Kyselina oleanolová jako terapeutické adjuvans pro diabetes mellitus 2. typu (OLTRAD STUDIE) (OLTRAD)

NÁVRH ZKOUŠKY Studie OLTRAD je prospektivní, paralelní skupinová, randomizovaná, dvojitě zaslepená, kontrolovaná studie navržená tak, aby prokázala, že pravidelný příjem funkčního olivového oleje obohaceného OA je účinný jako doplněk k léčbě metforminem (jako monoterapie nebo v kombinaci s jiných antidiabetik) v metabolické kontrole pacientů s T2DM. Účinek olivového oleje obohaceného OA bude porovnán s účinkem kontrolního oleje, který se skládá ze stejného komerčního olivového oleje, který není obohacen o triterpen.

Celkem 100 dobrovolníků obou pohlaví bude vybráno z řad pacientů s T2DM léčených v Endokrinologické a nutriční službě Univerzitní nemocnice 'Virgen del Rocío' (Sevilla, ŠPANĚLSKO).

VÝPOČET VELIKOSTI VZORKU Sérový glykosylovaný hemoglobin (HbA1c) je přijat jako hlavní kvantitativní proměnná pro analýzu kontroly glykémie. Nulová hypotéza uvedená v návrhu studie je, že dietní intervence založená na OA sníží výchozí sérové ​​hladiny HbA1c pacientů alespoň o 7 % ve srovnání s kontrolní skupinou. K testování tohoto jednostranného testu hypotézy s 95% úrovní spolehlivosti (α riziko = 0,05) a 95% mocí (β riziko = 0,05) je zapotřebí velikost vzorku 44 dobrovolníků na skupinu. Vzhledem k charakteristice studie (dlouhodobý zásah do životního stylu) lze však předpokládat ztráty účastníků až 15 %, což vede k upravené velikosti vzorku 50 jedinců na skupinu.

RANDOMIZACE Jakmile bude 100 pacientů s T2DM vybráno, bude náhodně rozděleno do jedné ze dvou studijních skupin. Padesát jedinců bude přiděleno do intervenční skupiny, která bude konzumovat funkční olivový olej obohacený OA, zatímco dalších 50 dobrovolníků bude přiděleno do kontrolní skupiny, která bude dostávat stejný neobohacený olivový olej. Studijní ošetřovatelský personál si v době přijetí telefonicky vyžádá klinického koordinátora studie (hlavního řešitele 2 projektu) o zařazení účastníků do studijních skupin (centralizovaná randomizace). Přidělování do těchto skupin bude provedeno pomocí počítačově generovaných tabulek náhodných čísel. Budou vytvořeny čtyři randomizační vrstvy podle pohlaví a věku (mezi 50 lety).

INTERVENCE Účastníci budou instruováni, aby konzumovali 55 ml/den přiděleného oleje, nejlépe syrového a volně distribuovaného mezi tři hlavní jídla. Olivový olej obohacený OA i kontrolní olej budou dodávány označené alfanumerickými kódy, jejichž shodu bude znát pouze hlavní řešitel 1 projektu. To zajišťuje zaslepení klinických výzkumníků a účastníků s ohledem na typ přiděleného olivového oleje.

NÁSLEDUJÍCÍ ÚČASTNÍCI Účastníci klinického hodnocení budou sledováni po dobu 12 měsíců od zařazení, podle plánu čtvrtletních návštěv.

V době náboru a každé tři měsíce poté budou účastníci měřeni antropometricky, měřením krevního tlaku a srdeční frekvence. Budou také dotázáni na gastrointestinální poruchy nebo jiné typy potíží a vyplní dotazník o životním stylu (strava, fyzická aktivita, užívání alkoholu a tabáku), zdravotním stavu a užívání léků.

Také na začátku účasti ve studii a poté každé tři měsíce budou z kubitální žíly odebrány vzorky krve nalačno, které budou odebírány do sterilních plastových zkumavek s vakuovým systémem. Podobně účastníci poskytnou alikvoty své první ranní moči ve sterilních plastových zkumavkách. Analytická stanovení v krvi a moči budou prováděna v Laboratoři klinické biochemie a analýzy Fakultní nemocnice 'Virgen del Rocío' v Seville (HUVR).

