Kwas oleanolowy jako adiuwant terapeutyczny w cukrzycy typu 2 (BADANIE OLTRAD) (OLTRAD)

PROJEKT BADANIA Badanie OLTRAD jest prospektywnym, równoległym, randomizowanym, podwójnie ślepym, kontrolowanym badaniem, mającym na celu wykazanie, że regularne spożywanie funkcjonalnej oliwy z oliwek wzbogaconej w OA jest skuteczne jako uzupełnienie terapii metforminą (w monoterapii lub w skojarzeniu z inne leki przeciwcukrzycowe) w kontroli metabolicznej pacjentów z T2DM. Działanie oliwy z oliwek wzbogaconej w OA zostanie porównane z działaniem oliwy kontrolnej, która składa się z tej samej dostępnej w handlu oliwy z oliwek, niewzbogaconej w triterpen.

Spośród pacjentów z T2DM leczonych w Oddziale Endokrynologii i Żywienia Szpitala Uniwersyteckiego „Virgen del Rocío” (Sewilla, HISZPANIA) zostanie wybranych łącznie 100 ochotników obu płci.

OBLICZANIE WIELKOŚCI PRÓBKI Hemoglobinę glikozylowaną w surowicy (HbA1c) przyjmuje się jako główną zmienną ilościową w analizie kontroli glikemii. Hipotezą zerową postawioną w projekcie badania jest to, że interwencja dietetyczna oparta na OA obniży wyjściowe stężenie HbA1c w surowicy pacjentów o co najmniej 7% w porównaniu z grupą kontrolną. Aby przetestować ten jednostronny test hipotezy z poziomem ufności 95% (ryzyko α = 0,05) i mocą 95% (ryzyko β = 0,05), wymagana jest wielkość próby wynosząca 44 ochotników na grupę. Jednakże ze względu na charakter badania (długoterminowa interwencja dotycząca stylu życia) można założyć straty uczestników wynoszące do 15%, co daje skorygowaną wielkość próby wynoszącą 50 osób na grupę.

RANDOMIZACJA Po rekrutacji 100 pacjentów z T2DM zostanie losowo przydzielonych do jednej z dwóch grup badawczych. Pięćdziesiąt osób zostanie przydzielonych do grupy interwencyjnej, która będzie spożywać funkcjonalną oliwę z oliwek wzbogaconą w OA, natomiast pozostałych 50 ochotników zostanie przydzielonych do grupy kontrolnej, która otrzyma tę samą niewzbogaconą oliwę z oliwek. W momencie przyjęcia do badania personel pielęgniarski badania zwróci się telefonicznie do koordynatora klinicznego badania (głównego badacza 2 projektu) o przydzielenie uczestników do grup badawczych (randomizacja scentralizowana). Przydział do tych grup zostanie dokonany na podstawie wygenerowanych komputerowo tabel liczb losowych. Zostaną utworzone cztery warstwy randomizacji według płci i wieku (od 50 lat).

INTERWENCJA Uczestnicy zostaną poinstruowani, aby spożywać 55 ml dziennie wyznaczonego oleju, najlepiej surowego i swobodnie rozdzielonego pomiędzy trzy główne posiłki. Zarówno oliwa z oliwek wzbogacona w OA, jak i olej kontrolny będą dostarczane oznakowane kodami alfanumerycznymi, których zgodność będzie znana jedynie kierownikowi projektu nr 1. Zapewnia to oślepienie badaczy klinicznych i uczestników w odniesieniu do przypisanego rodzaju oliwy z oliwek.

OBSERWACJA Uczestnicy badania klinicznego będą objęci obserwacją przez 12 miesięcy od rejestracji, zgodnie z planem wizyt kwartalnych.

W momencie rekrutacji, a następnie co trzy miesiące uczestnikom zostaną poddane pomiary antropometryczne, pomiary ciśnienia krwi i tętna. Zostaną także zapytani o zaburzenia żołądkowo-jelitowe lub inne dolegliwości, a także wypełnią ankietę dotyczącą stylu życia (dieta, aktywność fizyczna, używanie alkoholu i tytoniu), schorzeń i zażywanych leków.

Również na początku udziału w badaniu, a następnie co trzy miesiące z żyły łokciowej pobierana będzie krew na czczo, która będzie pobierana do sterylnych probówek plastikowych z systemem próżniowym. Podobnie uczestnicy będą dostarczać porcje pierwszego porannego moczu w sterylnych plastikowych probówkach. Oznaczenia analityczne krwi i moczu zostaną wykonane w Laboratorium Biochemii Klinicznej i Analiz Szpitala Uniwersyteckiego „Virgen del Rocío” w Sewilli (HUVR).

