Effetto dell'estratto di zenzero sulla glicemia postprandiale di adulti sani e sue proprietà antiossidanti

Questa sperimentazione clinica è stata approvata dal Comitato Etico (processo numero 519 del 23 novembre 2016). Tutti i partecipanti hanno firmato un consenso informato scritto dopo la spiegazione dello scopo e delle procedure di rischio sperimentale ed è stata garantita la sua riservatezza protetta. La procedura sperimentale che coinvolge l'uomo è stata curata secondo la Dichiarazione di Helsinki.

Questo studio clinico controllato randomizzato cieco (ai partecipanti) è stato condotto presso la scuola di istruzione superiore Egas Moniz su 30 adulti non diabetici. I partecipanti con età compresa tra 18 e 40 anni sono stati selezionati e assegnati in modo casuale nel gruppo di intervento (IG) (n=15) e nel gruppo di controllo (CG) (n=15), in cui i partecipanti sono stati alternati nei gruppi. L'IG ha eseguito un test di tolleranza al glucosio orale (OGTT) seguito dalla somministrazione dell'estratto acquoso di zenzero e il CG ha eseguito solo una somministrazione di OGTT.

Per la preparazione dell'estratto di zenzero, lo zenzero in polvere (Zingibre officinalle Roscoe) è stato ottenuto dalla società portoghese con origine indiana e conservato in un ambiente essiccato localmente fino al momento del bisogno. Il prodotto ha un numero di lotto LI1GIGRNT150012. Lo zenzero in polvere è stato pesato singolarmente (0,2 g per dose) e aggiunto a 100 ml di acqua bollita ottenendo l'estratto di zenzero, in infusione 10 minuti. La soluzione di estratto di zenzero è stata successivamente raffreddata a temperatura ambiente e distribuita a ciascun partecipante. Questo metodo è stato adattato da Wilkinson, J. M. (2000). Per l'analisi chimica è stato utilizzato un estratto acquoso di zenzero precedentemente ottenuto.

Per quanto riguarda la valutazione del livello di glucosio nel sangue, il campione di sangue è stato raccolto per ciascun partecipante utilizzando una goccia di sangue capillare prima dell'intervento (a digiuno) e dopo 30, 60, 90 e 120 minuti. L'analisi del livello di glucosio nel sangue è stata eseguita utilizzando una striscia per glucometro (Onetouch Select Plus Flex), una lancetta sterilizzata e un'apparecchiatura per glucometro.

Sono stati raccolti dati sulle caratteristiche generali dei partecipanti, vale a dire dati antropometrici, trattamento farmacologico e condizioni mediche utilizzando un questionario. Inoltre, per campionare i partecipanti è stato impiegato un richiamo dietetico di 24 ore il giorno prima dell'intervento. L'analisi nutrizionale della dieta ingerita è stata eseguita da Food Processor SQL (versione 10.5.0).

La determinazione dei composti fenolici totali dell'estratto acquoso di zenzero è stata determinata secondo il metodo Folin-Ciocalteu. I risultati fenolici totali sono stati espressi come mg di acido gallico equivalente (GAE)/L di estratto di zenzero. Un volume di 125 μL di estratto di zenzero e 2 mL di carbonato di sodio sono stati aggiunti a 2,5 mL di reagente Folin-Ciocalteu. Dopo 15 min l'assorbanza è stata misurata a 765 nm. La determinazione dei composti flavonoidi dell'estratto acquoso di zenzero è stata determinata secondo il metodo Prabha. I risultati dei flavonoidi sono stati espressi come mg di quercetina equivalente (GAE)/L di estratto di zenzero. Un volume di 2 mL di estratto di zenzero è stato aggiunto a 0,1 mL di soluzione anidra di cloruro di alluminio (10%), 0,1 mL di acetato di potassio (1M) e 2,8 mL di acqua distillata. Dopo 30 min l'assorbanza è stata misurata a 415 nm.

L'attività antiossidante è stata misurata attraverso diversi saggi:

L'attività di scavenging dei radicali anionici superossido è stata determinata in base al metodo di Morais et al. L'anione superossido è stato generato facendo reagire fenazina metosolfato (PMS), nicotinammide adenina dinucleotide idruro (NADH) e ossigeno causando una riduzione dell'NBT in Formazan. Un volume di 0,5 ml di campione è stato aggiunto a 0,5 ml di una soluzione contenente NADH (189 microM) e NBT (120 microM) con Tris-HCl (40 mM, pH = 8). La reazione è iniziata dopo l'aggiunta di 0,5 ml di PMS (60 microM). Il campione di controllo è stato misurato utilizzando solo acqua distillata. Dopo 5 minuti di incubazione, l'assorbanza del controllo è stata misurata a 560 nm a temperatura ambiente.

L'attività inibitoria dell'ossido nitrico è stata determinata secondo il metodo di Khayami et al. Un volume di 1 ml di nitroprussiato di sodio 10 nm è stato aggiunto a 250 microL di soluzione salina tamponata con defosfato (PBS) e 250 microL di soluzione di prova ed è stato agitato. La soluzione precedente è stata incubata per 150 min a 25ºC e successivamente sono stati aggiunti 3 mL di acido solfanilico e lo 0,33% di acido acetico glaciale. Dopo 5 minuti a temperatura ambiente, è stato aggiunto 3 ml di n-(1-naftil)etilendiammina dicloridrato (NED, 0,1% m/v) e incubato per 30 minuti a 25°C. L'assorbanza è stata misurata a 533 nm. La procedura precedente è stata impiegata per il controllo ottenuto utilizzando acqua.

Il radicale libero 2,2'-azino-bis (acido 3-etilbenzotiazolina-6-solfonico) (ABTS) è stato ottenuto mediante ossidazione di ABTS con persolfato di potassio 140 mM per 12 ore al buio, secondo il metodo Zulueta et al. È stata preparata una soluzione con 10 ml di ABTS 7nm e 176 microL di persolfato e conservata a temperatura ambiente per 12 ore al buio. La soluzione precedente è stata diluita con etanolo fino a 0,7 di assorbanza a 734 nm. Un volume di 2850 microL di radicale ABTS è stato aggiunto a 150 microL di campione ea 150 microL di acqua. Dopo 30 minuti al buio l'assorbanza è stata determinata a 734 nm. La concentrazione di Trolox è stata utilizzata come standard (mM Trolox/L). Questo test è stato eseguito per diverse concentrazioni di estratto al fine di calcolare l'IC50.

L'analisi statistica dei dati è stata eseguita utilizzando il software SPSS Statistics (Statistical Package for Social Sciences) (versione 22). Sono stati utilizzati la media e l'errore standard della media. Sono stati utilizzati Shapiro-Wilk e Repeated Measures ANOVA di tipo misto. Campioni indipendenti T-test è stato utilizzato per valutare la differenza tra i 2 gruppi per valore calorico totale, carboidrati, proteine ​​e lipidi ingeriti, Cmax (concentrazione massima), ΔCmax (variazione della concentrazione massima) e AUC (area sotto la curva) Incrementale valori. L'AUC è stato calcolato dal software GraphPad Prim (versione 7.03). Tutti i test statistici sono stati eseguiti al livello di significatività del 5%.