Inkivääriuutteen vaikutus terveiden aikuisten aterian jälkeiseen glykemiaan ja sen antioksidanttisiin ominaisuuksiin

Tämän kliinisen tutkimuksen hyväksyi eettinen komitea (prosessinumero 519 23. marraskuuta 2016). Kaikki osallistujat allekirjoittivat kirjallisen tietoisen suostumuksen tavoitteen ja kokeellisen riskimenettelyn selityksen jälkeen ja sen suojattu luottamuksellisuus taattiin. Ihmisellä tehty kokeellinen toimenpide hoidettiin Helsingin julistuksen mukaisesti.

Tämä sokea (osallistujille) satunnaistettu kontrolloitu kliininen tutkimus suoritettiin Egas Monizin korkeakoulussa 30 ei-diabeettisella aikuisella. 18–40-vuotiaat osallistujat valittiin ja jaettiin satunnaisesti interventioryhmään (IG) (n=15) ja kontrolliryhmään (CG) (n=15), joissa osallistujat vaihdettiin ryhmiin. IG suoritti oraalisen glukoositoleranssitestin (OGTT), jota seurasi vesipitoisen inkivääriuutteen antaminen, ja CG suoritti OGTT-antamisen yksin.

Inkivääriuutteen valmistusta varten inkiväärijauhe (Zingibre officinalle Roscoe) hankittiin intialaisesta Portugal Companysta ja sitä säilytettiin kuivatussa ympäristössä paikallisesti tarpeen vaatiessa. Tuotteen eränumero on LI1GIGRNT150012. Jauhe inkivääri painoi yksilöllisesti (0,2 g kukin annos) ja lisättiin 100 ml:aan keitettyä vettä, jolloin saatiin inkivääriuute, infusoimalla 10 minuuttia. Inkivääriuutteen liuos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja jaettiin jokaiselle osallistujalle. Tämän menetelmän on mukauttanut Wilkinson, J. M. (2000). Kemialliseen analyysiin käytettiin aiemmin saatua vesipitoista inkivääriuutetta.

Verensokeritason arvioinnissa verinäyte kerättiin jokaiselta osallistujalta kapillaaripisaraveren avulla ennen interventiota (paasto) ja 30, 60, 90 ja 120 minuutin kuluttua. Verensokeritason analyysi suoritettiin käyttämällä liuskoja glukoosimittarille (Onetouch Select Plus Flex), steriloitua lansettia ja glukoosimittaria.

Kyselylomakkeella kerättiin osallistujien yleiset ominaisuustiedot, eli antropometriset tiedot, lääkehoito ja sairaus. Lisäksi 24 tunnin ruokavalion palautus interventiota edeltävänä päivänä käytettiin otoksen ottamiseen. Nautitun ruokavalion ravitsemusanalyysi suoritettiin Food Processor SQL:llä (versio 10.5.0).

Vesipitoisen inkivääriuutteen fenoliyhdisteiden kokonaismääritys määritettiin Folin-Ciocalteu-menetelmällä. Kokonaisfenoliset tulokset ilmaistiin mg gallushappoekvivalenttia (GAE)/l inkivääriuutetta. 125 µl inkivääriuutetta ja 2 ml natriumkarbonaattia lisättiin 2,5 ml:aan Folin-Ciocalteu-reagenssia. 15 minuutin kuluttua absorbanssi mitattiin aallonpituudella 765 nm. Vesipitoisen inkivääriuutteen flavonoidiyhdisteiden määritys määritettiin Prabha-menetelmän mukaisesti. Flavonoidien tulokset ilmaistiin mg:na kversetiiniekvivalenttia (GAE)/l inkivääriuutetta. 2 ml:n tilavuus inkivääriuutetta lisättiin 0,1 ml:aan vedetöntä alumiinikloridiliuosta (10 %), 0,1 ml:aan kaliumasetaattia (1 M) ja 2,8 ml:aan tislattua vettä. 30 minuutin kuluttua absorbanssi mitattiin aallonpituudella 415 nm.

