Oleanolsyra som terapeutisk adjuvans för typ 2-diabetes mellitus (OLTRAD STUDY) (OLTRAD)

PRÖVNINGSUTFORMNING OLTRAD-studien är en prospektiv, parallellgrupp, randomiserad, dubbelblind, kontrollerad studie utformad för att visa att regelbundet intag av en OA-berikad funktionell olivolja är effektivt som tillägg till metforminbehandling (som monoterapi eller i kombination med andra antidiabetiska läkemedel) i den metaboliska kontrollen av T2DM-patienter. Effekten av den OA-berikade olivoljan kommer att jämföras med effekten av kontrolloljan, som består av samma kommersiella olivolja som inte är berikad med triterpen.

Totalt 100 frivilliga av båda könen kommer att väljas ut bland de T2DM-patienter som behandlas vid Endocrinology and Nutrition Service vid universitetssjukhuset 'Virgen del Rocío' (Sevilla, SPANIEN).

BERÄKNING AV PROVSTORLEK Serumglykosylerat hemoglobin (HbA1c) används som den huvudsakliga kvantitativa variabeln för analys av glykemisk kontroll. Nollhypotesen som anges i prövningsdesignen är att den OA-baserade kostinterventionen kommer att sänka baslinjens HbA1c-nivåer i serum hos patienter med minst 7 %, jämfört med kontrollgruppen. För att testa detta ensidiga hypotestest med en 95 % konfidensnivå (α risk = 0,05) och 95 % power (β risk = 0,05), krävs en urvalsstorlek på 44 frivilliga per grupp. På grund av studiens egenskaper (en långsiktig livsstilsintervention) kan dock deltagareförluster på upp till 15 % antas, vilket resulterar i en justerad urvalsstorlek på 50 individer per grupp.

RANDOMISERING När de väl rekryterats kommer de 100 T2DM-patienterna att slumpmässigt tilldelas en av de två studiegrupperna. Femtio personer kommer att tilldelas interventionsgruppen, som kommer att inta den OA-berikade funktionella olivoljan, medan de övriga 50 frivilliga kommer att tilldelas kontrollgruppen, som kommer att få samma icke-berikade olivolja. Vid tidpunkten för antagningen kommer studiens vårdpersonal per telefon att begära att den kliniska koordinatorn för studien (Projektets huvudutredare 2) tilldelas deltagare till studiegrupperna (centraliserad randomisering). Tilldelning till dessa grupper kommer att göras med hjälp av datorgenererade tabeller med slumptal. Fyra randomiseringsskikt kommer att konstrueras efter kön och ålder (av 50 år).

INTERVENTION Deltagarna kommer att instrueras att inta 55 ml/dag av den tilldelade oljan, helst rå och fritt fördelad mellan de tre huvudmåltiderna. Både den OA-berikade olivoljan och kontrolloljan kommer att levereras märkta med alfanumeriska koder, vars överensstämmelse endast kommer att vara känd av projektets huvudutredare 1. Detta säkerställer att de kliniska forskarna och deltagarna blir blinda med avseende på vilken typ av olivolja som tilldelas.

UPPFÖLJNING Deltagarna i den kliniska prövningen kommer att följas upp i 12 månader från inskrivningen, enligt en plan med kvartalsbesök.

Vid tidpunkten för rekryteringen och var tredje månad därefter kommer deltagarna att mätas för antropometriska mätningar, blodtrycks- och hjärtfrekvensmätningar. De kommer också att tillfrågas om gastrointestinala störningar eller andra typer av besvär, och kommer att fylla i ett frågeformulär om livsstil (kost, fysisk aktivitet, alkohol- och tobaksanvändning), medicinska tillstånd och läkemedelsanvändning.

Även i början av deltagandet i studien och var tredje månad därefter kommer fastande blodprover tas från kubitalvenen, som samlas in i sterila plaströr med vakuumsystem. På samma sätt kommer deltagarna att tillhandahålla alikvoter av sin första morgonurin i sterila plaströr. De analytiska bestämningarna i blod och urin kommer att utföras i kliniska biokemi- och analyslaboratoriet vid universitetssjukhuset 'Virgen del Rocío' i Sevilla (HUVR).

