齐墩果酸作为 2 型糖尿病的治疗佐剂（OLTRAD 研究） (OLTRAD)

试验设计 OLTRAD 研究是一项前瞻性、平行组、随机、双盲、对照试验，旨在证明定期摄入富含 OA 的功能性橄榄油作为二甲双胍疗法的辅助疗法是有效的（作为单一疗法或与二甲双胍联合疗法）其他抗糖尿病药物）在 T2DM 患者代谢控制中的作用。 富含 OA 的橄榄油的效果将与对照油的效果进行比较，对照油由相同的商用橄榄油组成，但未强化三萜。

将从“Virgen del Rocío”大学医院（西班牙塞维利亚）内分泌和营养服务中心接受治疗的 T2DM 患者中选出总共 100 名男女志愿者。

样本量计算 采用血清糖化血红蛋白 (HbA1c) 作为血糖控制分析的主要定量变量。 试验设计中提出的零假设是，与对照组相比，基于 OA 的饮食干预将使患者的基线血清 HbA1c 水平降低至少 7%。 为了以 95% 的置信水平（α 风险 = 0.05）和 95% 的功效（β 风险 = 0.05）检验这一单边假设检验，每组需要 44 名志愿者的样本量。 然而，由于该研究的特点（长期生活方式干预），可以假设参与者损失高达 15%，从而调整后的样本量为每组 50 人。

随机分组 一旦招募，100 名 T2DM 患者将被随机分配到两个研究组之一。 50 名志愿者将被分配到干预组，该组将摄入富含 OA 的功能性橄榄油，而其他 50 名志愿者将被分配到对照组，该组将接受相同的非强化橄榄油。 入院时，研究护理人员将通过电话要求试验的临床协调员（项目首席研究员 2）将参与者分配到研究组（集中随机化）。 将使用计算机生成的随机数表对这些组进行分配。 将按性别和年龄（截止时间为 50 岁）构建四个随机分层。

干预 参与者将被指示每天摄入 55 毫升指定的油，最好是生的，并自由分配在三顿主餐中。 富含 OA 的橄榄油和对照油都将贴上字母数字代码标签交付，其对应关系只有该项目的首席研究员 1 知道。 这确保了临床研究人员和参与者对分配的橄榄油类型不知情。

随访 根据季度访视计划，临床试验参与者将从入组后进行 12 个月的随访。

在招募时以及此后每三个月，将对参与者进行人体测量、血压和心率测量。 他们还将被询问胃肠道疾病或其他类型的投诉，并完成一份关于生活方式（饮食、体力活动、饮酒和吸烟）、医疗状况和药物使用的调查问卷。

此外，在参与研究开始时以及此后每三个月，将从肘静脉抽取空腹血样，并将其收集在带有真空系统的无菌塑料管中。 同样，参与者将在无菌塑料管中提供他们的第一次晨尿等份。 血液和尿液的分析测定将在塞维利亚“Virgen del Rocío”大学医院 (HUVR) 的临床生物化学和分析实验室进行。

此外，等份血浆将被送往“Instituto de la Grasa”（IG-CSIC）进行补充生化测定。 两个机构的实验室技术人员将收到用字母数字 ID 代码标识的样本，因此对干预组不知情。

在这些季度访问中，志愿者将参加营养教育计划的课程，并免费获得 6 升指定油。 将通过 Haynes-Sackett 自我报告的依从性测试和可能消耗的空瓶的归还，每季度评估对饮食干预的遵守情况。

该试验的主要结果是血糖控制的改善，通过 HbA1c 的变化进行评估。 作为次要结果，我们将获得人体测量和临床变量以及血液和尿液生化参数的数据。

参与者的病历和临床检查 该项目的医学研究人员可以在安达卢西亚卫生服务中心的 DIRAYA 平台上访问参与者的电子病历，并对参与者进行病历和体检，其中包括重要数据一般病史和手术史，以及随后的药物治疗。 还将获得有关生活方式、对自己身体形象的感知、饮食以及身体活动的类型和强度的信息。 此外，还将进行一般临床检查，包括一般外观和检查手和手臂、脚和腿、皮肤、面部、眼睛、口腔、颈部、腹部、水肿、淋巴结和生命体征（体温、脉搏、呼吸频率和血压）。

人体测量研究和身体成分 人体测量研究将包括确定总体重、身高、体重指数 (BMI) 以及腰围和臀围。 这些变量的研究和评估将根据国际运动测量学促进会（ISAK）的指导方针进行。 身体成分的研究将通过生物电阻抗进行。 脂肪量、瘦肉量、肌肉量、总水量、骨量、基础代谢和内脏脂肪将通过该技术进行量化，使用根据年龄和性别进行调整的经过验证的预测方程。