Antioksidanttiaktiivisuus mitattiin erilaisilla määrityksillä:

Superoksidianioniradikaaleja poistava aktiivisuus määritettiin Morais et al -menetelmän perusteella. Superoksidianioni syntyi saattamalla fenatsiinimetosulfaatti (PMS), nikotiiniamidiadeniinidinukleotidihydridi (NADH) ja happi reagoimaan, mikä aiheutti pelkistyneen NBT:n Formazanissa. 0,5 ml:n tilavuus näytettä lisättiin 0,5 ml:aan liuosta, joka sisälsi NADH:ta (189 mikroM) ja NBT:tä (120 mikroM) Tris-HCl:n (40 mM, pH = 8) kanssa. Reaktio alkoi sen jälkeen, kun oli lisätty 0,5 ml PMS:ää (60 mikroM). Kontrollinäyte mitattiin käyttämällä vain tislattua vettä. 5 minuutin inkuboinnin jälkeen kontrolliabsorbanssi mitattiin 560 nm:ssä huoneenlämpötilassa.

Typpioksidia estävä aktiivisuus määritettiin Khayamin et ai. menetelmän mukaisesti. 1 ml:n tilavuus natriumnitroprussidia 10 nm lisättiin 250 mikrolitraan fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) ja 250 mikrolitraan testiliuosta ja sitä ravisteltiin. Edellistä liuosta inkuboitiin 150 minuuttia 25 ºC:ssa ja sen jälkeen lisättiin 3 ml sulfaniilihappoa ja 0,33 % jääetikkaa. 5 minuutin huoneenlämpötilassa olon jälkeen siihen lisättiin 3 ml n-(1-naftyyli)etyleenidiamiinidihydrokloridia (NED, 0,1 % m/v) ja inkuboitiin 30 minuuttia 25 °C:ssa. Absorbanssi mitattiin aallonpituudella 533 nm. Aikaisempaa menetelmää käytettiin vettä käyttämällä saatuun kontrolliin.

Vapaa radikaali 2,2'-atsino-bis(3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihappo) (ABTS) saatiin ABTS-hapetuksella 140 mM kaliumpersulfaatilla 12 tunnin ajan pimeässä Zuluetan et ai. menetelmän mukaisesti. Siitä valmistettiin liuos, jossa oli 10 ml ABTS 7 nm ja 176 mikrolitra persulfaattia ja säilytettiin huoneenlämpötilassa 12 tuntia pimeässä. Edellinen liuos laimennettiin etanolilla absorbanssiin 0,7 734 nm:ssä. 2850 mikrolitraa ABTS-radikaalia lisättiin 150 mikrolitraan näytettä ja 150 mikrolitraan vettä. 30 minuutin pimeässä olon jälkeen absorbanssi määritettiin aallonpituudella 734 nm. Trolox-konsentraatiota käytettiin standardina (mM Trolox/l). Tämä testi suoritettiin useille uutekonsentraatioille IC50:n laskemiseksi.

Tietojen tilastollinen analyysi suoritettiin SPSS Statistics (Statistical Package for Social Sciences) (versio 22) -ohjelmistolla. Käytettiin keskiarvoa ja keskiarvon standardivirhettä. Käytettiin sekatyyppistä Shapiro-Wilk- ja Repeated Measures -ANOVA-analyysiä. Riippumattomien näytteiden T-testiä käytettiin kahden ryhmän välisen eron arvioimiseen kokonaiskaloriarvon, hiilihydraattien, nautittujen proteiinien ja lipidien, Cmax:n (maksimipitoisuus), ΔCmax:n (maksimipitoisuuden vaihtelu) ja AUC:n (käyrän alla) osalta. arvot. AUC-arvon laski Software GraphPad Prim (versio 7.03). Kaikki tilastolliset testit suoritettiin 5 %:n merkitsevyystasolla.