Ponadto porcje osocza zostaną przesłane do „Instituto de la Grasa” (IG-CSIC) w celu uzupełniających oznaczeń biochemicznych. Technicy laboratoryjni z obu instytucji otrzymają próbki oznaczone alfanumerycznymi kodami identyfikacyjnymi i dlatego nie będą mogli rozpoznać grup interwencyjnych.

Podczas tych kwartalnych wizyt wolontariusze wezmą udział w sesjach programu edukacji żywieniowej i otrzymają bezpłatnie 6 litrów przydzielonego oleju. Przestrzeganie zaleceń dietetycznych będzie oceniane co kwartał w drodze samodzielnie przeprowadzanego przez Haynes-Sacketta testu zgodności oraz zwrotu prawdopodobnie skonsumowanych pustych butelek.

Głównym wynikiem badania jest poprawa kontroli glikemii oceniana na podstawie ewolucji HbA1c. Jako wyniki wtórne otrzymamy dane dotyczące zmiennych antropometrycznych i klinicznych, a także parametrów biochemicznych krwi i moczu.

ANAMNEZA I BADANIE KLINICZNE UCZESTNIKÓW Badacze medyczni projektu mają dostęp do elektronicznej dokumentacji medycznej uczestników na platformie DIRAYA andaluzyjskiej służby zdrowia i przeprowadzą wywiad oraz badanie fizykalne uczestników, które będzie zawierać istotne dane oraz ogólny wywiad lekarski i chirurgiczny, a także zastosowane leczenie farmakologiczne. Uzyskane zostaną także informacje na temat stylu życia, postrzegania obrazu własnego ciała, diety oraz rodzaju i intensywności aktywności fizycznej. Ponadto zostanie przeprowadzone ogólne badanie kliniczne obejmujące ogólny wygląd i kontrolę dłoni i ramion, stóp i nóg, skóry, twarzy, oczu, ust, szyi, brzucha, obrzęków, węzłów chłonnych i parametrów życiowych (temperatura, tętno, częstość oddechów i ciśnienie krwi).

BADANIE ANTROPOMETRYCZNE I SKŁAD CIAŁA Badanie antropometryczne obejmie określenie całkowitej masy ciała, wzrostu, wskaźnika masy ciała (BMI) oraz obwodu talii i bioder. Badanie i ocena tych zmiennych zostaną przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Międzynarodowego Towarzystwa Postępu Kinantropometrii (ISAK). Badanie składu ciała będzie realizowane metodą bioimpedancji elektrycznej. Za pomocą tej techniki określane będą ilościowo masa tłuszczowa, masa beztłuszczowa, masa mięśniowa, całkowita woda, masa kostna, podstawowy metabolizm i tłuszcz trzewny, przy użyciu zwalidowanych równań prognostycznych dostosowanych do wieku i płci.

OCENA SPOŻYCIA POŻYWIENIA I TRENING ŻYWIENIOWY Realizowany będzie program edukacji żywieniowej, którego celem będzie ocena spożycia pokarmu przez uczestników i ugruntowanie przestrzegania podanych zaleceń żywieniowych. Do pomiaru spożycia pokarmu wykorzystamy formularz rejestracji spożycia opracowany przez Uniwersytet Nawarry (Hiszpania) i z powodzeniem zastosowany w innych badaniach, takich jak badanie PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED). Formularz ten jest zatwierdzonym narzędziem, które pozwala określić ilościowo spożycie żywności pod względem porcji lub grup żywności przez osoby dorosłe mieszkające w Hiszpanii. Natomiast wszyscy uczestnicy wezmą udział w warsztatach, podczas których otrzymają szczegółowe zalecenia dietetyczne dla pacjentów z T2DM, a także zostaną poinstruowani w zakresie zdrowej diety, najlepszych wyborów żywieniowych i odpowiednich porcji, ograniczając żywność wysoko przetworzoną, ciasta, cukier, tłuste potrawy oraz napoje zawierające cukier i alkohol. Dodatkowo pacjenci uzyskają informacje na temat przepisów, list zakupów sezonowych oraz wykorzystania oliwy z oliwek do gotowania i dressingów. Nawyki żywieniowe uczestników będą analizowane co kwartał za pomocą 24-godzinnej ankiety. Oprogramowanie „NUTRIUM” (https://nutrium.com/; Braga; Portugalia) do oceny wartości odżywczej diet.

