Vliv zázvorového extraktu na postprandiální glykémii zdravých dospělých a jeho antioxidační vlastnosti

Tato klinická studie byla schválena Etickou komisí (proces číslo 519 ze dne 23. listopadu 2016). Všichni účastníci podepsali písemný informovaný souhlas po vysvětlení cílů a experimentálních rizikových postupů a byla zaručena jeho chráněná důvěrnost. Experimentální postup zahrnující člověka byl pečlivý podle Helsinské deklarace.

Tato slepá (pro účastníky) randomizovaná kontrolovaná klinická studie byla provedena na vyšší škole Egas Moniz u 30 dospělých nediabetiků. Účastníci ve věku od 18 do 40 let byli vybráni a náhodně rozděleni do intervenční skupiny (IG) (n=15) a kontrolní skupiny (CG) (n=15), ve kterých se účastníci střídali v rámci skupin. IG provedl orální glukózový toleranční test (OGTT) následovaný podáním vodného extraktu zázvoru a CG provedl samotné podání OGTT.

Pro přípravu zázvorového extraktu byl práškový zázvor (Zingibre officinalle Roscoe) získán od portugalské společnosti s původem z Indie a skladován v suchém prostředí lokálně, dokud nebyl potřeba. Produkt má číslo šarže LI1GIGRNT150012. Práškový zázvor byl individuálně navážen (0,2 g každá dávka) a přidán do 100 ml převařené vody, čímž byl získán zázvorový extrakt, louhován 10 minut. Roztok zázvorového extraktu byl po ochlazení na teplotu místnosti a distribuován každému účastníkovi. Tuto metodu upravil Wilkinson, J. M. (2000). Pro chemickou analýzu byl použit dříve získaný vodný zázvorový extrakt.

Pokud jde o hodnocení hladiny glukózy v krvi, byl každému účastníkovi odebrán vzorek krve pomocí kapilární kapky krve před intervencí (nalačno) a po 30, 60, 90 a 120 minutách. Analýza hladiny glukózy v krvi byla provedena pomocí proužků pro glukometr (Onetouch Select Plus Flex), sterilizované lancety a zařízení pro měření glukózy.

Pomocí dotazníku byly shromážděny obecné charakteristiky účastníků, konkrétně antropometrické údaje, farmakologická léčba a zdravotní stav. Kromě toho bylo k odběru vzorků účastníků použito 24hodinové stažení stravy den před intervencí. Nutriční analýzu přijaté stravy provedl Food Processor SQL (verze 10.5.0).

Stanovení celkových fenolických sloučenin ve vodném extraktu zázvoru bylo stanoveno metodou Folin-Ciocalteu. Celkové fenolické výsledky byly vyjádřeny jako mg ekvivalentu kyseliny gallové (GAE)/l zázvorového extraktu. Objem 125 μl zázvorového extraktu a 2 ml uhličitanu sodného byly přidány do 2,5 ml Folin-Ciocalteuova činidla. Po 15 minutách byla měřena absorbance při 765 nm. Stanovení flavonoidů ve vodném zázvorovém extraktu bylo stanoveno metodou Prabha. Výsledky flavonoidů byly vyjádřeny jako mg ekvivalentu kvercetinu (GAE)/l zázvorového extraktu. Objem 2 ml zázvorového extraktu byl přidán k 0,1 ml bezvodého roztoku chloridu hlinitého (10%), 0,1 ml octanu draselného (1M) a 2,8 ml destilované vody. Po 30 minutách byla měřena absorbance při 415 nm.

Antioxidační aktivita byla měřena pomocí různých testů:

Aktivita vychytávání superoxidových aniontových radikálů byla stanovena na základě metody Morais et al. Superoxidový anion byl generován reakcí fenazinmethosulfátu (PMS), nikotinamidadenindinukleotidhydridu (NADH) a kyslíku, což způsobilo snížení NBT ve Formazanu. Objem 0,5 ml vzorku byl přidán k 0,5 ml roztoku obsahujícího NADH (189 uM) a NBT (120 uM) s Tris-HCl (40 mM, pH = 8). Reakce začala po přidání 0,5 ml PMS (60 mikroM). Kontrolní vzorek byl měřen pouze za použití destilované vody. Po 5 minutách inkubace byla měřena kontrolní absorbance při 560 nm při teplotě místnosti.

Inhibiční aktivita oxidu dusnatého byla stanovena podle metody Khayami et al. Objem 1 ml nitroprusidu sodného 10 nm byl přidán do 250 mikroL defosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS) a 250 mikroL testovaného roztoku a směs byla protřepána. Předchozí roztok byl inkubován po dobu 150 minut při 25 °C a následně byly přidány 3 ml kyseliny sulfanilové a 0,33 % ledové kyseliny octové. Po 5 minutách při teplotě místnosti se přidaly 3 ml n-(1-naftyl)ethylendiamindihydrochloridu (NED, 0,1 % m/v) a inkubovalo se 30 minut při 25 °C. Absorbance byla měřena při 533 nm. Předchozí postup byl použit ke kontrole získané s použitím vody.

Volný radikál 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonová kyselina) (ABTS) byl získán ABTS oxidací persíranem draselným 140 mM po dobu 12 hodin ve tmě, podle metody Zulueta et al. Byl připraven roztok s 10 ml ABTS 7nm a 176 mikroL persíranu a skladování při teplotě místnosti po dobu 12 hodin ve tmě. Předchozí roztok byl zředěn ethanolem do absorbance 0,7 při 734 nm. Objem 2850 mikroL ABTS radikálu byl přidán ke 150 mikroL vzorku a ke 150 mikroL vody. Po 30 minutách ve tmě byla stanovena absorbance při 734 nm. Koncentrace Troloxu byla použita jako standard (mM Trolox/L). Tento test byl proveden pro několik koncentrací extraktu za účelem výpočtu IC50.

Statistická analýza dat byla provedena pomocí softwaru SPSS Statistics (Statistical Package for Social Sciences) (verze 22). Byly použity průměr a standardní chyba průměru. Byly použity Shapiro-Wilk a Repeated Measures ANOVA smíšeného typu. T-test nezávislých vzorků byl použit k posouzení rozdílu mezi 2 skupinami pro celkovou kalorickou hodnotu, přijaté sacharidy, bílkoviny a lipidy, Cmax (maximální koncentrace), ΔCmax (kolísání maximální koncentrace) a AUC (plocha pod křivkou). hodnoty. AUC byla vypočtena pomocí softwaru GraphPad Prim (verze 7.03). Všechny statistické testy byly provedeny na 5% hladině významnosti.