Effekt af ingefærekstrakt på postprandial glykæmi hos raske voksne og dets antioxidantegenskaber

Dette kliniske forsøg blev godkendt af den etiske komité (proces nummer 519 pr. 23. november 2016). Alle deltagere underskrev et skriftligt informeret samtykke efter forklaring af mål og eksperimentelle risikoprocedurer, og dets beskyttede fortrolighed var garanteret. Den eksperimentelle procedure, der involverede mennesker, blev behandlet i henhold til Helsinki-erklæringen.

Dette blinde (for deltagere) randomiserede kontrollerede kliniske forsøg blev udført på Egas Moniz videregående skole i 30 ikke-diabetiske voksne. Deltagere i alderen mellem 18 og 40 år blev udvalgt og tilfældigt fordelt i interventionsgruppe (IG) (n=15) og kontrolgruppe (CG) (n=15), hvor deltagerne var alternerende inkluderet i grupperne. IG'en udførte en oral glucosetolerancetest (OGTT) efterfulgt af vandig ingefærekstraktadministration, og CG'en udførte en OGTT-administration alene.

Til tilberedning af ingefærekstrakt blev ingefærpulver (Zingibre officinalle Roscoe) opnået fra Portugal Company med oprindelse i Indien og opbevaret i et tørret miljø lokalt, indtil det skulle bruges. Produktet har et batchnummer på LI1GIGRNT150012. Ingefær pulver blev individuelt vægtet (0,2 g hver dosis) og tilsat til 100 ml kogt vand til opnåelse af ingefærekstraktet, infusion i 10 minutter. Ingefærekstraktopløsning blev efter afkølet ved stuetemperatur og fordelt til hver deltager. Denne metode blev tilpasset af Wilkinson, J. M. (2000). Til kemisk analyse blev en tidligere opnået vandig ingefærekstrakt anvendt.

Med hensyn til vurdering af blodsukkerniveau blev blodprøven indsamlet for hver deltager ved hjælp af en kapillærdråbe blod før interventionen (faste) og efter 30, 60, 90 og 120 minutter. Blodsukkerniveauanalysen blev udført ved hjælp af en strimler til glukosemåler (Onetouch Select Plus Flex), en steriliseret lancet og et glukosemålerudstyr.

Generelle karakteristika data for deltagerne blev indsamlet, nemlig antropometriske data, farmakologisk behandling og medicinsk tilstand ved hjælp af et spørgeskema. Derudover brugte en 24-timers kosttilbagekaldelse dagen før interventionen til at prøve deltagere. Ernæringsanalysen af ​​indtaget kost blev udført af Food Processor SQL (version 10.5.0).

Bestemmelsen af ​​den totale phenolforbindelse af den vandige ingefærekstrakt blev bestemt ifølge Folin-Ciocalteu-metoden. De samlede phenoliske resultater blev udtrykt som mg gallussyreækvivalent (GAE)/L ingefærekstrakt. Et volumen på 125 μL ingefærekstrakt og 2 mL natriumcarbonat blev tilsat til 2,5 mL Folin-Ciocalteu-reagens. Efter 15 minutter blev absorbansen målt ved 765 nm. Flavonoidforbindelsernes bestemmelse af den vandige ingefærekstrakt blev bestemt ifølge Prabha-metoden. Flavonoidresultaterne blev udtrykt som mg quercetinækvivalent (GAE)/L ingefærekstrakt. Et volumen på 2 ml ingefærekstrakt blev tilsat til 0,1 ml vandfri aluminiumchloridopløsning (10%), 0,1 ml kaliumacetat (1M) og 2,8 ml destilleret vand. Efter 30 minutter blev absorbansen målt ved 415 nm.

Antioxidantaktiviteten blev målt gennem forskellige assays:

Superoxidanionradikaler-fjernende aktivitet blev bestemt baseret på Morais et al.-metoden. Superoxidanion blev genereret ved at reagere phenazin-methosulfat (PMS), nikotinamid-adenindinukleotidhydrid (NADH) og oxygen, hvilket forårsagede reduceret NBT i Formazan. Et volumen på 0,5 ml prøve blev tilsat til 0,5 ml af en opløsning indeholdende NADH (189 mikroM) og NBT (120 mikroM) med Tris-HCl (40 mM, pH = 8). Reaktionen startede efter tilsætning af 0,5 ml PMS (60 mikroM). Kontrolprøven blev målt med kun destilleret vand. Efter 5 minutters inkubation blev kontrolabsorbansen målt ved 560 nm ved stuetemperatur.

Den nitrogenoxidinhiberende aktivitet blev bestemt ifølge Khayami et al.-metoden. Et volumen på 1 ml natriumnitroprussid 10 nm blev tilsat til 250 mikrol de phosphatbufret saltvand (PBS) og 250 mikrol testopløsning, og den blev rystet. Den foregående opløsning blev inkuberet i 150 minutter ved 25ºC og tilsat 3 ml sulfanilsyre og 0,33% iseddikesyre. Efter 5 minutter ved stuetemperatur blev det tilsat 3 ml n-(1-naphthyl)ethylendiamin-dihydrochlorid (NED, 0,1% m/v) og inkuberet i 30 minutter ved 25ºC. Absorbansen blev målt ved 533 nm. Den tidligere procedure blev anvendt til at kontrollere opnået under anvendelse af vand.

Det frie radikal 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsyre) (ABTS) blev opnået ved ABTS-oxidation med kaliumpersulfat 140 mM i 12 timer i mørke ifølge Zulueta et al.-metoden. Der blev fremstillet en opløsning med 10 ml ABTS 7 nm og 176 mikrol persulfat og opbevaret ved stuetemperatur i 12 timer i mørke. Den foregående opløsning blev fortyndet med ethanol indtil 0,7 absorbans ved 734 nm. Et volumen på 2850 mikroliter ABTS-radikal blev tilsat til 150 mikroliter prøve og til 150 mikroliter vand. Efter 30 minutter i mørke blev absorbansen bestemt ved 734 nm. Trolox-koncentrationen blev brugt som standard (mM Trolox/L). Denne test blev udført for flere ekstraktkoncentrationer for at beregne IC50.

Datastatistisk analyse blev udført ved hjælp af SPSS Statistics (Statistical Package for Social Sciences) (version 22) software. Middelværdi og standardfejl for middelværdien blev brugt. Shapiro-Wilk og gentagne målinger ANOVA af blandet type blev anvendt. Uafhængige prøver T-test blev brugt til at vurdere forskellen mellem de 2 grupper for total kalorieværdi, kulhydrater, protein og lipid indtaget, Cmax (maksimal koncentration), ΔCmax (variation af maksimal koncentration) og AUC (areal under kurven) Incremental værdier. AUC blev beregnet af Software GraphPad Prim (version 7.03). Alle statistiske test blev udført på 5 % signifikansniveau.