바오밥 열매가 건강한 성인의 식후 혈당에 미치는 영향

이 연구는 Egas Moniz Cooperativa de Ensino Superior Ethics Committee(프로토콜 코드 518)의 승인을 받았으며 헬싱키 선언(1975년 선언, 2000년 개정)에 따라 수행되었습니다. 연구에 대한 구두 및 서면 정보를 제공한 후 적격한 모든 참가자에게 정보에 입각한 동의가 제공되었습니다.

이 무작위 대조 임상 시험은 포르투갈 Monte de Caparica에 있는 Campus Universitário Egas Moniz에서 모집된 31명의 피험자를 대상으로 진행되었습니다. 적격성 기준과 사전 동의서에 서명한 후 참가자는 포함 및 제외 기준에 따라 통제 또는 개입 그룹에 무작위로 할당되었습니다. 할당 순서의 방법은 순차적 번호를 기반으로 합니다. 첫 번째 환자는 중재군 또는 대조군으로 무작위 배정되었고, 다음 환자들은 각 군에 교대로 순차적으로 배정되었다. 익명성을 유지하고 데이터의 기밀성을 보장하기 위해 각 참가자에게 목록화를 부여했습니다.

8-10시간의 단식 후, 대조군에는 OGTT를, 중재군에는 OGTT와 바오밥 수성 추출물을 투여했습니다.

Baobab 수성 추출물 준비:

바오밥 나무 열매는 루안다(앙골라) 시에 위치한 벤피카 시장에서 구입하여 리스본(포르투갈)으로 가져와 비닐 봉지에 적절히 포장하여 필요할 때까지 건조한 환경 지역에 보관했습니다. 과일 40 ± 1g의 과육, 종자 및 붉은 필라멘트의 무게를 측정하고 과일을 300ml의 물에서 5분 동안 끓였습니다. 상온까지 천천히 식힌 후 추출액을 용기에 담아 냉장고에 넣어 평균 10℃에서 8시간 동안 방치하였다. BAE는 그물 체를 사용하여 체질하여 종자 및 필라멘트에서 분리한 다음 임상 시험 및 항산화 분석을 거쳤습니다. 항산화 분석을 위해 여과 후 추출물을 블렌더(Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI)에 통과시키고 다시 여과하여 균질한 샘플을 얻었고 분석 중에 침전물이 형성되는 것을 방지했습니다. 얻은 수성 추출물의 최종 농도는 임상 시험 및 화학 분석 모두에서 0.1333g Adansonia digitata L.(AD)/ml 추출물 생 중량(FW)이었습니다.

개입:

하룻밤 금식 후 경구 포도당 내성 검사(t0) 직전에 모세혈관을 통해 혈당 수준을 평가했습니다. 대조군 참가자들은 ADA(American Dietetic Association)에서 규정한 무수 경구 포도당 75g을 물 200ml에 녹인 포도당 용액 단독(OGTT)을 섭취했습니다. 개입 그룹은 포도당 용액을 섭취한 후 250ml의 바오밥 수성 추출물(33.33g FW)을 섭취했습니다. 대조군과 중재군에서 각 참가자에 대해 중재 직후 30(t30), 60(t60), 90(t90) 및 120(t120)분에 혈당 수치를 측정했습니다. 혈당측정기는 혈당측정기, 혈당측정기용 스트립(One Touch Select Plus), 멸균 채혈침(Sarstedt normal 21G)을 사용하여 안전과 무균에 주의하면서 혈당을 측정하였다. 혈당 값을 기반으로 GraphPad Prism 프로그램(버전 5.0)을 사용하여 각 참가자의 곡선 아래 혈당 증분 면적(AUCi)을 정의했습니다. 최대 농도(Cmax) 및 최대 농도의 변동(ΔCmax)은 각각의 기준 혈당 수준 값과 비교하여 결정했습니다.

인체 측정 매개변수 평가:

인체 측정 매개 변수, 즉 체중, 키 및 체질량 지수 (BMI)도 수집되었습니다. BMI는 체중(Kg)을 신장(m2)의 제곱(Kg/m2)으로 나눈 값으로 계산되었습니다. 체중은 Inbody®, 모델 230 저울을 통해 생체 임피던스에 의해 추정되었습니다.

식이 섭취 평가:

연구 참가자는 24시간 음식 회상 설문지를 작성했으며 조사관은 섭취한 모든 음식을 식별하도록 주의 깊게 지시했습니다. 섭취한 각 음식의 양은 사진의 도움을 받아 추정했습니다. 다양한 크기의 식사 사진이 있는 책이 사용되었습니다. 조사관은 참가자와 함께 설문지를 검토했습니다. 각 참가자의 음식 섭취량은 The Food Processor SQL(버전 11.3.285) 소프트웨어를 사용하여 분석되었습니다. 총 에너지, 탄수화물, 단백질 및 지질을 얻는 것은 섭취를 의미합니다.

총 페놀, 프로안토시아니딘 및 가수분해성 탄닌 함량 평가:

총 페놀 농도는 갈산을 표준으로 사용하는 Folin Ciocalteu 방법에 따라 결정되었습니다. 결과는 mg의 갈산 당량/L(GAE/L)로 표현하였다. 이 분석을 위해 미리 물에 희석(x15)한 BAE 125μl와 에탄올 125μl를 Folin-Ciocalteu 시약 용액(H2O에 1:10 희석) 2.5ml와 탄산나트륨 수용액(Na2CO3) 2ml에 첨가했습니다. 1M. 15분 후 765 nm에서 흡광도를 측정하였다.