Dessutom kommer alikvoter av plasma att skickas till "Instituto de la Grasa" (IG-CSIC) för kompletterande biokemiska bestämningar. Laboratorietekniker från båda institutionerna kommer att få proverna identifierade med alfanumeriska ID-koder och kommer därför att bli blinda för interventionsgrupperna.

I dessa kvartalsbesök kommer volontärer att delta i sessioner i näringsutbildningsprogrammet och kommer att få 6 L av den tilldelade oljan gratis. Efterlevnaden av kostinterventionen kommer att bedömas kvartalsvis genom Haynes-Sacketts självrapporterade överensstämmelsetest och återlämnande av tomma flaskor som förmodligen förbrukats.

Det primära resultatet av studien är förbättringen av glykemisk kontroll, bedömd av utvecklingen av HbA1c. Som sekundära resultat kommer vi att få data om antropometriska och kliniska variabler, samt om biokemiska parametrar för blod och urin.

ANAMNES OCH KLINISK UNDERSÖKNING AV DELTAGARE De medicinska forskarna i projektet har tillgång till de elektroniska journalerna för deltagarna i plattformen DIRAYA för Andalusian Health Service, och kommer att utföra anamnesen och fysisk undersökning av deltagarna, som kommer att inkludera viktiga data och allmän medicinsk och kirurgisk historia, såväl som de farmakologiska behandlingarna som följde. Information kommer också att inhämtas om livsstil, uppfattning om den egna kroppsuppfattningen, kost och typ och intensitet av fysisk aktivitet. Dessutom kommer en allmän klinisk undersökning att genomföras inklusive allmänt utseende och inspektion av händer och armar, fötter och ben, hud, ansikte, ögon, mun, hals, buk, ödem, lymfkörtlar och vitala tecken (temperatur, puls, andningsfrekvens och blodtryck).

ANTROPOMETRISK STUDIE OCH KROPPENS SAMMANSÄTTNING Den antropometriska studien kommer att inkludera bestämning av total kroppsvikt, längd, kroppsmassaindex (BMI), samt midje- och höftomkretsar. Studien och utvärderingen av dessa variabler kommer att utföras enligt riktlinjerna från International Society for the Advancement of Kinanthropometry (ISAK). Studiet av kroppssammansättning kommer att utföras med hjälp av elektrisk bioimpedans. Fettmassa, mager massa, muskelmassa, totalt vatten, benmassa, basal metabolism och visceralt fett kommer att kvantifieras med denna teknik, med hjälp av validerade prediktionsekvationer justerade för ålder och kön.

BEDÖMNING AV MATINTAG OCH NÄRINGSTRÄNING Ett näringsutbildningsprogram kommer att genomföras för att bedöma deltagarnas matintag och förstärka efterlevnaden av de kostrekommendationer som ges. För att mäta födointag kommer vi att använda registreringsformuläret för födointag som utformats av University of Navarra (Spanien) och används framgångsrikt i andra försök, såsom PREvención con DIEta MEDiterránea (PREDIMED) studien. Detta formulär är ett validerat verktyg som kvantifierar matintag i form av matportioner eller livsmedelsgrupper för vuxna som bor i Spanien. Å andra sidan kommer alla deltagare att delta i workshops där de kommer att få specifika kostrekommendationer för patienter med T2DM, och de kommer att instrueras om en hälsosam kost, de bästa matalternativen och adekvata portioner, vilket begränsar högförädlade livsmedel, kakor, socker, fet mat samt socker- och alkoholhaltiga drycker. Dessutom kommer patienter att få information om recept, säsongsbetonade inköpslistor och användningen av olivolja för matlagning och dressing. Deltagarnas matvanor kommer att analyseras kvartalsvis med hjälp av ett 24-timmars återkallningsformulär. Programvaran 'NUTRIUM' (https://nutrium.com/; Braga; Portugal) för näringsutvärdering av dieterna kommer att användas.

