Baobab-hedelmän vaikutus aterianjälkeiseen glykemiaan terveillä aikuisilla

Tämän tutkimuksen hyväksyi Egas Moniz Cooperativa de Ensino Superior Ethics Committee (protokollakoodi 518) ja se suoritettiin Helsingin julistuksen (vuoden 1975 julistus, tarkistettu 2000) mukaisesti. Kaikille kelvollisille osallistujille annettiin tietoinen suostumus tutkimuksesta suullisen ja kirjallisen tiedon jälkeen.

Tämä satunnaistettu kontrolloitu kliininen tutkimus, joka oli sokea koehenkilöille, suoritettiin 31 koehenkilöllä, jotka palkattiin Campus Universitário Egas Monizissa Monte de Caparicassa, Portugalissa. Kun kelpoisuuskriteerit ja suostumus oli allekirjoitettu, osallistujille sovellettiin osallistumis- ja poissulkemiskriteerit, ja ne jaettiin satunnaisesti kontrolli- tai interventioryhmiin. Jakosekvenssin menetelmä perustui peräkkäisiin numeroihin. Ensimmäinen potilas jaettiin satunnaisesti interventio- tai kontrolliryhmään, ja seuraavat potilaat jaettiin peräkkäin vuorotellen kuhunkin ryhmään. Jokaiselle osallistujalle annettiin kodifikaatio nimettömyyden säilyttämiseksi ja tietojen luottamuksellisuuden varmistamiseksi.

8-10 tunnin paaston jälkeen kontrolliryhmälle annettiin OGTT:tä ja interventioryhmälle OGTT:tä ja sen jälkeen baobabin vesiuutetta.

Baobabin vesiuutteen valmistus:

Baobabin hedelmät ostettiin Benfican markkinoilta, jotka sijaitsevat Luandan kaupungissa (Angola), ja tuotiin Lissaboniin (Portugali) asianmukaisesti pakattuna muovipussiin ja säilytettiin kuivatussa ympäristössä, kunnes niitä tarvitaan. Hedelmien vesiuutosta varten punnittiin 40 ± 1 g massaa, siemeniä ja punaisia ​​filamentteja ja hedelmiä keitettiin 300 ml:ssa vettä 5 minuuttia. Hitaasti huoneenlämpötilaan jäähdyttämisen jälkeen uute laitettiin sitten jääkaappiin astiaan, jossa se pysyi 8 tuntia keskilämpötilassa 10 °C. BAE seulottiin verkkoseulan avulla erottamalla se siemenistä ja filamenteista, ja sen jälkeen sille suoritettiin kliininen koe ja antioksidanttitestit. Antioksidanttimäärityksiä varten uute johdettiin suodatuksen jälkeen sekoittimen (Kenwood Multipro Compact Food Processor FDP302SI) läpi ja suodatettiin uudelleen, jolloin saatiin homogeenisia näytteitä, jolloin vältettiin saostumien muodostuminen analyysin aikana. Saatu vesipitoisen uutteen lopullinen konsentraatio sekä kliiniseen kokeeseen että kemialliseen analyysiin oli 0,1333 g Adansonia digitata L. (AD) / ml uutteen tuorepaino (FW).

Interventiot:

Yön yli paaston jälkeen veren glukoositaso arvioitiin kapillaaripisaraveren avulla välittömästi ennen suun glukoositoleranssitestiä (t0). Kontrolliryhmän osallistujat nauttivat pelkän glukoosiliuosta (OGTT), joka oli valmistettu 75 g:sta vedetöntä oraalista glukoosia American Dietetic Associationin (ADA) ohjeiden mukaisesti liuotettuna 200 ml:aan vettä. Interventioryhmä söi glukoosiliuosta ja sen jälkeen 250 ml baobabin vesiuutetta (33,33 g FW). Verensokeritaso mitattiin myös 30 (t30), 60 (t60), 90 (t90) ja 120 (t120) minuuttia välittömästi toimenpiteen jälkeen kullekin osallistujalle kontrolli- ja interventioryhmissä. Verensokeripitoisuuksien mittaamiseen käytettiin glukometrilaitteita, liuskoja glukoosimittareihin (One Touch Select Plus) ja steriloituja lansetteja (Sarstedt normal 21G) turvallisuudesta ja aseptisuudesta huolehtien. Glykemiaarvojen perusteella kunkin osallistujan verensokerin inkrementaalinen käyrän alla oleva pinta-ala (AUCi) määritettiin GraphPad Prism -ohjelmalla (versio 5.0). Maksimipitoisuudet (Cmax) ja maksimipitoisuuksien vaihtelut (ΔCmax) määritettiin vertaamalla niitä vastaaviin perustason glykemiatasoihin.

