Ácido oleanólico como adjuvante terapêutico para diabetes mellitus tipo 2 (ESTUDO OLTRAD) (OLTRAD)

DESENHO DO TESTE O estudo OLTRAD é um estudo prospectivo, de grupo paralelo, randomizado, duplo-cego e controlado, projetado para demonstrar que a ingestão regular de azeite funcional enriquecido com OA é eficaz como adjuvante da terapia com metformina (como monoterapia ou em combinação com outros medicamentos antidiabéticos) no controle metabólico de pacientes com DM2. O efeito do azeite enriquecido com OA será comparado com o do azeite controle, que consiste no mesmo azeite comercial não fortificado com triterpeno.

Serão selecionados 100 voluntários de ambos os sexos entre os pacientes com DM2 atendidos no Serviço de Endocrinologia e Nutrição do Hospital Universitário 'Virgen del Rocío' (Sevilha, ESPANHA).

CÁLCULO DO TAMANHO DA AMOSTRA A hemoglobina glicosilada sérica (HbA1c) é adotada como principal variável quantitativa para análise do controle glicêmico. A hipótese nula declarada no desenho do estudo é que a intervenção dietética baseada em OA reduzirá os níveis séricos basais de HbA1c dos pacientes em pelo menos 7%, em comparação com o grupo de controle. Para testar este teste de hipótese unilateral com um nível de confiança de 95% (risco α = 0,05) e poder de 95% (risco β = 0,05), é necessária uma amostra de 44 voluntários por grupo. No entanto, devido às características do estudo (uma intervenção de longo prazo no estilo de vida), podem ser assumidas perdas de participantes de até 15%, resultando em um tamanho de amostra ajustado de 50 indivíduos por grupo.

RANDOMIZAÇÃO Uma vez recrutados, os 100 pacientes com DM2 serão aleatoriamente designados para um dos dois grupos de estudo. Cinquenta indivíduos serão designados para o grupo intervenção, que ingerirá o azeite funcional enriquecido com AO, enquanto os outros 50 voluntários serão designados para o grupo controle, que receberá o mesmo azeite não enriquecido. No momento da admissão, a equipe de enfermagem do estudo solicitará por telefone ao coordenador clínico do ensaio (Investigador Principal 2 do Projeto) a atribuição dos participantes aos grupos de estudo (randomização centralizada). A alocação para esses grupos será feita usando tabelas de números aleatórios geradas por computador. Serão construídos quatro estratos de randomização por sexo e idade (corte de 50 anos).

INTERVENÇÃO Os participantes serão orientados a ingerir 55 mL/dia do óleo designado, preferencialmente cru e distribuído livremente entre as três refeições principais. Tanto o azeite enriquecido com AO como o azeite de controlo serão entregues rotulados com códigos alfanuméricos, cuja correspondência só será conhecida pelo Investigador Principal 1 do projeto. Isto garante o cegamento dos investigadores clínicos e participantes no que diz respeito ao tipo de azeite atribuído.

ACOMPANHAMENTO Os participantes do ensaio clínico serão acompanhados por 12 meses a partir da inscrição, de acordo com um plano de visitas trimestrais.

No momento do recrutamento e a cada três meses a partir de então, os participantes serão medidos para medições antropométricas, de pressão arterial e de frequência cardíaca. Eles também serão questionados sobre distúrbios gastrointestinais ou outros tipos de queixas e preencherão um questionário sobre estilo de vida (alimentação, atividade física, uso de álcool e tabaco), condições médicas e uso de medicamentos.

Também no início da participação no estudo e a cada três meses a partir de então, serão coletadas amostras de sangue em jejum da veia cubital, que serão coletadas em tubos plásticos estéreis com sistema de vácuo. Da mesma forma, os participantes fornecerão alíquotas da primeira urina matinal em tubos plásticos estéreis. As determinações analíticas de sangue e urina serão realizadas no Laboratório de Bioquímica Clínica e Análise do Hospital Universitário 'Virgen del Rocío' de Sevilha (HUVR).