BIOCHEMIA KRWI W HUVR W próbkach krwi łokciowej, oznaczenia dotyczące krążących lipidów [całkowite trójglicerydy, całkowity cholesterol, LDL, HDL, całkowita apolipoproteina B i lipoproteina A]; homeostaza glukozy [glikemia, insulinemia, peptyd C, wskaźnik HOMA-IR, HbA1c]; stres oksydacyjny i stany zapalne [kwas moczowy, bilirubina, aldehyd malonowy, ultrawrażliwe białko C-reaktywne, hormon tyreotropowy (TSH)], a także te związane z uszkodzeniem wątroby i nerek [dehydrogenaza mleczanowa (LDH), transaminazy wątrobowe (ALT, AST , GGT ) i kreatynina] zostaną wykonane.

Ocenione zostanie również stężenie witaminy B12 w osoczu. Ponadto ewentualny wygląd zwłóknienia wątroby zostanie oceniony za pomocą Hepamet Fibrosis Score, nieinwazyjnej metody, która oblicza wynik biorąc pod uwagę takie czynniki, jak wiek, płeć, obecność cukrzycy, poziom glukozy, insulina, albuminy, płytki krwi, i AST. Narzędzie to, zaprojektowane przez Instytut Biomedycyny w Sewilli (IBiS), jest wskazane do oceny podejrzenia zwłóknienia u pacjentów z otyłością, cukrzycą, zespołem metabolicznym, stłuszczeniem wątroby i/lub nieprawidłowymi markerami czynności wątroby. Metoda ta zapewnia niezawodność diagnostyczną i stosunek kosztów do korzyści lepszy od innych metod, takich jak FIB-4 i NAFLD Fibrosis Score.

CIĄGŁE MONITOROWANIE GLUKOZY WE KRWI Poziom glukozy w osoczu będzie stale monitorowany przy użyciu systemu podskórnego „FreeStyle Libre” (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL.; USA). Czujniki zostaną przymocowane do uczestników dwukrotnie w trakcie badania: na początku badania i po 12 miesiącach obserwacji i będą zbierać dane przez 48 godzin. Za pomocą tego systemu zostaną określone różne parametry glikemii, takie jak pole pod krzywą (AUC), średnia amplituda wychylenia glikemii (MAGE), średnia glikemia, a także odchylenie standardowe (SD) i współczynnik odmiana (CV).

BIOCHEMIA PLAZMY W IG-CSIC Badacze IG-CSIC przeprowadzą szereg uzupełniających oznaczeń w próbkach osocza, takich jak stężenie OA w osoczu, poziom glutationu (GSH i GSSG), skład kwasów tłuszczowych, stężenie adipokin w surowicy (ceruloplazmina , adiponektyna, leptyna, rezystyna i grelina). Oznaczone zostaną także w surowicy enzymy antyoksydacyjne (dysmutaza ponadtlenkowa, katalaza) i cytokiny prozapalne (TNF-α, IL-1β, IL-6).

Z drugiej strony frakcja VLDL lipoprotein osocza zostanie wyizolowana przez ultrawirowanie (230 000 x g przez 18 godzin w temperaturze 4 ° C). W cząstkach tych będzie mierzona całkowita zawartość kwasów tłuszczowych, triglicerydów, diglicerydów, fosfolipidów i całkowitej apolipoproteiny B.

ANALIZA MOCZU Próbki pierwszego porannego moczu zostaną poddane analizie pod kątem zwykłych oznaczeń fizycznych, chemicznych i mikroskopowych (pH, gęstość, cukromocz, ketony, azotyny, urobilinogen, bilirubina, osad, leukocyty, mikroalbuminuria/g kreatyniny). Oznaczenie tych parametrów będzie również prowadzone w obiektach Laboratorium Biochemii Klinicznej i Analiz Szpitala Uniwersyteckiego „Virgen del Rocío” w Sewilli.

ANALIZA STATYSTYCZNA Badanie zostanie przeprowadzone zgodnie z zasadą zamiaru leczenia (ITT). Zmienne jakościowe wyrażone zostaną poprzez ich częstość bezwzględną i względną, ilościowe o rozkładzie normalnym wyrażone zostaną poprzez średnią i odchylenie standardowe, a te o rozkładzie innym niż normalny poprzez medianę i rozstęp międzykwartylowy (IQR). Porównania pomiędzy badanymi grupami dla zmiennych jakościowych zostaną przeprowadzone za pomocą testu Chi-kwadrat i testu McNemara, natomiast porównania dla zmiennych ilościowych za pomocą testu t-Studenta i ANOVA. Homogeniczność populacji wchodzących w skład grup alokacyjnych będzie oceniana za pomocą testu U Manna-Whitneya-Wilcoxona. Wszystkie wartości P będą dwustronne przy α = 0,05. Analiza statystyczna zostanie przeprowadzona za pomocą oprogramowania SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, USA)