Antropometristen parametrien arviointi:

Myös antropometriset parametrit kerättiin, nimittäin paino, pituus ja painoindeksi (BMI). BMI laskettiin painona (kg) jaettuna pituuden (m2) neliöllä (kg/m2). Kehon paino arvioitiin bioimpedanssilla Inbody®-asteikolla, malli 230.

Ruokavalion nauttimisen arviointi:

Tutkimukseen osallistuneet täyttivät 24 tunnin ruoan muistamista koskevan kyselylomakkeen, jonka tutkija ohjeisti huolellisesti tunnistamaan kaikki kulutetut ruoat. Kunkin nautitun ruoan määrä arvioitiin kuvien avulla. Käytettiin kirjaa, jossa oli kuvia erikokoisista aterioista. Tutkija kävi kyselylomakkeen läpi yhdessä osallistujan kanssa. Jokaisen osallistujan ruoansaanti analysoitiin The Food Processor SQL -ohjelmistolla (versio 11.3.285). kokonaisenergian, hiilihydraattien, proteiinien ja lipidien saaminen tarkoittaa saantia.

Fenolin, proantosyanidiinien ja hydrolysoituvien tanniinien kokonaispitoisuuden arviointi:

Kokonaisfenolin pitoisuus määritettiin Folin Ciocalteu -menetelmällä käyttäen gallushappoa standardina. Tulokset ilmaistiin milligrammoina gallushappoekvivalenttia/l (GAE/L). Tätä analyysiä varten 125 μl BAE:tä, joka oli laimennettu (x15) aiemmin veteen ja 125 μl etanolia, lisättiin 2,5 ml:aan Folin-Ciocalteu-reagenssiliuosta (1:10 laimennettu H2O:ssa) ja 2 ml:aan natriumkarbonaatin vesiliuosta (Na2CO3). 1 milj. 15 minuutin kuluttua absorbanssi mitattiin aallonpituudella 765 nm.

Proantosyanidiinipitoisuudet määritettiin Gu et al (2002) menetelmällä modifioinnilla, joka perustuu punertavia pigmenttejä tuottaviin proantosyanidiinipolymeerien happamaan hydrolyysiin kuumassa 1-butanoli/suolahappoliuoksessa. Siihen lisättiin 200 μl BAE:tä laimennettuna (x2) 200 μl:aan metanolia ja 2600 μl HCl/1-butanoli 10 % (v/v) -liuosta. Koeputkia ravisteltiin ja inkuboitiin 100 °C:ssa 50 minuuttia. Absorbanssi mitattiin 550 nm:ssä. Tulokset ilmaistaan ​​mg-ekvivalentteina proantosyanidiinia A2/L (EPA2/L).

Willisin ja Allenin menetelmä mukautettiin BAE:n hydrolysoituvien tanniinien määrittämiseen. 1 ml:n tilavuus uutetta lisättiin 5 ml:aan 2,5-prosenttista kaliumjodaattia (KIO3). Sitten seosta sekoitettiin ja se palautettiin vesihauteeseen 25 °C:ssa 20 minuutiksi. Absorbanssilukema suoritettiin spektrofotometrillä aallonpituudella 550 nm ja tulokset ilmaistiin milligrammoina tanniinihappoekvivalenttia/l (TAE/L).

Antioksidanttitestit:

Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) -menetelmä: antioksidanttivaikutus (pelkistävä kyky) arvioitiin seuraamalla voimakkaan sinisen värin muodostumista Fe2+ TPTZ -kompleksista Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) -määrityksen mukaisesti. Tilavuus 2850 µl (25 ml 300 mM asetaattipuskuri pH = 3,6 liuosta plus 2,5 ml 10 mM TPTZ-liuosta HCl:ssa 40 mM + 2,5 ml 20 mM FeCl3.6H2O liuos) lisättiin 150 µl:aan laimennettua BAE:tä. Putket pidettiin pimeässä 30 minuuttia (7 testiä eri pitoisuuksilla). Absorbanssi määritettiin aallonpituudella 593 nm ja tulokset ilmaistiin mg:na Trolox-ekvivalenttia/L (TE/L).

