Effect van gemberextract op postprandiale glykemie van gezonde volwassenen en de antioxiderende eigenschappen ervan

Deze klinische studie werd goedgekeurd door de ethische commissie (procesnummer 519 op 23 november 2016). Alle deelnemers ondertekenden een schriftelijke geïnformeerde toestemming na uitleg over doel en experimentele risicoprocedures en de beschermde vertrouwelijkheid ervan was gegarandeerd. De experimentele procedure waarbij een mens betrokken was, werd uitgevoerd volgens de Verklaring van Helsinki.

Deze blinde (voor deelnemers) gerandomiseerde gecontroleerde klinische studie werd uitgevoerd op de Egas Moniz-school voor hoger onderwijs bij 30 niet-diabetische volwassenen. Deelnemers met leeftijden tussen 18 en 40 werden geselecteerd en willekeurig verdeeld in interventiegroep (IG) (n=15) en controlegroep (CG) (n=15), waarin deelnemers afwisselend in de groepen werden opgenomen. De IG voerde een orale glucosetolerantietest (OGTT) uit, gevolgd door toediening van waterig gemberextract en de CG voerde alleen een OGTT-toediening uit.

Voor de bereiding van gemberextract werd gemberpoeder (Zingibre officinalle Roscoe) verkregen van Portugal Company met oorsprong in India en lokaal opgeslagen in een gedroogde omgeving totdat het nodig was. Het product heeft batchnummer LI1GIGRNT150012. Gemberpoeder werd individueel gewogen (0,2 g per dosis) en toegevoegd aan 100 ml gekookt water om het gemberextract te verkrijgen, gedurende 10 minuten trekkend. Gemberextractoplossing werd daarna afgekoeld tot kamertemperatuur en verdeeld onder elke deelnemer. Deze methode is aangepast door Wilkinson, JM (2000). Voor chemische analyse werd een eerder verkregen waterig gemberextract gebruikt.

Met betrekking tot de beoordeling van de bloedglucosespiegel werd het bloedmonster voor elke deelnemer verzameld met behulp van een capillaire bloeddruppel vóór de interventie (vasten) en na 30, 60, 90 en 120 minuten. De bloedglucosespiegelanalyse werd uitgevoerd met behulp van een strips voor glucosemeter (Onetouch Select Plus Flex), een gesteriliseerd lancet en een glucosemeterapparatuur.

Algemene kenmerken van de deelnemers werden verzameld, namelijk antropometrische gegevens, farmacologische behandeling en medische toestand met behulp van een vragenlijst. Bovendien werd een 24-uurs dieetherinnering op de dag vóór de interventie gebruikt om deelnemers te bemonsteren. De voedingsanalyse van het ingenomen dieet werd uitgevoerd door Food Processor SQL (versie 10.5.0).

De bepaling van de totale fenolverbindingen van het waterige gemberextract werd bepaald volgens de Folin-Ciocalteu-methode. De totale fenolische resultaten werden uitgedrukt als mg galluszuurequivalent (GAE)/L gemberextract. Een volume van 125 μl gemberextract en 2 ml natriumcarbonaat werden toegevoegd aan 2,5 ml Folin-Ciocalteu-reagens. Na 15 minuten werd de absorptie gemeten bij 765 nm. De bepaling van de flavonoïdenverbindingen van het waterige gemberextract werd bepaald volgens de Prabha-methode. De flavonoïdenresultaten werden uitgedrukt als mg quercetine-equivalent (GAE)/L gemberextract. Een volume van 2 ml gemberextract werd toegevoegd aan 0,1 ml watervrije aluminiumchlorideoplossing (10%), 0,1 ml kaliumacetaat (1 M) en 2,8 ml gedestilleerd water. Na 30 minuten werd de absorptie gemeten bij 415 nm.

De antioxidantactiviteit werd gemeten door middel van verschillende assays:

De activiteit van het wegvangen van superoxide-anionradicalen werd bepaald op basis van de methode van Morais et al. Superoxide-anion werd gegenereerd door fenazine-methosulfaat (PMS), nicotinamide-adenine-dinucleotide-hydride (NADH) en zuurstof te laten reageren, wat verminderde NBT in Formazan veroorzaakte. Een volume van 0,5 ml monster werd toegevoegd aan 0,5 ml van een oplossing die NADH (189 microM) en NBT (120 microM) met Tris-HCl (40 mM, pH = 8) bevatte. De reactie startte na toevoeging van 0,5 ml PMS (60 microM). Controlemonster werd gemeten met alleen gedestilleerd water. Na 5 minuten incubatie werd de controleabsorptie gemeten bij 560 nm bij kamertemperatuur.

De stikstofmonoxide-remmende activiteit werd bepaald volgens de methode van Khayami et al. Een volume van 1 ml natriumnitroprusside 10 nm werd toegevoegd aan 250 microL de fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en 250 microL testoplossing en het werd geschud. De vorige oplossing werd gedurende 150 minuten bij 25°C geïncubeerd en daarna werd 3 ml sulfanilzuur en 0,33% ijsazijn toegevoegd. Na 5 minuten bij kamertemperatuur werd 3 ml n-(1-naftyl)ethyleendiaminedihydrochloride (NED, 0,1% m/v) toegevoegd en gedurende 30 minuten bij 25°C geïncubeerd. De absorptie werd gemeten bij 533 nm. De vorige procedure werd gebruikt om te controleren verkregen met behulp van water.

Het vrije radicaal 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonzuur) (ABTS) werd verkregen door ABTS-oxidatie met kaliumpersulfaat 140 mM gedurende 12 uur in het donker, volgens de methode van Zulueta et al. Er werd een oplossing bereid met 10 ml ABTS 7nm en 176 microL persulfaat en gedurende 12 uur in het donker bij kamertemperatuur bewaard. De vorige oplossing werd verdund met ethanol tot 0,7 absorptie bij 734 nm. Een volume van 2850 microL ABTS radicaal werd toegevoegd aan 150 microL monster en aan 150 microL water. Na 30 minuten in het donker werd de absorptie bepaald op 734 nm. De Trolox-concentratie werd standaard gebruikt (mM Trolox/L). Deze test is uitgevoerd voor verschillende extractconcentraties om de IC50 te berekenen.

Gegevensstatistische analyse werd uitgevoerd met behulp van SPSS Statistics (Statistical Package for Social Sciences) (versie 22) software. Gemiddelde en standaardfout van het gemiddelde werden gebruikt. Shapiro-Wilk en herhaalde metingen ANOVA van gemengd type werden gebruikt. Onafhankelijke monsters T-test werd gebruikt om het verschil tussen de 2 groepen te beoordelen voor totale calorische waarde, ingenomen koolhydraten, eiwitten en lipiden, Cmax (maximale concentratie), ΔCmax (variatie van maximale concentratie) en AUC (gebied onder de curve) Incrementeel waarden. De AUC werd berekend door Software GraphPad Prim (versie 7.03). Alle statistische tests werden uitgevoerd op het significantieniveau van 5%.