Acido oleanolico come adiuvante terapeutico nel diabete mellito di tipo 2 (STUDIO OLTRAD) (OLTRAD)

DISEGNO DELLA PROVA Lo studio OLTRAD è uno studio prospettico, a gruppi paralleli, randomizzato, in doppio cieco, controllato, progettato per dimostrare che l'assunzione regolare di un olio d'oliva funzionale arricchito con OA è efficace in aggiunta alla terapia con metformina (come monoterapia o in combinazione con altri farmaci antidiabetici) nel controllo metabolico dei pazienti con T2DM. L'effetto dell'olio d'oliva arricchito con OA sarà confrontato con quello dell'olio di controllo, che consiste nello stesso olio d'oliva commerciale non arricchito nel triterpene.

Un totale di 100 volontari di entrambi i sessi saranno selezionati tra i pazienti con T2DM trattati presso il Servizio di Endocrinologia e Nutrizione dell'Ospedale Universitario "Virgen del Rocío" (Siviglia, SPAGNA).

CALCOLO DELLA DIMENSIONE DEL CAMPIONE L'emoglobina glicosilata sierica (HbA1c) viene adottata come principale variabile quantitativa per l'analisi del controllo glicemico. L’ipotesi nulla dichiarata nel disegno dello studio è che l’intervento dietetico basato sull’OA ridurrà i livelli sierici basali di HbA1c dei pazienti di almeno il 7%, rispetto al gruppo di controllo. Per testare questo test di ipotesi unilaterale con un livello di confidenza del 95% (rischio α = 0,05) e potenza del 95% (rischio β = 0,05), è necessaria una dimensione del campione di 44 volontari per gruppo. Tuttavia, a causa delle caratteristiche dello studio (un intervento sullo stile di vita a lungo termine), si possono ipotizzare perdite di partecipanti fino al 15%, con conseguente dimensione del campione corretta di 50 individui per gruppo.

RANDOMIZZAZIONE Una volta reclutati, i 100 pazienti con T2DM verranno assegnati in modo casuale a uno dei due gruppi di studio. Cinquanta persone verranno assegnate al gruppo di intervento, che ingerirà l'olio d'oliva funzionale arricchito con OA, mentre gli altri 50 volontari saranno assegnati al gruppo di controllo, che riceverà lo stesso olio d'oliva non arricchito. Al momento dell'ammissione, il personale infermieristico dello studio richiederà telefonicamente al coordinatore clinico della sperimentazione (Principal Investigator 2 del Progetto) l'assegnazione dei partecipanti ai gruppi di studio (randomizzazione centralizzata). L'assegnazione a questi gruppi verrà effettuata utilizzando tabelle di numeri casuali generate dal computer. Verranno costruiti quattro strati di randomizzazione in base al sesso e all'età (taglio di 50 anni).

INTERVENTO Ai partecipanti verrà chiesto di ingerire 55 ml/giorno dell'olio assegnato, preferibilmente crudo e distribuito liberamente tra i tre pasti principali. Sia l'olio d'oliva arricchito con OA che l'olio di controllo verranno consegnati etichettati con codici alfanumerici, la cui corrispondenza sarà conosciuta solo dal Ricercatore Principale 1 del progetto. Ciò garantisce l'accecamento dei ricercatori clinici e dei partecipanti rispetto al tipo di olio d'oliva assegnato.

FOLLOW-UP I partecipanti alla sperimentazione clinica saranno seguiti per 12 mesi dall'arruolamento, secondo un piano di visite trimestrali.

Al momento del reclutamento e successivamente ogni tre mesi, ai partecipanti verranno effettuate misurazioni antropometriche, della pressione sanguigna e della frequenza cardiaca. Verranno inoltre interrogati sui disturbi gastrointestinali o altri tipi di disturbi e completeranno un questionario sullo stile di vita (dieta, attività fisica, uso di alcol e tabacco), condizioni mediche e uso di farmaci.

Sempre all'inizio della partecipazione allo studio e successivamente ogni tre mesi, verranno prelevati campioni di sangue a digiuno dalla vena cubitale, che verranno raccolti in provette di plastica sterili con un sistema di vuoto. Allo stesso modo, i partecipanti forniranno aliquote della prima urina del mattino in tubi di plastica sterili. Le determinazioni analitiche nel sangue e nelle urine saranno effettuate nel Laboratorio di Biochimica Clinica e Analisi dell'Ospedale Universitario "Virgen del Rocío" di Siviglia (HUVR).