ABTS-menetelmä: tämä menetelmä perustui näytteen kykyyn estää ABTS-radikaaleja (ABTS+) verrattuna referenssiantioksidanttistandardiin (Trolox). ABTS+-radikaali syntyi kemiallisella reaktiolla kaliumpersulfaatin (K2S2O8) kanssa. Siten 25 ml ABTS:ää (7 mM) lisättiin 440 ul:aan K2S2O8:a (140 mM) ja annettiin seistä pimeässä huoneenlämpötilassa 12-16 tuntia. Liuos valmistettiin ottamalla tilavuus edellistä liuosta ja laimentamalla sitä etanoliin, kunnes sen absorbanssi λ = 734 nm:ssä oli 0,70. Putket pidettiin pimeässä 30 minuuttia. Tulokset ilmaistuna mg:na Trolox-ekvivalenttia/L (TE/L).

DPPH-menetelmä: tämä menetelmä määritettiin 2,2-difenyyli-1-pikryylihydratsyyliradikaalin sieppaajalla. 150 μl:n tilavuus BAE:ta lisättiin 2850 μl:aan DPPH-liuosta, joka oli valmistettu aiemmin metanolissa, jonka λ=515 nm on 1,1. Liuoksia pidettiin 24 tuntia ilman valoa. Absorbanssi määritettiin aallonpituudella 515 nm ja tulokset ilmaistiin mg:na Trolox-ekvivalenttia/L (TE/L).

O2•-anionin ja NO-radikaalin estokyky:

Superoksidianioni muodostuu NADH:n hapettumisesta reagoimalla PMS:n ja hapen kanssa, mikä aiheuttaa NBT:n pelkistymisen. 500 μl tilavuus eri pitoisuuksia BAE:tä lisättiin 2 ml:aan NADH:ta (189 μM) ja NBT:tä (120 μM) 40 mM Tris-HCl-puskurissa pH 8. Reaktio aloitettiin sen jälkeen, kun oli lisätty 0,5 ml PMS:ää (60 µM) ja 5 minuutin inkuboinnin jälkeen huoneenlämpötilassa, absorbanssi mitattiin aallonpituudella 560 nm.

NO-radikaalin estotesti perustui Nikkhahin ja työtovereiden (2008) menetelmään. 250 μl:n tilavuus eri pitoisuuksilla olevaa BAE:tä lisättiin 1 ml:aan natriumnitroprussidia ja 250 μl:aan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS). Seosta pidettiin 150 minuuttia 25 °C:ssa. Sitten 0,5 ml tätä seosta lisättiin 1 ml:aan sulfaniilihappoa (0,33 % 20 % jääetikassa) ja pidettiin 5 minuuttia huoneenlämpötilassa. Sitten siihen lisättiin 1 ml NED:tä (0,1 % w/v) ja tätä seosta pidettiin 30 minuuttia 25 °C:ssa. Reaktion lopussa muodostui vaaleanpunainen kromofori. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 540 nm. O2•- ja NO-radikaalien eston prosenttiosuus määritettiin käyttämällä yhtälöä 1 ja tulokset ilmaistiin milligrammoina gallushappoekvivalenttia (GAE)/l.

Tilastollinen analyysi:

Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä Excel®- ja SPSS® (Statistical Package for Social Sciences) versiota 27.0 Macille. Tiedot esitetään keskiarvona ± SD (standardipoikkeama) ja SEM (keskiarvon standardivirhe). Sekatyyppistä toistuvaa mittaus-ANOVAa käytettiin aterian jälkeisen verensokerin eron arvioimiseksi kahden ryhmän välillä eri aikoina. Riippumattomien näytteiden t-testiä käytettiin arvioimaan kahden ryhmän välinen ero antropometristen parametrien, kokonaisenergian saannin, hiilihydraattien, proteiinin ja lipidin, Cmax-, ΔCmax- ja AUCi-arvojen osalta. Kaikki tilastolliset testit suoritettiin 5 %:n merkitsevyystasolla.