Kromě toho budou alikvoty plazmy zaslány do „Instituto de la Grasa“ (IG-CSIC) pro doplňková biochemická stanovení. Laboratorní technici z obou institucí obdrží vzorky označené alfanumerickými identifikačními kódy, a proto budou zaslepeni pro zásahové skupiny.

V těchto čtvrtletních návštěvách se dobrovolníci zúčastní sezení nutričního vzdělávacího programu a dostanou zdarma 6 l přiděleného oleje. Dodržování dietní intervence bude čtvrtletně hodnoceno prostřednictvím Haynes-Sackettova testu shody a vracení pravděpodobně spotřebovaných prázdných lahví.

Primárním výsledkem studie je zlepšení kontroly glykémie, hodnocené vývojem HbA1c. Jako sekundární výsledky získáme data o antropometrických a klinických proměnných a také o biochemických parametrech krve a moči.

ANAMNÉZA A KLINICKÉ VYŠETŘENÍ ÚČASTNÍKŮ Lékařští výzkumníci projektu mají přístup k elektronickým lékařským záznamům účastníků na platformě DIRAYA Andaluské zdravotní služby a provedou anamnézu a fyzické vyšetření účastníků, které bude obsahovat životně důležité údaje. a všeobecná lékařská a chirurgická anamnéza, stejně jako následná farmakologická léčba. Dále získají informace o životním stylu, vnímání vlastního tělesného obrazu, stravování, druhu a intenzitě pohybové aktivity. Kromě toho bude provedeno celkové klinické vyšetření včetně celkového vzhledu a kontroly rukou a paží, chodidel a nohou, kůže, obličeje, očí, úst, krku, břicha, otoku, lymfatických uzlin a vitálních funkcí (teplota, puls, dechová frekvence a krevní tlak).

ANTROPOMETRICKÁ STUDIE A STAVBA TĚLA Antropometrická studie bude zahrnovat stanovení celkové tělesné hmotnosti, výšky, indexu tělesné hmotnosti (BMI) a také obvodů pasu a boků. Studium a hodnocení těchto proměnných bude prováděno podle pokynů Mezinárodní společnosti pro pokrok v kinantropometrii (ISAK). Studium tělesného složení bude provedeno pomocí elektrické bioimpedance. Tuková hmota, netuková hmota, svalová hmota, celková voda, kostní hmota, bazální metabolismus a viscerální tuk budou kvantifikovány pomocí této techniky pomocí validovaných predikčních rovnic upravených pro věk a pohlaví.

HODNOCENÍ PŘÍJMU POTRAVY A NUTRIČNÍ ŠKOLENÍ Bude zaveden program nutričního vzdělávání, který bude hodnotit příjem potravy účastníků a posílit dodržování uvedených dietních doporučení. K měření příjmu potravy použijeme registrační formulář příjmu potravy navržený Univerzitou v Navarře (Španělsko) a úspěšně používaný v jiných studiích, jako je studie PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED). Tento formulář je ověřeným nástrojem, který kvantifikuje příjem potravy z hlediska porcí jídla nebo skupin potravin pro dospělé žijící ve Španělsku. Na druhou stranu se všichni účastníci zapojí do workshopů, kde dostanou konkrétní dietní doporučení pro pacienty s T2DM, budou poučeni o zdravém stravování, nejlepších možnostech stravování a adekvátních porcích, omezení vysoce zpracovaných potravin, koláčů, cukru, tučná jídla a také sladké a alkoholické nápoje. Kromě toho pacienti získají informace o receptech, sezónních nákupních seznamech a použití olivového oleje při vaření a dresinku. Stravovací návyky účastníků budou čtvrtletně analyzovány pomocí 24hodinového dotazníku. Software „NUTRIUM“ (https://nutrium.com/; Braga; Portugalsko) pro nutriční hodnocení diet.