Inoltre, aliquote di plasma verranno inviate all'Instituto de la Grasa (IG-CSIC) per determinazioni biochimiche complementari. I tecnici di laboratorio di entrambe le istituzioni riceveranno i campioni identificati con codici identificativi alfanumerici e, pertanto, saranno all'oscuro rispetto ai gruppi di intervento.

In queste visite trimestrali, i volontari parteciperanno alle sessioni del programma di educazione alimentare e riceveranno gratuitamente 6 litri dell'olio assegnato. L'aderenza all'intervento dietetico sarà valutata trimestralmente attraverso il test di conformità auto-riportato di Haynes-Sackett e la restituzione delle bottiglie vuote presumibilmente consumate.

L'esito primario dello studio è il miglioramento del controllo glicemico, valutato dall'evoluzione dell'HbA1c. Come risultati secondari, otterremo dati sulle variabili antropometriche e cliniche, nonché sui parametri biochimici del sangue e delle urine.

Anamnesi ed esame clinico dei partecipanti I medici ricercatori del progetto avranno accesso alle cartelle cliniche elettroniche dei partecipanti sulla piattaforma DIRAYA del Servizio Sanitario Andaluso ed effettueranno l'anamnesi e l'esame fisico dei partecipanti, che includerà i dati vitali. e l'anamnesi medica e chirurgica generale, nonché i trattamenti farmacologici seguiti. Verranno inoltre ottenute informazioni sullo stile di vita, sulla percezione della propria immagine corporea, sull'alimentazione, sulla tipologia e sull'intensità dell'attività fisica. Inoltre, verrà effettuato un esame clinico generale comprendente l'aspetto generale e l'ispezione di mani e braccia, piedi e gambe, pelle, viso, occhi, bocca, collo, addome, edema, linfonodi e segni vitali (temperatura, polso, frequenza respiratoria e pressione sanguigna).

STUDIO ANTROPOMETRICO E COMPOSIZIONE CORPOREA Lo studio antropometrico includerà la determinazione del peso corporeo totale, dell'altezza, dell'indice di massa corporea (BMI), nonché delle circonferenze della vita e dei fianchi. Lo studio e la valutazione di queste variabili sarà effettuato secondo le linee guida della International Society for the Advancement of Kinanthropometry (ISAK). Lo studio della composizione corporea verrà effettuato mediante bioimpedenza elettrica. Massa grassa, massa magra, massa muscolare, acqua totale, massa ossea, metabolismo basale e grasso viscerale saranno quantificati con questa tecnica, utilizzando equazioni di previsione validate adattate per età e sesso.

VALUTAZIONE DELL'ASSUNZIONE DI CIBO E FORMAZIONE NUTRIZIONALE Verrà implementato un programma di educazione nutrizionale per valutare l'assunzione di cibo dei partecipanti e rafforzare il rispetto delle raccomandazioni dietetiche fornite. Per misurare l'assunzione di cibo, utilizzeremo il modulo di registrazione dell'assunzione di cibo progettato dall'Università di Navarra (Spagna) e utilizzato con successo in altri studi, come lo studio PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED). Questo modulo è uno strumento convalidato che quantifica l'assunzione di cibo in termini di porzioni di cibo o gruppi di alimenti per gli adulti che vivono in Spagna. D'altro canto, tutti i partecipanti parteciperanno a workshop in cui riceveranno raccomandazioni dietetiche specifiche per i pazienti con T2DM e verranno istruiti su una dieta sana, sulle migliori opzioni alimentari e su porzioni adeguate, limitando cibi altamente trasformati, torte, zucchero, cibi grassi e bevande zuccherate e alcoliche. Inoltre, i pazienti acquisiranno informazioni su ricette, liste della spesa stagionale e sull'uso dell'olio d'oliva per cucinare e condire. Le abitudini alimentari dei partecipanti verranno analizzate trimestralmente mediante un questionario di richiamo delle 24 ore. Il software "NUTRIUM" (https://nutrium.com/; Braga; Portogallo) per la valutazione nutrizionale delle diete verranno utilizzati.