食物摄入量评估和营养培训 将实施营养教育计划，以评估参与者的食物摄入量并加强对所给出饮食建议的遵守情况。 为了测量食物摄入量，我们将使用纳瓦拉大学（西班牙）设计的食物摄入登记表，并在其他试验中成功使用，例如 PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED) 研究。 该表格是一种经过验证的工具，可以根据食物部分或食物组来量化居住在西班牙的成年人的食物摄入量。 另一方面，所有参与者都将参加研讨会，在那里他们将收到针对 T2DM 患者的具体饮食建议，他们将接受健康饮食、最佳食物选择和充足份量的指导，限制高度加工食品、蛋糕、糖、脂肪食物以及含糖和酒精饮料。 此外，患者还将获得有关食谱、季节性购物清单以及使用橄榄油烹饪和调味的信息。 每季度都会通过24小时回忆问卷的方式对参与者的饮食习惯进行分析。 “NUTRIUM”软件 (https://nutrium.com/； 布拉加；葡萄牙）将用于饮食的营养评估。

HUVR 中的血液生物化学 在尺骨血样中，测定与循环脂质相关的物质 [总甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白 (HDL)、总载脂蛋白 B 和脂蛋白 A]；葡萄糖稳态[血糖、胰岛素血症、C肽、HOMA-IR指数、HbA1c]；氧化应激和炎症 [尿酸、胆红素、丙二醛、超敏 C 反应蛋白、促甲状腺激素 (TSH)]，以及与肝肾损伤相关的因素 [乳酸脱氢酶 (LDH)、肝转氨酶 (ALT、AST) 、GGT）和肌酐]将被执行。

还将评估维生素 B12 的血浆水平。 此外，肝纤维化的可能出现将通过 Hepamet 纤维化评分进行评估，这是一种非侵入性方法，计算评分时考虑了年龄、性别、是否患有糖尿病、血糖水平、胰岛素、白蛋白、血小板、和 AST。 该工具由塞维利亚生物医学研究所 (IBiS) 设计，用于评估肥胖、糖尿病、代谢综合征、肝脂肪变性和/或肝功能标志物异常患者的疑似纤维化。 该方法提供的诊断可靠性和成本/效益比优于其他方法，例如 FIB-4 和 NAFLD 纤维化评分。

连续血糖监测 将使用“FreeStyle Libre”皮下系统（ABBOTT Diagnostics；芝加哥，伊利诺伊州；美国）连续监测血浆葡萄糖。 在整个试验过程中，传感器将两次附着在参与者身上：基线时和 12 个月的随访后，并将收集 48 小时的数据。 通过该系统，将确定不同的血糖参数，例如曲线下面积（AUC）、血糖波动的平均幅度（MAGE）、平均血糖以及标准差（SD）和系数变异（CV）。

IG-CSIC 中的血浆生物化学 IG-CSIC 的研究人员将对血浆样本进行许多补充测定，例如 OA 的血浆浓度、谷胱甘肽（GSH 和 GSSG）水平、脂肪酸组成、血清脂肪因子（铜蓝蛋白） 、脂联素、瘦素、抵抗素和生长素释放肽）。 血清抗氧化酶（超氧化物歧化酶、过氧化氢酶）和促炎细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）也将被测定。

另一方面，血浆脂蛋白的 VLDL 部分将通过超速离心（230,000 × g，4°C，18 小时）分离。 在这些颗粒中，将测量脂肪酸、甘油三酯、甘油二酯、磷脂和总载脂蛋白B的总含量。

尿液分析 第一份晨尿样本将进行常规物理、化学和显微镜测定（pH、密度、糖尿、酮、亚硝酸盐、尿胆原、胆红素、沉渣、白细胞、微量白蛋白尿/g 肌酐）。 这些参数的测定也将在塞维利亚“Virgen del Rocío”大学医院的临床生物化学和分析实验室的设施中进行。

统计分析 该试验将根据意向治疗（ITT）原则进行。 定性变量用绝对频率和相对频率来表示，正态分布的定量变量用平均值和标准差来表示，非正态分布的定量变量用中位数和四分位数间距（IQR）来表示。 研究组之间定性变量的比较将通过卡方检验和麦克尼马尔检验进行，而定量变量的比较将通过学生 t 检验和方差分析进行。 将使用Mann-Whitney-Wilcoxon U 检验来评估分配组中人口的同质性。 所有 P 值在 α = 0.05 时均为双尾。 将使用 SPSS 27（IBM SPSS Statistics，纽约，美国）软件进行统计分析