Além disso, alíquotas de plasma serão enviadas ao 'Instituto de la Grasa' (IG-CSIC) para determinações bioquímicas complementares. Os técnicos de laboratório de ambas as instituições receberão as amostras identificadas com códigos de identificação alfanuméricos e, portanto, ficarão cegos para os grupos de intervenção.

Nestas visitas trimestrais, os voluntários participarão em sessões do programa de educação nutricional e receberão gratuitamente 6 L do óleo atribuído. A adesão à intervenção dietética será avaliada trimestralmente por meio do teste de conformidade auto-relatado de Haynes-Sackett e da devolução de garrafas vazias presumivelmente consumidas.

O resultado primário do estudo é a melhora no controle glicêmico, avaliada pela evolução da HbA1c. Como resultados secundários obteremos dados sobre variáveis ​​antropométricas e clínicas, bem como sobre parâmetros bioquímicos de sangue e urina.

ANAMNESE E EXAME CLÍNICO DOS PARTICIPANTES Os médicos pesquisadores do projeto terão acesso aos prontuários eletrônicos dos participantes na plataforma DIRAYA do Serviço de Saúde da Andaluzia, e realizarão a anamnese e exame físico dos participantes, que incluirá dados vitais e história médica e cirúrgica geral, bem como os tratamentos farmacológicos seguidos. Também serão obtidas informações sobre estilo de vida, percepção da própria imagem corporal, alimentação e tipo e intensidade de atividade física. Além disso, será realizado um exame clínico geral incluindo aparência geral e inspeção de mãos e braços, pés e pernas, pele, face, olhos, boca, pescoço, abdômen, edema, gânglios linfáticos e sinais vitais (temperatura, pulso, frequência respiratória e pressão arterial).

ESTUDO ANTROPOMÉTRICO E COMPOSIÇÃO CORPORAL O estudo antropométrico incluirá a determinação do peso corporal total, altura, índice de massa corporal (IMC), bem como circunferências de cintura e quadril. O estudo e avaliação dessas variáveis ​​serão realizados de acordo com as diretrizes da Sociedade Internacional para o Avanço da Kinanthropometry (ISAK). O estudo da composição corporal será realizado por bioimpedância elétrica. Massa gorda, massa magra, massa muscular, água total, massa óssea, metabolismo basal e gordura visceral serão quantificados com esta técnica, utilizando equações de predição validadas ajustadas para idade e sexo.

AVALIAÇÃO DA INGESTÃO ALIMENTAR E TREINAMENTO NUTRICIONAL Será implementado um programa de educação nutricional para avaliar a ingestão alimentar dos participantes e reforçar o cumprimento das recomendações dietéticas dadas. Para medir a ingestão alimentar, utilizaremos o formulário de registro de ingestão alimentar elaborado pela Universidade de Navarra (Espanha) e utilizado com sucesso em outros ensaios, como o estudo PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED). Este formulário é uma ferramenta validada que quantifica a ingestão alimentar em termos de porções ou grupos de alimentos para adultos residentes em Espanha. Por outro lado, todos os participantes participarão de oficinas onde receberão recomendações dietéticas específicas para pacientes com DM2, e serão orientados sobre uma alimentação saudável, as melhores opções alimentares e porções adequadas, limitando alimentos altamente processados, bolos, açúcar, alimentos gordurosos, bem como bebidas açucaradas e alcoólicas. Além disso, os pacientes obterão informações sobre receitas, listas de compras sazonais e o uso de azeite para cozinhar e temperar. Os hábitos alimentares dos participantes serão analisados ​​trimestralmente por meio de questionário recordatório de 24 horas. O software 'NUTRIUM' (https://nutrium.com/; Braga; Portugal) para avaliação nutricional das dietas.