BIOCHIMICA DEL SANGUE NELL'HUVR Nei campioni di sangue ulnare, determinazioni relative ai lipidi circolanti [trigliceridi totali, colesterolo totale, LDL, HDL, apolipoproteina B totale e lipoproteina A]; omeostasi del glucosio [glicemia, insulinemia, peptide C, indice HOMA-IR, HbA1c]; stress ossidativo e infiammazione [acido urico, bilirubina, malondialdeide, proteina C reattiva ultrasensibile, ormone stimolante la tiroide (TSH)], nonché quelli associati a danni al fegato e ai reni [lattato deidrogenasi (LDH), transaminasi epatiche (ALT, AST , GGT ) e creatinina] verranno eseguiti.

Verrà inoltre valutato il livello plasmatico di vitamina B12. Inoltre, l'eventuale comparsa di fibrosi epatica verrà valutata attraverso l'Hepamet Fibrosis Score, una metodica non invasiva che calcola un punteggio tenendo conto di fattori quali età, sesso, presenza di diabete, livelli di glucosio, insulina, albumina, piastrine, e AST. Questo strumento, progettato dall'Istituto di Biomedicina di Siviglia (IBiS), è indicato per valutare la sospetta fibrosi in pazienti con obesità, diabete, sindrome metabolica, steatosi epatica e/o marcatori di funzionalità epatica anormali. Il metodo offre affidabilità diagnostica e un rapporto costi/benefici superiore ad altri metodi, come FIB-4 e NAFLD Fibrosis Score.

MONITORAGGIO CONTINUO DEL GLUCOSIO NEL SANGUE Il glucosio plasmatico sarà monitorato continuamente utilizzando il sistema sottocutaneo "FreeStyle Libre" (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL.; USA). I sensori verranno collegati ai partecipanti due volte durante lo studio: al basale e dopo 12 mesi di follow-up, e raccoglieranno dati per 48 ore. Con questo sistema verranno determinati diversi parametri glicemici, come l'area sotto la curva (AUC), l'ampiezza media dell'escursione glicemica (MAGE), la glicemia media, nonché la deviazione standard (SD) e il coefficiente di variazione (CV).

BIOCHIMICA DEL PLASMA NELL'IG-CSIC I ricercatori dell'IG-CSIC eseguiranno una serie di determinazioni complementari in campioni di plasma, come le concentrazioni plasmatiche di OA, i livelli di glutatione (GSH e GSSG), la composizione di acidi grassi, le adipochine sieriche (ceruloplasmina , adiponectina, leptina, resistina e grelina). Verranno inoltre determinati gli enzimi antiossidanti sierici (superossido dismutasi, catalasi) e le citochine proinfiammatorie (TNF-α, IL-1β, IL-6).

D'altra parte, la frazione VLDL delle lipoproteine ​​plasmatiche sarà isolata mediante ultracentrifugazione (230.000 × g per 18 ore a 4 °C). In queste particelle verrà misurato il contenuto totale di acidi grassi, trigliceridi, digliceridi, fosfolipidi e apolipoproteina B totale.

ANALISI DELLE URINE I campioni di urina del primo mattino verranno analizzati per le consuete determinazioni fisiche, chimiche e microscopiche (pH, densità, glicosuria, chetoni, nitriti, urobilinogeno, bilirubina, sedimento, leucociti, microalbuminuria/g creatinina). La determinazione di questi parametri verrà effettuata anche nelle strutture del Laboratorio di Biochimica Clinica e Analisi dell'Ospedale Universitario "Virgen del Rocío" di Siviglia.

ANALISI STATISTICA Lo studio sarà condotto secondo il principio dell'intenzione al trattamento (ITT). Le variabili qualitative saranno espresse dalle loro frequenze assolute e relative, mentre quelle quantitative con distribuzione normale saranno espresse dalla media e dalla deviazione standard e quelle con distribuzione non normale dalla mediana e dall'intervallo interquartile (IQR). I confronti tra gruppi di studio per le variabili qualitative saranno eseguiti con il Chi-quadrato e il test di McNemar, mentre i confronti per le variabili quantitative saranno eseguiti con il t-test di Student e l'ANOVA. L'omogeneità delle popolazioni incluse nei gruppi di allocazione sarà valutata utilizzando il test U di Mann-Whitney-Wilcoxon. Tutti i valori P saranno a due code a α = 0,05. L'analisi statistica sarà eseguita con il software SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, USA).