Oleanolsäure als therapeutisches Adjuvans bei Typ-2-Diabetes mellitus (OLTRAD-STUDIE) (OLTRAD)

VERSUCHSDESIGN Bei der OLTRAD-Studie handelt es sich um eine prospektive, randomisierte, doppelblinde, kontrollierte Parallelgruppenstudie, die zeigen soll, dass die regelmäßige Einnahme eines mit OA angereicherten funktionellen Olivenöls als Ergänzung zur Metformin-Therapie (als Monotherapie oder in Kombination mit …) wirksam ist andere Antidiabetika) bei der Stoffwechselkontrolle von T2DM-Patienten. Die Wirkung des mit OA angereicherten Olivenöls wird mit der des Kontrollöls verglichen, das aus demselben kommerziellen Olivenöl besteht, das nicht mit Triterpenen angereichert ist.

Aus den T2DM-Patienten, die im Endokrinologie- und Ernährungsdienst des Universitätskrankenhauses „Virgen del Rocío“ (Sevilla, SPANIEN) behandelt werden, werden insgesamt 100 Freiwillige beiderlei Geschlechts ausgewählt.

BERECHNUNG DER PROBENGRÖSSE Serumglykosyliertes Hämoglobin (HbA1c) wird als wichtigste quantitative Variable für die Analyse der Blutzuckerkontrolle verwendet. Die im Studiendesign angegebene Nullhypothese besagt, dass die OA-basierte diätetische Intervention den Ausgangs-Serum-HbA1c-Spiegel der Patienten im Vergleich zur Kontrollgruppe um mindestens 7 % senkt. Um diesen einseitigen Hypothesentest mit einem Konfidenzniveau von 95 % (α-Risiko = 0,05) und einer Trennschärfe von 95 % (β-Risiko = 0,05) zu testen, ist eine Stichprobengröße von 44 Freiwilligen pro Gruppe erforderlich. Aufgrund der Charakteristika der Studie (einer langfristigen Lebensstilintervention) kann jedoch von Teilnehmerverlusten von bis zu 15 % ausgegangen werden, was zu einer angepassten Stichprobengröße von 50 Personen pro Gruppe führt.

RANDOMISIERUNG Nach der Rekrutierung werden die 100 T2DM-Patienten nach dem Zufallsprinzip einer der beiden Studiengruppen zugeordnet. Fünfzig Personen werden der Interventionsgruppe zugeordnet, die das mit OA angereicherte funktionelle Olivenöl zu sich nimmt, während die anderen 50 Freiwilligen der Kontrollgruppe zugeordnet werden, die das gleiche nicht angereicherte Olivenöl erhält. Zum Zeitpunkt der Aufnahme wird das Studienpflegepersonal den klinischen Koordinator der Studie (Hauptprüfer 2 des Projekts) telefonisch um die Zuordnung der Teilnehmer zu den Studiengruppen bitten (zentralisierte Randomisierung). Die Zuordnung zu diesen Gruppen erfolgt anhand computergenerierter Zufallszahlentabellen. Es werden vier Randomisierungsschichten nach Geschlecht und Alter erstellt (Abschnitt 50 Jahre).

INTERVENTION Die Teilnehmer werden angewiesen, täglich 55 ml des zugewiesenen Öls einzunehmen, vorzugsweise roh und frei auf die drei Hauptmahlzeiten verteilt. Sowohl das mit OA angereicherte Olivenöl als auch das Kontrollöl werden mit alphanumerischen Codes gekennzeichnet geliefert, deren Übereinstimmung nur dem Hauptforscher 1 des Projekts bekannt ist. Dies gewährleistet eine Verblindung der klinischen Forscher und Teilnehmer hinsichtlich der Art des zugewiesenen Olivenöls.

NACHVERFOLGUNG Teilnehmer der klinischen Studie werden nach einem Plan mit vierteljährlichen Besuchen 12 Monate lang ab der Einschreibung nachbeobachtet.

Zum Zeitpunkt der Rekrutierung und danach alle drei Monate werden bei den Teilnehmern anthropometrische Messungen, Blutdruckmessungen und Herzfrequenzmessungen durchgeführt. Sie werden auch zu Magen-Darm-Erkrankungen oder anderen Arten von Beschwerden befragt und füllen einen Fragebogen zum Lebensstil (Ernährung, körperliche Aktivität, Alkohol- und Tabakkonsum), Erkrankungen und Medikamentengebrauch aus.

Ebenfalls zu Beginn der Studienteilnahme und danach alle drei Monate werden Nüchternblutproben aus der Ellenbogenvene entnommen, die in sterilen Kunststoffröhrchen mit einem Vakuumsystem gesammelt werden. Ebenso stellen die Teilnehmer Aliquots ihres ersten Morgenurins in sterilen Plastikröhrchen bereit. Die analytischen Bestimmungen in Blut und Urin werden im Labor für klinische Biochemie und Analyse des Universitätskrankenhauses „Virgen del Rocío“ in Sevilla (HUVR) durchgeführt.