BIOQUÍMICA SANGUÍNEA EM HUVR Em amostras de sangue ulnar, determinações relacionadas aos lipídios circulantes [triglicerídeos totais, colesterol total, LDL, HDL, apolipoproteína B total e lipoproteína A]; homeostase da glicose [glicemia, insulinemia, peptídeo C, índice HOMA-IR, HbA1c]; estresse oxidativo e inflamação [ácido úrico, bilirrubina, malondialdeído, proteína C reativa ultrassensível, hormônio estimulador da tireoide (TSH)], bem como aqueles associados a danos hepáticos e renais [lactato desidrogenase (LDH), transaminases hepáticas (ALT, AST , GGT) e creatinina] serão realizados.

O nível plasmático de vitamina B12 também será avaliado. Além disso, será avaliado o possível aparecimento de fibrose hepática através do Hepamet Fibrosis Score, método não invasivo que calcula uma pontuação levando em consideração fatores como idade, sexo, presença de diabetes, níveis de glicose, insulina, albumina, plaquetas, e AST. Esta ferramenta, desenvolvida pelo Instituto de Biomedicina de Sevilha (IBiS), é indicada para avaliar suspeitas de fibrose em pacientes com obesidade, diabetes, síndrome metabólica, esteatose hepática e/ou marcadores de função hepática anormais. O método oferece confiabilidade diagnóstica e relação custo/benefício superior a outros métodos, como o FIB-4 e o NAFLD Fibrosis Score.

MONITORAMENTO CONTÍNUO DA GLICOSE NO SANGUE A glicose plasmática será monitorada continuamente usando o sistema subcutâneo 'FreeStyle Libre' (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL.; EUA). Os sensores serão acoplados aos participantes em dois momentos ao longo do ensaio: no início do estudo e após 12 meses de acompanhamento, e coletarão dados por 48 horas. Com este sistema serão determinados diferentes parâmetros glicêmicos, como a área sob a curva (AUC), a amplitude média da excursão glicêmica (MAGE), a glicemia média, bem como o desvio padrão (DP) e o coeficiente de variação (CV).

BIOQUÍMICA DO PLASMA NO IG-CSIC Os investigadores do IG-CSIC realizarão uma série de determinações complementares em amostras de plasma, como as concentrações plasmáticas de OA, os níveis de glutationa (GSH e GSSG), a composição de ácidos graxos, adipocinas séricas (ceruloplasmina , adiponectina, leptina, resistina e grelina). Enzimas antioxidantes séricas (superóxido dismutase, catalase) e citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1β, IL-6) também serão determinadas.

Por outro lado, a fração VLDL das lipoproteínas plasmáticas será isolada por ultracentrifugação (230.000 × g por 18 horas a 4 °C). Nessas partículas será medido o conteúdo total de ácidos graxos, triglicerídeos, diglicerídeos, fosfolipídios e Apolipoproteína B total.

ANÁLISE DE URINA As primeiras amostras de urina da manhã serão analisadas para as determinações físicas, químicas e microscópicas usuais (pH, densidade, glicosúria, cetonas, nitritos, urobilinogênio, bilirrubina, sedimento, leucócitos, microalbuminúria/g creatinina). A determinação destes parâmetros também será realizada nas instalações do Laboratório de Bioquímica Clínica e Análises dos Hospitais Universitários 'Virgen del Rocío' de Sevilha.

ANÁLISE ESTATÍSTICA O ensaio será conduzido de acordo com o princípio da intenção de tratar (ITT). As variáveis ​​qualitativas serão expressas pelas suas frequências absolutas e relativas, enquanto as quantitativas com distribuição normal serão expressas pela média e desvio padrão e as com distribuição não normal pela mediana e intervalo interquartil (IIQ). As comparações entre os grupos de estudo para variáveis ​​qualitativas serão realizadas com os testes Qui-quadrado e McNemar, enquanto as comparações para variáveis ​​quantitativas serão realizadas com o teste t de Student e ANOVA. A homogeneidade das populações incluídas nos grupos de alocação será avaliada por meio do teste U de Mann-Whitney-Wilcoxon. Todos os valores P serão bicaudais em α = 0,05. A análise estatística será realizada com o software SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, EUA).