프로안토시아니딘의 함량은 뜨거운 1-부탄올/염산 용액에서 붉은 색소를 생성하는 프로안토시아니딘 중합체의 산성 가수분해를 기반으로 하는 수정된 Gu et al(2002) 방법에 따라 결정되었습니다. 200㎕의 메탄올 및 2600㎕의 HCl/1-부탄올 10%(v/v) 용액에 희석된(x2) 200㎕의 BAE를 첨가하였다. 테스트 튜브를 흔들고 100°C에서 50분 동안 배양했습니다. 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. 결과는 프로안토시아니딘 A2/L(EPA2/L)의 mg 당량으로 표시됩니다.

Willis와 Allen의 방법은 BAE의 가수분해성 타닌 측정에 적용되었습니다. 1ml 부피의 추출물을 5ml의 2.5% 요오드산칼륨(KIO3)에 첨가했습니다. 이어서 혼합물을 교반하고 20분 동안 25℃에서 수조로 되돌렸다. 550nm에서 분광광도계로 흡광도 판독을 수행하고 결과를 mg 탄닌산 당량/L(TAE/L)로 표시했습니다.

항산화 분석:

FRAP(Ferric Reducing Antioxidant Power) 방법: FRAP(Ferric Reducing Antioxidant Power) 분석법에 따라 Fe2+ TPTZ 복합체로부터 강렬한 청색의 형성을 모니터링하여 항산화 효과(환원 능력)를 평가하였다. 2850µl의 부피(25ml 300mM 아세테이트 버퍼 pH=3,6 용액 + HCl 40mM + 2,5ml 20mM FeCl3.6H2O의 2,5ml 10mM TPTZ 용액 용액)을 희석된 BAE. 150㎕에 첨가하였다. 튜브를 30분 동안 어두운 곳에 두었습니다(서로 다른 농도에서 7가지 분석). 흡광도는 593 nm에서 결정되었고 결과는 Trolox 당량/L(TE/L)의 mg으로 표시되었습니다.

ABTS 방법: 이 방법은 참조 항산화제 표준(Trolox)과 비교하여 ABTS 라디칼(ABTS+)을 억제하는 샘플의 능력을 기반으로 합니다. ABTS+ 라디칼은 과황산칼륨(K2S2O8)과의 화학 반응에 의해 생성되었습니다. 따라서, 25ml의 ABTS(7mM)를 440㎕의 K2S2O8(140mM)에 첨가하고 12-16시간 동안 실온에서 암흑 상태로 두었다. 이전 용액의 부피를 취하여 λ = 734 nm에서의 흡광도가 0.70이 될 때까지 에탄올로 희석하여 용액을 준비했습니다. 튜브를 30분 동안 어두운 곳에 두었다. 결과는 Trolox 당량/L(TE/L)의 mg으로 표시됩니다.

DPPH 방법: 이 방법은 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl 라디칼 스캐빈저에 의해 결정되었습니다. 150μl BAE 부피를 이전에 1.1의 λ=515nm로 메탄올에서 제조한 2850μl의 DPPH 용액에 첨가했습니다. 빛이 없는 상태에서 24시간 동안 용액을 보관하였다. 흡광도는 515nm에서 측정되었고 결과는 mg의 Trolox 당량/L(TE/L)로 표시되었습니다.

O2•-음이온 및 NO 라디칼 억제 능력:

슈퍼옥사이드 음이온은 NADH가 PMS 및 산소와 반응하여 산화되어 생성되어 NBT를 환원시킨다. 농도가 다른 500μl의 BAE 부피를 40mM Tris-HCl 완충액 pH 8에서 2ml의 NADH(189μM) 및 NBT(120μM)에 첨가했습니다. 0.5ml의 PMS(60μM)를 첨가한 후 반응을 시작하고 실온에서 5분 배양한 후 560nm에서 흡광도를 측정하였다.

억제 NO 라디칼 테스트는 Nikkhah 및 동료(2008)의 방법을 기반으로 합니다. 농도가 다른 250μl의 BAE 부피를 1ml의 sodium nitroprusside와 250μl의 PBS(phosphate buffered saline)에 첨가했습니다. 혼합물을 25℃에서 150분 동안 유지하였다. 이어서, 이 혼합물 0.5ml를 설파닐산(20% 빙초산 중 0.33%) 1ml에 첨가하고 실온에서 5분 동안 유지하였다. 그런 다음 NED(0.1% w/v) 1ml를 첨가하고 이 혼합물을 25°C에서 30분 동안 유지했습니다. 반응이 끝나면 분홍색 발색단이 형성되었습니다. 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. O2•- 및 NO 라디칼의 억제율은 방정식 1을 사용하여 결정되었으며 결과는 mg of gallic acid equivalents(GAE)/L로 표시되었습니다.

통계 분석:

Mac용 Excel® 및 SPSS®(Statistical Package for Social Sciences) 버전 27.0 소프트웨어를 사용하여 통계 분석을 수행했습니다. 데이터는 평균 ± SD(표준 편차) 및 SEM(평균의 표준 오차)으로 표시됩니다. 혼합 유형의 반복 측정 ANOVA를 사용하여 서로 다른 시간에 식후 혈당에 대한 두 그룹 간의 차이를 평가했습니다. 독립 표본 t-검정을 사용하여 인체 측정 매개변수, 총 에너지 섭취량, 탄수화물, 단백질 및 지질, Cmax, ΔCmax 및 AUCi 값에 대한 두 그룹 간의 차이를 평가했습니다. 모든 통계 테스트는 5% 유의 수준에서 수행되었습니다.