Darüber hinaus werden Plasmaaliquots für ergänzende biochemische Bestimmungen an das „Instituto de la Grasa“ (IG-CSIC) geschickt. Labortechniker beider Institutionen erhalten die mit alphanumerischen ID-Codes gekennzeichneten Proben und sind daher für die Interventionsgruppen blind.

Bei diesen vierteljährlichen Besuchen nehmen Freiwillige an Sitzungen des Ernährungserziehungsprogramms teil und erhalten 6 Liter des zugewiesenen Öls kostenlos. Die Einhaltung der diätetischen Intervention wird vierteljährlich durch den selbstberichteten Compliance-Test von Haynes-Sackett und die Rückgabe leerer Flaschen, die vermutlich konsumiert wurden, beurteilt.

Das primäre Ergebnis der Studie ist die Verbesserung der Blutzuckerkontrolle, bewertet anhand der Entwicklung von HbA1c. Als Sekundärergebnisse werden wir Daten zu anthropometrischen und klinischen Variablen sowie zu biochemischen Parametern von Blut und Urin erhalten.

ANAMNESE UND KLINISCHE UNTERSUCHUNG DER TEILNEHMER Die medizinischen Forscher des Projekts haben Zugriff auf die elektronischen Krankenakten der Teilnehmer auf der Plattform DIRAYA des andalusischen Gesundheitsdienstes und führen die Anamnese und körperliche Untersuchung der Teilnehmer durch, die auch wichtige Daten umfasst und allgemeine medizinische und chirurgische Vorgeschichte sowie die durchgeführten pharmakologischen Behandlungen. Darüber hinaus werden Informationen zum Lebensstil, zur Wahrnehmung des eigenen Körperbildes, zur Ernährung sowie zur Art und Intensität der körperlichen Aktivität erhoben. Darüber hinaus wird eine allgemeine klinische Untersuchung durchgeführt, einschließlich des allgemeinen Erscheinungsbilds und der Inspektion von Händen und Armen, Füßen und Beinen, Haut, Gesicht, Augen, Mund, Hals, Bauch, Ödemen, Lymphknoten und Vitalfunktionen (Temperatur, Puls, Atemfrequenz und Blutdruck).

ANTHROPOMETRISCHE STUDIE UND KÖRPERZUSAMMENSETZUNG Die anthropometrische Studie umfasst die Bestimmung des Gesamtkörpergewichts, der Körpergröße, des Body-Mass-Index (BMI) sowie des Taillen- und Hüftumfangs. Die Untersuchung und Auswertung dieser Variablen erfolgt gemäß den Richtlinien der International Society for the Advancement of Kinanthropometry (ISAK). Die Untersuchung der Körperzusammensetzung erfolgt mittels elektrischer Bioimpedanz. Fettmasse, Muskelmasse, Gesamtwasser, Knochenmasse, Grundstoffwechsel und viszerales Fett werden mit dieser Technik unter Verwendung validierter, an Alter und Geschlecht angepasster Vorhersagegleichungen quantifiziert.

BEWERTUNG DER NAHRUNGSMITTELAUFNAHME UND ERNÄHRUNGSSCHULUNG Es wird ein Ernährungserziehungsprogramm durchgeführt, um die Nahrungsaufnahme der Teilnehmer zu bewerten und die Einhaltung der gegebenen Ernährungsempfehlungen zu stärken. Zur Messung der Nahrungsaufnahme verwenden wir das von der Universität Navarra (Spanien) entwickelte und in anderen Studien erfolgreich eingesetzte Formular zur Registrierung der Nahrungsaufnahme, beispielsweise in der Studie PREvención con DIEta MEDiterránea (PREDIMED). Bei diesem Formular handelt es sich um ein validiertes Hilfsmittel zur Quantifizierung der Nahrungsaufnahme in Form von Lebensmittelportionen oder Lebensmittelgruppen für in Spanien lebende Erwachsene. Andererseits nehmen alle Teilnehmer an Workshops teil, in denen sie spezifische Ernährungsempfehlungen für Patienten mit T2DM erhalten und über eine gesunde Ernährung, die besten Lebensmitteloptionen und angemessene Portionen sowie die Einschränkung stark verarbeiteter Lebensmittel, Kuchen, Zucker usw. informiert werden. fetthaltige Lebensmittel sowie zuckerhaltige und alkoholische Getränke. Darüber hinaus erhalten die Patienten Informationen zu Rezepten, saisonalen Einkaufslisten und der Verwendung von Olivenöl zum Kochen und Anrichten. Die Essgewohnheiten der Teilnehmer werden vierteljährlich mittels eines 24-Stunden-Recall-Fragebogens analysiert. Die Software „NUTRIUM“ (https://nutrium.com/; Braga; Portugal) zur ernährungsphysiologischen Bewertung der Diäten herangezogen.