BIOCHEMIE KRVE V HUVR Ve vzorcích krve z ulny stanovení týkající se cirkulujících lipidů [celkové triglyceridy, celkový cholesterol, LDL, HDL, celkový apolipoprotein B a lipoprotein A]; homeostáza glukózy [glykémie, inzulinémie, C-peptid, index HOMA-IR, HbA1c]; oxidační stres a záněty [kyselina močová, bilirubin, malondialdehyd, ultrasenzitivní C-reaktivní protein, hormon stimulující štítnou žlázu (TSH)], stejně jako ty, které souvisejí s poškozením jater a ledvin [laktátdehydrogenáza (LDH), jaterní transaminázy (ALT, AST , GGT ) a kreatinin].

Posouzena bude také plazmatická hladina vitaminu B12. Kromě toho bude možný výskyt jaterní fibrózy hodnocen pomocí Hepamet Fibrosis Score, neinvazivní metody, která vypočítává skóre s přihlédnutím k faktorům, jako je věk, pohlaví, přítomnost diabetu, hladiny glukózy, inzulín, albumin, krevní destičky, a AST. Tento nástroj navržený Sevillským institutem biomedicíny (IBiS) je indikován k posouzení podezření na fibrózu u pacientů s obezitou, diabetem, metabolickým syndromem, jaterní steatózou a/nebo abnormálními markery jaterních funkcí. Metoda nabízí diagnostickou spolehlivost a poměr cena/přínos, který je lepší než jiné metody, jako je FIB-4 a NAFLD Fibrosis Score.

KONTINUÁLNÍ MONITOROVÁNÍ GLUKÓZY V KRVI Hladina glukózy v plazmě bude nepřetržitě monitorována pomocí subkutánního systému „FreeStyle Libre“ (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL.; USA). Senzory budou připojeny k účastníkům ve dvou časech během studie: na začátku a po 12 měsících sledování a budou sbírat data po dobu 48 hodin. Pomocí tohoto systému budou stanoveny různé glykemické parametry, jako je plocha pod křivkou (AUC), střední amplituda glykemické odchylky (MAGE), průměrná glykemie a také směrodatná odchylka (SD) a koeficient variace (CV).

PLAZMOVÁ BIOCHEMIE V IG-CSIC Výzkumníci IG-CSIC provedou řadu doplňkových stanovení ve vzorcích plazmy, jako jsou plazmatické koncentrace OA, hladiny glutathionu (GSH a GSSG), složení mastných kyselin, sérové ​​adipokiny (ceruloplasmin adiponektin, leptin, resistin a ghrelin). Dále budou stanoveny sérové ​​antioxidační enzymy (superoxiddismutáza, kataláza) a prozánětlivé cytokiny (TNF-α, IL-1β, IL-6).

Na druhé straně bude VLDL frakce plazmatických lipoproteinů izolována ultracentrifugací (230 000 × g po dobu 18 h při 4 °C). V těchto částicích bude měřen celkový obsah mastných kyselin, triglyceridů, diglyceridů, fosfolipidů a celkového apolipoproteinu B.

ANALÝZA MOČI První ranní vzorky moči budou analyzovány pro obvyklá fyzikální, chemická a mikroskopická stanovení (pH, hustota, glykosurie, ketony, dusitany, urobilinogen, bilirubin, sediment, leukocyty, mikroalbuminurie/g kreatininu). Stanovení těchto parametrů bude rovněž prováděno v zařízeních Laboratoře klinické biochemie a analýzy Univerzitních nemocnic „Virgen del Rocío“ v Seville.

STATISTICKÁ ANALÝZA Zkouška bude provedena podle principu intence-to-treat (ITT). Kvalitativní proměnné budou vyjádřeny jejich absolutní a relativní četností, zatímco kvantitativní proměnné s normálním rozdělením budou vyjádřeny průměrem a směrodatnou odchylkou a proměnné s nenormálním rozdělením mediánem a mezikvartilovým rozmezím (IQR). Srovnání mezi studijními skupinami pro kvalitativní proměnné bude provedeno pomocí Chi-kvadrát a McNemarových testů, zatímco srovnání pro kvantitativní proměnné budou provedeny pomocí Studentova t-testu a ANOVA. Homogenita populací zařazených do alokačních skupin bude hodnocena pomocí Mann-Whitney-Wilcoxon U-testu. Všechny P-hodnoty budou dvoustranné při α = 0,05. Statistická analýza bude provedena pomocí softwaru SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, USA)