BLODBIOKEMI I HUVR I ulnarblodprover, bestämningar relaterade till cirkulerande lipider [totalt triglycerider, totalt kolesterol, LDL, HDL, totalt apolipoprotein B och lipoprotein A]; glukoshomeostas [glykemi, insulinemi, C-peptid, HOMA-IR-index, HbA1c]; oxidativ stress och inflammation [urinsyra, bilirubin, malondialdehyd, ultrakänsligt C-reaktivt protein, sköldkörtelstimulerande hormon (TSH)], såväl som de som är associerade med lever- och njurskador [laktatdehydrogenas (LDH), levertransaminaser (ALT, AST) , GGT ) och kreatinin] kommer att utföras.

Plasmanivån av vitamin B12 kommer också att bedömas. Dessutom kommer det möjliga uppkomsten av leverfibros att utvärderas genom Hepamet Fibrosis Score, en icke-invasiv metod som beräknar en poäng som tar hänsyn till faktorer som ålder, kön, förekomst av diabetes, glukosnivåer, insulin, albumin, blodplättar, och AST. Detta verktyg, designat av Seville Institute of Biomedicine (IBiS), är indicerat för att bedöma misstänkt fibros hos patienter med fetma, diabetes, metabolt syndrom, leversteatos och/eller onormala leverfunktionsmarkörer. Metoden erbjuder diagnostisk tillförlitlighet och ett kostnads/nyttoförhållande som är överlägset andra metoder, såsom FIB-4 och NAFLD Fibrosis Score.

KONTINUERLIG BLODSOCKERÖVERVAKNING Plasmaglukos kommer att övervakas kontinuerligt med hjälp av det subkutana "FreeStyle Libre"-systemet (ABBOTT Diagnostics; Chicago, IL., USA). Sensorerna kommer att fästas på deltagarna vid två tillfällen under hela försöket: vid baslinjen och efter 12 månaders uppföljning, och kommer att samla in data under 48 timmar. Med detta system kommer olika glykemiska parametrar att bestämmas, såsom arean under kurvan (AUC), medelamplituden för den glykemiska avvikelsen (MAGE), medelglykemin, samt standardavvikelsen (SD) och koefficienten för variation (CV).

PLASMABIOKEMI I IG-CSIC Utredarna av IG-CSIC kommer att utföra ett antal komplementära bestämningar i plasmaprover, såsom plasmakoncentrationerna av OA, glutationnivåerna (GSH och GSSG), fettsyrasammansättningen, serumadipokiner (ceruloplasmin) adiponektin, leptin, resistin och ghrelin). Serumantioxidantenzymer (superoxiddismutas, katalas) och proinflammatoriska cytokiner (TNF-α, IL-1β, IL-6) kommer också att bestämmas.

Å andra sidan kommer VLDL-fraktionen av plasmalipoproteiner att isoleras genom ultracentrifugering (230 000 × g under 18 timmar vid 4 °C). I dessa partiklar kommer det totala innehållet av fettsyror, triglycerider, diglycerider, fosfolipider och totalt Apolipoprotein B att mätas.

URINANALYS De första morgonurinproverna kommer att analyseras för de vanliga fysikaliska, kemiska och mikroskopiska bestämningarna (pH, densitet, glykosuri, ketoner, nitriter, urobilinogen, bilirubin, sediment, leukocyter, mikroalbuminuri/g kreatinin). Bestämningen av dessa parametrar kommer också att utföras i anläggningarna vid laboratoriet för klinisk biokemi och analys vid universitetssjukhusen Virgen del Rocío i Sevilla.

STATISTISK ANALYS Försöket kommer att genomföras enligt principen intention-to-treat (ITT). Kvalitativa variabler kommer att uttryckas av deras absoluta och relativa frekvenser, medan de kvantitativa med normalfördelning kommer att uttryckas med medelvärde och standardavvikelse och de med icke-normalfördelning med median- och interkvartilområdet (IQR). Jämförelser mellan studiegrupper för kvalitativa variabler kommer att utföras med Chi-square och McNemars test, medan jämförelser för kvantitativa variabler kommer att utföras med Studentens t-test och ANOVA. Homogeniteten hos populationerna som ingår i tilldelningsgrupperna kommer att utvärderas med hjälp av Mann-Whitney-Wilcoxon U-test. Alla P-värden kommer att vara tvåsidiga vid α = 0,05. Statistisk analys kommer att utföras med SPSS 27 (IBM SPSS Statistics, NY, USA).