BLUTBIOCHEMIE IN HUVR In ulnaren Blutproben, Bestimmungen im Zusammenhang mit zirkulierenden Lipiden [Gesamttriglyceride, Gesamtcholesterin, LDL, HDL, Gesamtapolipoprotein B und Lipoprotein A]; Glukosehomöostase [Glykämie, Insulinämie, C-Peptid, HOMA-IR-Index, HbA1c]; oxidativer Stress und Entzündungen [Harnsäure, Bilirubin, Malondialdehyd, ultrasensitives C-reaktives Protein, Schilddrüsen-stimulierendes Hormon (TSH)] sowie solche, die mit Leber- und Nierenschäden verbunden sind [Laktatdehydrogenase (LDH), Lebertransaminasen (ALT, AST). , GGT ) und Kreatinin] werden durchgeführt.

Der Vitamin-B12-Plasmaspiegel wird ebenfalls beurteilt. Darüber hinaus wird das mögliche Auftreten einer Leberfibrose anhand des Hepamet Fibrosis Score bewertet, einer nicht-invasiven Methode, die einen Score unter Berücksichtigung von Faktoren wie Alter, Geschlecht, Vorliegen von Diabetes, Glukosespiegel, Insulin, Albumin, Blutplättchen, berechnet. und AST. Dieses vom Seville Institute of Biomedicine (IBiS) entwickelte Tool dient zur Beurteilung des Verdachts auf Fibrose bei Patienten mit Fettleibigkeit, Diabetes, metabolischem Syndrom, Lebersteatose und/oder abnormalen Leberfunktionsmarkern. Die Methode bietet diagnostische Sicherheit und ein Kosten-Nutzen-Verhältnis, das anderen Methoden wie dem FIB-4 und dem NAFLD Fibrosis Score überlegen ist.

KONTINUIERLICHE BLUTGLUKOSEÜBERWACHUNG Der Plasmaglukosespiegel wird kontinuierlich mit dem subkutanen System „FreeStyle Libre“ (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL; USA) überwacht. Die Sensoren werden während des gesamten Versuchs zu zwei Zeitpunkten an den Teilnehmern angebracht: zu Studienbeginn und nach 12 Monaten Nachbeobachtung und erfassen 48 Stunden lang Daten. Mit diesem System werden verschiedene glykämische Parameter bestimmt, wie zum Beispiel die Fläche unter der Kurve (AUC), die mittlere Amplitude der glykämischen Exkursion (MAGE), die mittlere Glykämie sowie die Standardabweichung (SD) und der Koeffizient von Variation (Lebenslauf).

PLASMABIOCHEMIE IN IG-CSIC Die Forscher des IG-CSIC werden eine Reihe ergänzender Bestimmungen in Plasmaproben durchführen, wie z. B. die Plasmakonzentrationen von OA, die Glutathionspiegel (GSH und GSSG), die Fettsäurezusammensetzung und Serumadipokine (Coeruloplasmin). , Adiponektin, Leptin, Resistin und Ghrelin). Antioxidative Enzyme im Serum (Superoxiddismutase, Katalase) und proinflammatorische Zytokine (TNF-α, IL-1β, IL-6) werden ebenfalls bestimmt.

Andererseits wird die VLDL-Fraktion von Plasma-Lipoproteinen durch Ultrazentrifugation (230.000 × g für 18 Stunden bei 4 °C) isoliert. In diesen Partikeln wird der Gesamtgehalt an Fettsäuren, Triglyceriden, Diglyceriden, Phospholipiden und Gesamt-Apolipoprotein B gemessen.

URINANALYSE Die ersten Morgenurinproben werden auf die üblichen physikalischen, chemischen und mikroskopischen Bestimmungen analysiert (pH-Wert, Dichte, Glykosurie, Ketone, Nitrite, Urobilinogen, Bilirubin, Sediment, Leukozyten, Mikroalbuminurie/g Kreatinin). Die Bestimmung dieser Parameter wird auch in den Einrichtungen des Labors für klinische Biochemie und Analyse der Universitätskliniken „Virgen del Rocío“ in Sevilla durchgeführt.

STATISTISCHE ANALYSE Die Studie wird nach dem Intention-to-Treat-Prinzip (ITT) durchgeführt. Qualitative Variablen werden durch ihre absolute und relative Häufigkeit ausgedrückt, während quantitative Variablen mit Normalverteilung durch Mittelwert und Standardabweichung und solche mit Nichtnormalverteilung durch Median und Interquartilbereich (IQR) ausgedrückt werden. Vergleiche zwischen Studiengruppen für qualitative Variablen werden mit dem Chi-Quadrat-Test und dem McNemar-Test durchgeführt, während Vergleiche für quantitative Variablen mit dem Student-t-Test und der ANOVA durchgeführt werden. Die Homogenität der in den Zuordnungsgruppen enthaltenen Populationen wird mithilfe des Mann-Whitney-Wilcoxon-U-Tests bewertet. Alle P-Werte sind bei α = 0,05 zweiseitig. Die statistische Analyse wird mit der Software SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, USA) durchgeführt