ved 550 nm og resultatene ble uttrykt som mg garvesyreekvivalenter/L (TAE/L).

Antioksidantanalyser:

Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP)-metoden: antioksidanteffekten (reduserende evne) ble evaluert ved å overvåke dannelsen av en intens blå farge fra Fe2+ TPTZ-komplekset, i henhold til Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP)-analysen. Et volum på 2850 µl (25 ml 300 mM acetatbuffer pH=3,6-løsning pluss 2,5 ml 10 mM TPTZ-løsning i HCl 40 mM + 2,5 ml 20 mM FeCl3.6H2O løsning) ble tilsatt til 150 µl fortynnet BAE.. Rørene ble holdt i mørke i 30 minutter (7 analyser ved forskjellige konsentrasjoner). Absorbansen ble bestemt ved 593 nm og resultatene ble uttrykt i mg Trolox-ekvivalenter/L (TE/L).

ABTS-metoden: denne metoden var basert på kapasiteten til en prøve til å hemme ABTS-radikalet (ABTS+) sammenlignet med en referanseantioksidantstandard (Trolox). ABTS+ radikalet ble generert ved kjemisk reaksjon med kaliumpersulfat (K2S2O8). Således ble 25 ml ABTS (7 mM) tilsatt til 440 µl K2S2O8 (140 mM) og fikk stå i mørke ved romtemperatur i 12-16 timer. Løsningen ble fremstilt ved å ta et volum av den forrige løsningen og fortynne den i etanol til dens absorbans ved λ = 734 nm var 0,70. Rørene ble holdt i mørke i 30 minutter. Resultatene uttrykt i mg Trolox-ekvivalenter/L (TE/L).

DPPH-metoden: denne metoden ble bestemt av 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl-radikalfjerneren. Et volum på 150 μl BAE ble tilsatt til 2850 μl DPPH-løsning som tidligere ble fremstilt i metanol med en λ=515 nm på 1,1. Løsningene ble holdt i 24 timer i fravær av lys. Absorbansen ble bestemt ved 515 nm og resultatene uttrykt i mg Trolox-ekvivalenter/L (TE/L).

Inhiberingskapasitet til O2•- anion og NO-radikal:

Superoksidanionet genereres ved oksidasjon av NADH ved å reagere med PMS og oksygen, noe som forårsaker reduksjon av NBT. Et volum på 500 μl BAE med forskjellig konsentrasjon ble tilsatt 2 ml NADH (189 μM) og NBT (120 μM) i 40 mM Tris-HCl buffer pH 8. Reaksjonen ble startet etter tilsetning av 0,5 ml PMS (60 μM) og etter 5 minutters inkubering ved romtemperatur ble absorbansen målt ved 560 nm.

Hemming NO radikal-testen var basert på metoden til Nikkhah og medarbeidere (2008). Et volum på 250 μl BAE med forskjellige konsentrasjoner ble tilsatt 1 ml natriumnitroprussid og 250 μl fosfatbufret saltvann (PBS). Blandingen ble holdt i 150 minutter ved 25°C. Deretter ble 0,5 ml av denne blandingen tilsatt til 1 ml sulfanilsyre (0,33% i 20% iseddik) og holdt i 5 minutter ved romtemperatur. Deretter ble det tilsatt 1 ml NED (0,1 % vekt/volum) og denne blandingen ble holdt i 30 minutter ved 25°C. Ved slutten av reaksjonen ble det dannet en rosa kromofor. Absorbansen ble målt ved 540 nm. Prosentandelen av inhibering av O2•- og NO-radikaler ble bestemt ved å bruke ligning 1 og resultatene ble uttrykt som mg gallussyreekvivalenter (GAE)/L.

Statistisk analyse:

Statistisk analyse ble utført ved bruk av programvaren Excel® og SPSS® (Statistical Package for Social Sciences) versjon 27.0 for Mac. Data presenteres som gjennomsnitt ± SD (standardavvik) og SEM (standardfeil for gjennomsnittet). Gjentatt måling ANOVA av blandet type ble brukt for å vurdere forskjellen mellom de 2 gruppene for postprandial blodsukker til forskjellige tider. Den uavhengige prøvens t-test ble brukt til å vurdere forskjellen mellom de 2 gruppene for antropometriske parametere, totalt energiinntak, karbohydrater, protein og lipid, Cmax, ΔCmax og AUCi verdier. Alle statistiske tester ble utført på 5 % signifikansnivå.